微生物計(jì)數(shù)及分離純化

1、微生物的計(jì)數(shù)及分離純化微生物的計(jì)數(shù)及分離純化微生物的計(jì)數(shù)微生物的計(jì)數(shù) 一、目的要求 1、了解血球計(jì)數(shù)板的構(gòu)造、計(jì)數(shù)原理和計(jì)數(shù)方法，掌握顯微鏡下直接計(jì)數(shù)的技能。 2、學(xué)習(xí)平板菌落計(jì)數(shù)的基本原理和方法 二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理 測(cè)定微生物細(xì)胞數(shù)量的方法很多，通常采用的有顯微鏡直接計(jì)數(shù)法和平板計(jì)數(shù)法。 顯微計(jì)數(shù)法適用于各種含單細(xì)胞菌體的純培養(yǎng)懸浮液，如有雜菌或雜質(zhì)，常不易分辨。菌體較大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球計(jì)數(shù)板，一般細(xì)菌則采用彼得羅夫霍澤（Petrof Hausser）細(xì)菌計(jì)數(shù)板。認(rèn)識(shí)顯微鏡鏡筒： 單筒：直立式（長(zhǎng)度為160mm）、后傾式（傾斜45） 雙筒：傾斜式轉(zhuǎn)換器： 35個(gè)孔載物臺(tái)：方

2、形、圓形 中央有一通光孔，孔的兩側(cè)裝有標(biāo)本夾，還有移動(dòng)器 （其上有刻度標(biāo)尺）調(diào)節(jié)器（粗、細(xì)）： 鏡壁上：升降鏡壁調(diào)焦 鏡壁下：升降載物臺(tái)調(diào)焦顯微鏡的使用顯微鏡的使用方法步驟：1、取鏡和安放2、對(duì)光3、觀察4、整理與存放右手握住鏡壁，左手托住鏡座把顯微鏡放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)邊緣5厘米左右處，略偏左，安裝好目鏡取鏡和安放取鏡和安放對(duì)光對(duì)光轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，使用低倍物鏡對(duì)準(zhǔn)光孔（注意不要用手扳物鏡！）觀察觀察把所要觀察的玻片標(biāo)本放在載物臺(tái)上，用夾片夾住，標(biāo)本要正對(duì)通光孔轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋，順時(shí)針旋轉(zhuǎn)，使鏡筒緩緩下降，直到物鏡接近玻片標(biāo)本為止（物鏡尖端距載玻片約0.5cm） 左眼向目鏡內(nèi)看， 同時(shí)逆時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋，使

3、鏡筒緩緩上升，直到看清物象為止。再略微轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，使看到的物象更加清晰 如果粗準(zhǔn)焦螺旋調(diào)節(jié)旋鈕旋得太快，超過(guò)焦點(diǎn)， 需要將粗準(zhǔn)焦螺旋調(diào)到最低，重新尋找焦點(diǎn) 觀察時(shí)雙眼睜開(kāi)（不疲勞），若是單筒顯微鏡也 用左眼觀察，便于繪圖。高倍高倍鏡的操作鏡的操作 1、先用低倍鏡找到目的物并移至視野中央； 2、轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，換至高倍鏡； 3、觀察目的物，同時(shí)微微上下轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，直到視野內(nèi)看到清晰的目的物為止。油鏡的操作油鏡的操作 1、先按低倍鏡到高倍鏡的操作步驟找到目的物，并將目的物移到視野中央； 2、在載玻片上滴一滴香柏油（或液體石蠟），將油鏡移至正中使鏡面浸沒(méi)在油中，剛好貼近載玻片。一般情況下，轉(zhuǎn)過(guò)油

4、鏡即可看到目的物，如果不夠清晰，回調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，即可看清目的物。 3、觀察完畢，用擦鏡紙將鏡頭的油揩干凈，另外用擦鏡紙蘸少許二甲苯揩拭鏡頭，再用擦鏡紙揩干。整理與安放整理與安放1、觀察完畢，先提升鏡筒，取下玻片標(biāo)本2、用紗布把顯微鏡表面擦干3、轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，使兩個(gè)物鏡伸向前方，將鏡筒緩緩降至最低4、將反光鏡放在直立的位置5、將顯微鏡放回原處使用注意事項(xiàng)使用注意事項(xiàng) 左手拖鏡座，右手握鏡臂。輕拿輕放。 放置：靠光源，靠體前略偏左、鏡筒在前，鏡臂在后。 讓低倍物鏡正對(duì)通光孔。轉(zhuǎn)遮光器，讓較大的光圈對(duì)準(zhǔn)通光孔。血球計(jì)數(shù)血球計(jì)數(shù)板板 是一塊特制的厚型載玻片，載玻片上有4條槽而構(gòu)成3個(gè)平臺(tái)。中間的平臺(tái)較

5、寬，其中間又被一短橫槽分隔成兩半，每個(gè)半邊上面各有一個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)，計(jì)數(shù)區(qū)的刻度有兩種：一種是計(jì)數(shù)區(qū)分為16個(gè)大方格（大方格用三線隔開(kāi)），而每個(gè)大方格又分成25個(gè)小方格；另一種是一個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)分成25個(gè)大方格（大方格之間用雙線分開(kāi)），而每個(gè)大方格又分成16個(gè)小方格。但是不管計(jì)數(shù)區(qū)是哪一種構(gòu)造，它們都有一個(gè)共同特點(diǎn)，即計(jì)數(shù)區(qū)都由400個(gè)小方格組成。血球計(jì)數(shù)板 使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)時(shí)，先要測(cè)定每個(gè)小方格中微生物的數(shù)量，再換算成每mL菌液（或每g樣品）中微生物細(xì)胞的數(shù)量。計(jì)數(shù)公式計(jì)數(shù)公式1、16格格25格的血球計(jì)數(shù)板計(jì)算公式：格的血球計(jì)數(shù)板計(jì)算公式：細(xì)胞數(shù)細(xì)胞數(shù)/ml=100小小格內(nèi)細(xì)胞格內(nèi)細(xì)胞個(gè)數(shù)個(gè)數(shù)1004

6、0010000稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)2、25格格16格的血球計(jì)數(shù)板計(jì)算公式：格的血球計(jì)數(shù)板計(jì)算公式：細(xì)胞細(xì)胞/ml=80小格內(nèi)小格內(nèi)細(xì)胞細(xì)胞個(gè)數(shù)個(gè)數(shù)8040010000稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)計(jì)算方法計(jì)算方法平板計(jì)數(shù)法平板計(jì)數(shù)法 平板菌落計(jì)數(shù)法是將待測(cè)樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋之后，其中的微生物充分分散成單個(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋樣液接種到平板上，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)，由每個(gè)單細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖而形成肉眼可見(jiàn)的菌落，即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個(gè)單細(xì)胞。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。三、實(shí)驗(yàn)器皿與材料三、實(shí)驗(yàn)器皿與材料 血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)： 顯微鏡、血球計(jì)數(shù)板、移液管、酵母菌液（或其他微生物材料）、蓋玻片、

7、擦鏡紙、吸水紙 平板計(jì)數(shù)： 1菌種 大腸桿菌菌懸液。 2培養(yǎng)基 牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基。 3儀器或其他用具1mL無(wú)菌吸管，無(wú)菌平皿，盛有4.5ml無(wú)菌水的試管，試管架，恒溫培養(yǎng)箱等。四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟1、細(xì)胞計(jì)數(shù) (1)稀釋：將樣品稀釋至適合的濃度（本實(shí)驗(yàn)用的是酵母菌），一般將樣品稀釋至每一格約有4-5個(gè)細(xì)胞數(shù)為宜。2、加被測(cè)樣品（菌液）至血球計(jì)數(shù)板：去洗凈的血球計(jì)數(shù)板，將蓋玻片蓋住中間的計(jì)數(shù)室，從計(jì)數(shù)板中間平臺(tái)兩側(cè)的溝槽內(nèi)沿蓋玻片的下邊緣摘入一小滴（不宜過(guò)多），讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計(jì)數(shù)區(qū)，勿使氣泡產(chǎn)生，并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液。血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)3、靜置片刻，將血球計(jì)數(shù)板

8、置載物臺(tái)上夾穩(wěn)，先在低倍鏡下找到計(jì)數(shù)區(qū)后，再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察并計(jì)數(shù)。由于生活細(xì)胞的折光率和水的折光率相近，觀察時(shí)應(yīng)減弱光照的強(qiáng)度。4、計(jì)數(shù)時(shí)若計(jì)數(shù)區(qū)是通常采用五點(diǎn)記數(shù)法。5、對(duì)于出芽的酵母菌，芽體達(dá)到母細(xì)胞大小一半時(shí)，即可作為兩個(gè)菌體計(jì)算。每個(gè)樣品重復(fù)計(jì)數(shù)2-3次，求出每一個(gè)小格中細(xì)胞平均數(shù)（N），按公式計(jì)算出每ml（g）菌懸液所含酵母菌細(xì)胞數(shù)量。6、 測(cè)數(shù)完畢，取下蓋玻片，用水將血球計(jì)數(shù)板沖洗干凈，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免損壞網(wǎng)格刻度。洗凈后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干，放入盒內(nèi)保存。注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 稀釋樣品時(shí)應(yīng)使用無(wú)菌水避免污染菌液。 蓋載玻片時(shí)勿使產(chǎn)生氣泡。 在低倍鏡下找到計(jì)數(shù)區(qū)后，再轉(zhuǎn)換高

9、倍鏡觀察并計(jì)數(shù)。 每個(gè)樣品重復(fù)計(jì)數(shù)2-3次（每次數(shù)值不應(yīng)相差過(guò)大，否則應(yīng)重新操作）實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 平板計(jì)數(shù)法 l編號(hào) 2稀釋 3取樣 4倒平板 5計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)計(jì)數(shù) 培養(yǎng)48h后，取出培養(yǎng)平板，算出同一稀釋度三個(gè)平板上的菌落平均數(shù)，并按下列公式進(jìn)行計(jì)算。 每毫升中菌落形成單位=同一稀釋度三次重復(fù)的平均菌落數(shù)稀釋倍數(shù)注意注意 一般選擇每個(gè)平板上長(zhǎng)有30300個(gè)菌落的稀釋度計(jì)算每毫升的含菌量較為合適。 同一稀釋度的三個(gè)重復(fù)對(duì)照的菌落數(shù)不應(yīng)相差很大，否則表示試驗(yàn)不精確。 實(shí)際工作中同一稀釋度重復(fù)對(duì)照平板不能少于三個(gè)，這樣便于數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，減少誤差。三個(gè)稀釋度計(jì)算出的每毫升菌液中菌落形成單位數(shù)也不應(yīng)相差太大。

10、注意注意 板菌落計(jì)數(shù)法，所選擇倒平板的稀釋度是很重要的。一般以三個(gè)連續(xù)稀釋度中的第二個(gè)稀釋度倒平板培養(yǎng)后所出現(xiàn)的平均菌落數(shù)在50個(gè)左右為好，否則要適當(dāng)增加或減少稀釋度加以調(diào)整。 微生物的分離純化一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康?1 了解劃線分離菌種的原理并掌握操作方法 2 掌握微生物斜面接種培養(yǎng)的方法和微生物無(wú)菌操作計(jì)數(shù)二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理 1、平板劃線法是指把雜菌樣品通過(guò)在平板表面劃線稀釋而獲得單菌落的方法，一般是將混雜在一起的不同種微生物或同種微生物群體中的不同細(xì)胞，通過(guò)在分區(qū)的平板表面做多次劃線稀釋，形成較多的獨(dú)立分布的單個(gè)細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)而繁殖成相互獨(dú)立的多個(gè)單菌落（通常認(rèn)為這種單菌落就是某個(gè)

11、微生物的“純種”） 2、平板劃線分離對(duì)細(xì)菌、酵母菌較為適宜，而霉菌和放線菌的分離多采用稀釋分離法進(jìn)行菌種的分離純化。倒平板制備梯度稀釋液劃線法（或涂布法）培養(yǎng)挑單菌落保存。 基本路線三、儀器與材料三、儀器與材料1、 菌種：大腸埃希氏菌(Escherichiacoli)和枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)的混合培養(yǎng)斜面菌種。2、培養(yǎng)基：伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基。3、器皿：無(wú)菌培養(yǎng)皿，水浴鍋，接種環(huán)，培養(yǎng)箱等四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟 1、融化培養(yǎng)基將裝有伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基的三角瓶放入熱水浴中加熱至沸，直至充分融化。 2、倒平板待培養(yǎng)基冷卻至50左右后，按無(wú)菌操作法倒平板(每皿約倒15ml)

12、，平置，待凝。 操作方法：右手持盛培養(yǎng)基的三角瓶置火焰旁邊，用右手手掌和小指將瓶塞輕輕地?fù)艹觯靠诒３謱?duì)著火焰；然后左手拿培養(yǎng)皿并將皿蓋在火焰附近打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙，迅速倒入培養(yǎng)基約15ml，加蓋后輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基均勻分布在培養(yǎng)皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即為平板。3、做分標(biāo)志區(qū) 在皿底用記號(hào)劃分成4個(gè)不同面積的區(qū)域，使ABCD，且各區(qū)的夾角應(yīng)為120左右，以便使D區(qū)與A區(qū)所劃出的線條相平行、美觀。（如圖）4、劃線操作 1)挑取菌樣：選用平整、圓滑的接種環(huán)，按無(wú)菌操作法挑取少量含菌試樣。 2)先劃A區(qū)：將平板倒置于酒精燈火焰旁，用左手取出平板的皿底，使平板表面大致垂直于桌面，

13、并讓平板面向火焰。右手持含菌的接種環(huán)，先在A區(qū)輕巧地劃34條連續(xù)的平行線當(dāng)作初步稀釋的菌源。燒去接種環(huán)上的殘余菌樣。 3)劃其余區(qū)：將燒去殘菌后的接種環(huán)在平板培養(yǎng)基邊緣冷卻一下，并使B區(qū)轉(zhuǎn)至劃線位置，把接種環(huán)通過(guò)A區(qū)(菌源區(qū))而移至B區(qū)，隨即在B區(qū)輕巧地劃上67條致密的平行線，接著再以同樣的操作在C區(qū)和D區(qū)劃上更多的平行線，并使D區(qū)的線條與A區(qū)平行(但不能與A區(qū)或B區(qū)的線條接觸！)，最后，將左手所持皿底放回皿蓋中。燒去接種環(huán)上的殘菌。 5、恒溫培養(yǎng)將劃線后的平板至37倒置培養(yǎng)23天 6、挑單菌落良好的結(jié)果應(yīng)在C區(qū)出現(xiàn)部分單菌落，而在D區(qū)出現(xiàn)較多獨(dú)立分布的單菌落 7、然后從典型的單菌落中挑取少量

14、菌體至試管斜面，經(jīng)培養(yǎng)后即為初步分離的純種。然后從典型的單菌落中挑取少量菌體至試管斜面，經(jīng)培養(yǎng)后即為初步分離的純種。 8、清洗培養(yǎng)皿將廢棄的帶菌平板作煮沸殺菌后進(jìn)行清洗、晾干。 9、保存菌種。斜面接種斜面接種 斜面接種是從已生長(zhǎng)好的菌種斜面上挑取少量菌種移植至另一支新鮮斜面。一。 實(shí)驗(yàn)步驟： (1)貼標(biāo)簽 接種前在試管上貼上標(biāo)簽，注明菌名、接種日期、接種人姓名等。貼在距試管口約2-3cm的位置。 (2)點(diǎn)燃酒精燈。 (3)接種 用接種環(huán)將少許菌種移接到貼好標(biāo)簽的試管斜面上。操作必須按無(wú)菌操作法進(jìn)行。接種的步驟接種的步驟 1)手持試管 將菌種和待接斜面的兩支試管用大拇指和其他四指握在左手中，使中

15、指位于兩試管之間部位。斜面面向操作者，并使它們位于水平位置，如圖。 2)旋松管塞 先用有于松動(dòng)棉塞或塑料管蓋，以便接種時(shí)拔出。 3)取接種環(huán) 右手拿接種環(huán)(如握鋼筆一樣)，在火焰上將環(huán)端灼燒滅菌在火焰上將環(huán)端灼燒滅菌。然后將有可能伸入試管的其余部分均灼燒滅菌，重復(fù)此操作，再灼燒一次。 4)拔管塞 用右手的無(wú)名指、小指和手掌邊先后取下菌種管和待接試管的管塞，然后讓試管口緩緩過(guò)火滅菌然后讓試管口緩緩過(guò)火滅菌(切勿切勿燒得過(guò)燙燒得過(guò)燙)。見(jiàn)圖所示。 接種的步驟接種的步驟 5)接種環(huán)冷卻 將灼燒過(guò)的接種環(huán)伸入菌種管，先使環(huán)接觸沒(méi)有長(zhǎng)菌的培養(yǎng)基部分，使其冷卻。 6)取菌 待接種環(huán)冷卻后，輕輕沾取少量菌體

16、或胞子，然后將接種環(huán)移出菌種管，注意不要使接種環(huán)的部分碰到管壁，取出后不可使帶菌接種環(huán)通過(guò)火焰。接種的步驟接種的步驟 7)接種 在火焰旁迅速將沾有菌種的接種環(huán)伸入另一支待接斜面試管。從斜面培養(yǎng)基的底部向上部作“Z”形來(lái)回密集劃線，切勿劃破培養(yǎng)基。有時(shí)也可用接種針僅在斜面培養(yǎng)基的中央拉一條直線作斜面接種，直線接種可觀察不同菌種的生長(zhǎng)特點(diǎn)。接種的步驟接種的步驟接種的步驟接種的步驟 8)塞管塞，取出接種環(huán)，灼燒試管口灼燒試管口，并在火焰旁將管塞旋上。塞棉塞時(shí)不要用試管去迎棉塞，以免試管在移動(dòng)時(shí)納入不潔空氣。 9)將接種環(huán)灼燒滅菌。放下接種環(huán)，再將棉花塞旋緊。 注： 盡量選擇獨(dú)立的單菌落進(jìn)行斜面接種，

17、經(jīng)過(guò)培養(yǎng)后即得到純菌種斜面。 只經(jīng)一次劃線，若有菌種不純，則進(jìn)行第二次或者數(shù)次劃線后得到純菌種。 操作圖操作圖五、注意五、注意事項(xiàng)事項(xiàng) 1、為防止平板表面產(chǎn)生冷凝水，倒平板前培養(yǎng)基溫度不能太高。 2、用于平板劃線的培養(yǎng)基，瓊脂含量宜高些（2%左右），否則會(huì)因平板太軟而被劃破。 3、用于劃線的接種環(huán)，環(huán)柄宜長(zhǎng)些（約10cm），環(huán)口應(yīng)十分圓滑，劃線時(shí)環(huán)口與平板間的夾角宜小些，動(dòng)作要輕巧，以防劃破平板。 4、為了取得良好的劃線效果，可事先用圓紙墊在空培養(yǎng)皿內(nèi)畫(huà)上4區(qū)，并用接種環(huán)練習(xí)劃線動(dòng)作，待通過(guò)模擬試驗(yàn)熟練操作和掌握劃線要領(lǐng)后，再正式進(jìn)行平板劃線。菌種的保藏菌種的保藏 1、低溫定期移植保藏法。 2

18、、液體石蠟保藏法。 3、沙土管保藏法。 4、濾紙片保藏法。 5、自然基質(zhì)保藏法 6、生理鹽水保藏法。 7、液氮超低溫保藏法。低溫定期移植保藏法低溫定期移植保藏法 適用范圍：適用于大多數(shù)的細(xì)菌和真菌。除草菇菌種外，其他食用菌菌種都能采用此法保藏。將需要保藏的菌種接種在適宜的斜面培養(yǎng)基上，適溫培養(yǎng)，當(dāng)菌絲健壯地長(zhǎng)滿斜面時(shí)取出，放在3-5低溫干燥處或4冰箱、冰柜中保藏，每隔4-6個(gè)月時(shí)間移植轉(zhuǎn)管一次，具體應(yīng)根據(jù)菌種特性決定。 保藏時(shí)要注意環(huán)境溫度不能太高，以防霉菌通過(guò)棉塞進(jìn)入管內(nèi)。因此，若用棉塞，可用干凈的硫酸紙或牛皮紙包扎棉塞，即可減少污染的機(jī)會(huì)，也可防止培養(yǎng)基干燥。 方法與步驟方法與步驟培養(yǎng)基制

19、備 器皿準(zhǔn)備 培養(yǎng)基制備過(guò)程中所用的一些玻璃器皿，如三角瓶、試管、培養(yǎng)皿、燒杯、吸管等，根據(jù)不同情況洗滌、干燥、包裝、滅菌后使用。 溶解培養(yǎng)基配料 先在燒杯中放適量水，按培養(yǎng)基配方稱取各項(xiàng)材料，依次將緩沖化合物、主要元素、微量元素、維生素等材料加入水中溶解，最后加足水量。 方法與步驟方法與步驟調(diào)pH值 配料溶解后將培養(yǎng)基冷卻至室溫，根據(jù)要求加稀酸或稀堿調(diào)pH值。加酸或堿液時(shí)要緩慢、少量、多次攪拌，防止局部過(guò)堿或過(guò)酸而導(dǎo)致測(cè)量不準(zhǔn)確和營(yíng)養(yǎng)成分被破壞。加凝固劑 配制固體培養(yǎng)基時(shí)需加凝固劑，如瓊脂、明膠等。將凝固劑加入液體培養(yǎng)基中，加熱并不斷攪拌至融解，再補(bǔ)足所蒸發(fā)水分。 方法與步驟方法與步驟過(guò)濾分裝 在二層紗布中間夾入脫脂棉，將配好的培養(yǎng)基趁熱過(guò)濾并分裝，斜面培養(yǎng)基不宜超過(guò)試管高度的四分之一。分裝過(guò)程中勿使培養(yǎng)基沾污管口，以免弄濕棉塞造成污染。 包扎標(biāo)記 將試管加棉塞，外面包扎一層牛皮紙或鋁箔并注明培養(yǎng)基名稱及配制日期。 滅菌 根據(jù)要求將培養(yǎng)基滅菌。滅菌后擺放斜面時(shí)，斜面長(zhǎng)度不超過(guò)試管管長(zhǎng)的二分之一為宜。 無(wú)菌檢查 將滅菌的培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中作無(wú)菌檢驗(yàn)。 接種 斜面接種液體石蠟保藏法液體石蠟保藏法 適用范圍 本方法適用于不能分解液體石蠟的酵母菌、某些細(xì)菌(如芽孢桿菌屬，醋酸桿菌屬等)和某些絲狀真菌(如青霉屬，曲霉屬等) 取化學(xué)純液體石蠟(要求不含水分、不霉變)裝于