自體CIK細胞免疫療法治療中晚期非小細胞肺癌的臨床研究

1、自體CIK細胞免疫療法治療中晚期非小細胞肺癌的臨床研究作者：魏彪， 蔣文軍, 唐小蘭 作者單位：1.宜賓市第二人民醫(yī)院腫瘤科，四川 宜賓 644000; 2.四川省腫瘤醫(yī)院內(nèi)科，成都 610041【摘要】 目的 觀察自體CIK細胞過繼性免疫療法對中晚期非小細胞肺癌患者的臨床療效。 方法 體外利用抗CD3單抗、IL2、IFN等細胞因子從患者外周血單個核細胞(PBMC)中誘導擴增CIK細胞,培養(yǎng)1114 d后，分3個療程回輸患者體內(nèi)，觀察患者臨床癥狀改善及生活質(zhì)量改善狀況，并用流式細胞儀檢測回輸前后患者T細胞亞群和NK細胞變化。 結(jié)果 86例接受自體CIK細胞治療患者中,PR+MR為72例,總緩解

2、率為83.72%。治療前、后腫瘤患者臨床癥狀有明顯改善,有顯著性差異(P<0.01)。CIK細胞經(jīng)培養(yǎng)后細胞總數(shù)和CD3、CD56 T效應(yīng)細胞均獲得大量增殖,自體回輸免疫治療后,CD3、CD4 T細胞和NK細胞比例均顯著提高(P<0.01)。 結(jié)論 從中晚期非小細胞肺癌患者外周血PBMC中可高效擴增CIK細胞，自體回輸能顯著提高患者免疫功能，改善臨床癥狀,提高生存質(zhì)量,延長患者生存期?！娟P(guān)鍵詞】 CIK細胞; 過繼免疫治療; 非小細胞肺癌The Clinical Study on the Therapeutics of Cytokineinduced Killer Cells on

3、 the Patients with Advanced Nonsmallcell Lung CancerWEI Biao1, JIANG Wenjun2, TANG Xiaolan2(1.The Second Peoples Hospital of Yibin, Sichuan Yibin 644000; 2.Cancer Hospital of Sichuan Province, Chengdu 610041, China)【Abstract】 Objective To observe the therapy effect of cytokineinduced killer (CIK) in

4、 PBMC of patients with advanced nonsmallcell lung cancer. Methods CIK cells were induced and amplified from PBMC of 68 NSCLC patients by in vitro incubation with IL2，IFN，antiCD3 monoclonal antibody for 1114 days and then transfused back to patients. The changes of T cell and NK cell of patients befo

5、re and after CIK cell treatment with FCM were tested. Results After 1114 days culture, the total number of CIK cells and CD3+，CD56+ T cells expanded greatly. After being treated with CIK cells, the numbers of CD3，CD4 T cell and NK cells of patients increased significantly (P<0.01). The clinical s

6、ymptoms of 86 patients were improved clearly. Conclusion CIK cells may be expanded effectively from patients with advanced NSCLC. The adoptive immunotherapy of autoimmunity of CIK cells can significantly enhance cellular immune function and improve the clinical symptom of patients.【Key words】 cytoki

7、neinduced killer cells; adoptive immunotherapy; nonsmallcell lung cancerCIK細胞(cytokineinduced killer cell)是目前所知殺傷活性較強的腫瘤生物治療效應(yīng)細胞，其主要表達T細胞標記的CD3細胞和表達NK標記的CD56細胞。正常情況下，人體CD3、CD56表型的細胞僅占外周血細胞的1%5%，腫瘤患者其T細胞功能則更低。自體CIK細胞免疫療法就是從人體外周血中分離CD3、CD56以及CD4、CD8等細胞，在體外大量擴增后再回輸?shù)襟w內(nèi)，以迅速提高機體T細胞免疫功能1。國內(nèi)外已有研究表明，大量輸注CIK細

8、胞的作用能提高乳腺癌等惡性腫瘤患者自身免疫細胞功能，清除手術(shù)、放、化療后體內(nèi)殘留的腫瘤細胞及微小轉(zhuǎn)移病灶，從而延緩或減少復發(fā)，提高腫瘤的治愈率和生存率。作者從2003年至2007年對86例中晚期非小細胞肺癌患者采用自體CIK細胞免疫療法進行了過繼性免疫治療，并對其臨床療效進行了觀察，現(xiàn)報告如下。1 對象與方法1.1 研究對象病例來源于宜賓市第二人民醫(yī)院、四川省腫瘤醫(yī)院、四川省人民醫(yī)院以及成都陸軍總醫(yī)院收治的晚期非小細胞肺癌患者共86例，均經(jīng)臨床及病理學檢測為中晚期惡性腫瘤，患者年齡最小37歲，最大74歲，平均年齡52.6歲。1.2 研究方法 CIK細胞體外擴增與檢測 患者常規(guī)治療結(jié)束或間隙期1

9、0 d左右,靜脈采血約50 ml，肝素抗凝,Ficoll淋巴細胞分離液(11)分離單個核細胞(PBMC),生理鹽水洗滌3次，用RPMI 1640培養(yǎng)基(含10%人AB 血清),調(diào)節(jié)密度為2×106/mL,第0 d加入2000 U/mL重組IFN約8萬單位,36.5,5% CO2孵箱培養(yǎng)24 h, 第2 d，加入IL2(終濃度為1000 U/mL)以及5 g/mL抗CD3單抗。每3天離心換培養(yǎng)液一次(第4、7、10、13 d)，同時補加IL2 100 U/mL，用臺盼藍拒染法記數(shù)PBMC,流式細胞儀檢測CD3、CD4、CD8、NK細胞中的CD16和CD57等免疫學指標。 自體CIK細胞

10、過繼性免疫治療 于培養(yǎng)兩周左右時間開始收集CIK細胞,生理鹽水洗滌3次,加入5%人血白蛋白、1 000 U/ml IL2,用生理鹽水配成250ml后靜脈回輸,隔天回輸1次,每次回輸約109個細胞，每療程3次, 回輸前均經(jīng)無菌檢測，達到質(zhì)控標準后方可回輸。 臨床相關(guān)指標的檢測 治療前及治療2周后,用流式細胞儀檢測患者外周血CD3、CD4、CD8及CD16、CD56，治療前后檢測患者體溫、血壓、肝腎功能等指標。 毒副反應(yīng)觀察 密切觀察患者接受免疫治療后是否出現(xiàn)發(fā)熱、皮疹、失眠、乏力、食欲不振等毒副反應(yīng)，根據(jù)病情予以處理。 統(tǒng)計方法 所有數(shù)據(jù)均以均值±標準差(±s)表示,統(tǒng)計檢驗

11、采用t檢驗。2 結(jié)果2.1 CIK細胞擴增與表型檢測CIK細胞于培養(yǎng)第4 d開始快速增殖,至13 d細胞增殖為1.0×1095.0×109，平均增殖100倍，CD3+、CD56+ T細胞比例由1.8%左右上升為約25%.2.2 治療前后的T細胞亞群和NK細胞變化經(jīng)自體CIK細胞免疫治療13個療程的患者，其外周血中CD3、CD4 T細胞和NK細胞(CD16、CD56)均顯著上升(P<0.05),見表1.2.3 臨床觀察情況CIK細胞回輸后,部分患者的睡眠、食欲、體力均有所改善者, 按臨床癥狀積分值下降2/3為顯著改善,積分下降1/3為部分改善,積分下降<1/3為無

12、改善,結(jié)果見表2。通過對患者行CT及B超等常規(guī)檢查，參照實體瘤療效標準，以完全緩解(CR)0，部分緩解(PR)27,輕度緩解(MR)45,穩(wěn)定(SD)12,進展(PD)2進行療效評定,總緩解率(CR+PR+MR)為83.72%.表1 患者接受CIK細胞免疫治療前后外周血免疫學指標變化表2 86例患者CIK免疫治療前后患者臨床癥狀改善分析2.4 毒副反應(yīng)觀察極少數(shù)患者(4例)細胞回輸后出現(xiàn)體溫升高(38.239.5)，經(jīng)抗生素治療處理后癥狀消失，8例患者出現(xiàn)輕度皮疹、乏力等癥狀，原因未明，大多數(shù)患者無不良反應(yīng)。3 討論過繼性免疫治療是對腫瘤患者進行輔助治療的重要手段,已在臨床上得到較多的應(yīng)用，如

13、TIL、CD3AK等細胞療法，但大都存在著體外增殖倍數(shù)不夠、毒副作用大等缺點，臨床應(yīng)用受到了限制 2。細胞因子誘導的殺傷細胞(CIK),是人外周血單個核細胞在體外經(jīng)多種細胞因子刺激后獲得的一群異質(zhì)細胞，與LAK和TIL、CD3AK等細胞相比，具有增殖速度快、殺瘤活性高、對正常骨髓造血毒性小等優(yōu)勢3，4。CIK細胞是Schmidt等于1991年率先發(fā)現(xiàn)的，該細胞共同表達了CD3和CD56兩種膜蛋白分子，是目前所知殺傷活性最強的一種腫瘤生物治療效應(yīng)細胞5，研究認為CIK細胞對腫瘤的殺傷作用是通過釋放顆粒酶、穿孔素而裂解靶細胞，對靶細胞的裂解是CIK細胞殺傷靶細胞的主要機制，也有學者認為進入體內(nèi)活化

14、的CIK細胞可分泌多種細胞因子如干擾素、腫瘤壞死因子和白介素2等,不僅對腫瘤細胞有直接抑制作用，而且還可通過調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)間接殺傷瘤細胞6，7。但腫瘤患者由于免疫功能受到極大損害，其外周血中CIK細胞極低(遠低于正常人的1%5%)，必須通過細胞生物學方法在體外大量擴增，達到一定的數(shù)量級后方可回輸。常用的CIK細胞體外培養(yǎng)擴增方法較多，其細胞增殖時間及倍數(shù)都有差異，我們采用的CD3單抗、IL2、IFN等細胞因子培養(yǎng)方法，經(jīng)過兩周左右的時間培養(yǎng)傳代，細胞數(shù)量基本能達到1×109以上。T細胞亞群和NK細胞活性是反映腫瘤患者免疫功能的重要指標，通過對比患者接受自體CIK細胞免疫治療前后，其T細

15、胞亞群和NK細胞比例的變化,能發(fā)現(xiàn)患者免疫功能改善8。我們對86例非小細胞肺癌患者，采用流式細胞儀方法檢測，結(jié)果顯示該療法可以明顯提高CD3T細胞和NK細胞(CD16、CD56)的比例(P<0.01)，緩解、提高CD4/CD8比率,增強患者的細胞免疫功能，這對于腫瘤患者及其低下的免疫功能具有具有重要意義。在改善患者臨床癥狀方面，86例 NSCLC患者經(jīng)13個療程的CIK細胞免疫治療后，總緩解率達83.72%(72/86)，見表2。多數(shù)患者臨床癥狀如倦怠乏力、失眠、食欲不振等均有明顯改善，見表3。在毒副反應(yīng)方面大多數(shù)患者無不良反應(yīng)，僅極少數(shù)(4例)出現(xiàn)不同程度的發(fā)熱，經(jīng)處理后癥狀都消失。作

16、者采用自體CIK細胞過繼性免疫療法治療86例中晚期非小細胞肺癌患者，結(jié)果表明大多數(shù)患者臨床療效較好，毒副反應(yīng)輕微，患者臨床癥狀得以改善，生活質(zhì)量明顯提高，可在一定程度上減緩NSCLC的轉(zhuǎn)移和復發(fā)，但該療法的遠期療效及其對腫瘤患者生存期的影響，仍需長期跟蹤隨訪，進一步深入研究?！緟⒖嘉墨I】1Marten A,Renoth S,Von Lilienfeld2toal M, et al. Enhanced Iytic Activity of Cytokineinduced Killer Cells Against Multiplemyeloma Cells after Coculture with

17、Idiotypepulsed Dendritic CellsJ. Haematologica, 2001,86(10):1 0291 037.2Hoffmant DM, Gitlitz BJ, Belldegrun A, et al. Adoptive Cellular TherapyJ. Semin Oncol,2000,27(2):221233.3Fu SW, Ming XL, Bing Z, et al. Antitumor Activities of Human Autologous Cytokineinduced Killer Cells Against Hepatocellular

18、 Carcinoma cells in Vitro and in VivoJ. World J Gastroenterol，2002,8(3):464468.4Maki G. Exvivo Purging of Stem Cell Autografts Using Cytotoxic CellsJ. Hematother Stem Cell Res，2001,10:545551.5SchmidtWolf IG, Lefterova P, Johnston V, et al. Sensitivity of Multidrugresistant Tumor Cell Iines to Immunologic Effector CellsJ. Cell Immunol，1996,169:8590.6Finke S, Trojaneck B, Lefterova P, et al. Increase of P