益脾通便方對脾虛便秘小鼠胃腸功能調(diào)節(jié)的研究

1、66中 醫(yī) 藥 信 息2008年第25卷第3期Information on T raditional Chinese Medicine Vol 25, No 3, 2008生成有關(guān), 此結(jié)論與王氏3等結(jié)論一致。本實驗結(jié)果還顯示, 腦心康片抗自由基生成作用雖與劑量有一定關(guān)系, 但并不完全符合量-效關(guān)系, 有關(guān)機制需進一步探討。NO 的毒性作用在于它本身與超氧陰離子(O 2 結(jié)合, 形成亞硝酸鹽過氧化物, 進而分解為 OH 和NO 2-, 它們實際上比NO 更活躍, 而具有更大的毒性。NO 在腦缺血早期升高, 隨缺血時間延長逐漸下降, 再灌注后又升高。已證明NO 在腦缺血再灌注損傷中起重要作用-4

2、-由結(jié)果可見, 再灌注2h 后, NO 明顯升高, 而腦心康片高劑量組卻可減少其生成, 說明腦心康片有抑制再灌注腦損傷引起的NO 升高作用, 已知NO 的生成與NOS 活性有密切關(guān)系, 因此, 腦心康片抑制NO 生成作用是否與影響NOS 活性有關(guān), 需進一步研究。參考文獻:1 梁榮能. 白藜蘆醇對腦缺血損傷的抗自由基作用J. 中國藥理學通報, 1996, (12 :126.2 Martz D, Beer M , Betz AL. Di methylthi ourea reduces isc hemia brain edema without affecting cerebral bl ood

3、flow J. Cereb Blood Flow Metab, 1990, (10 :352.3 Wang F, Qu L. Effect of phenolic alkaloi ds from Menispe mum daucicumon myo-cardical-isc hemia-reperfusion injury i n rabbi ts J. ActaPharmoc ol Sinica, 2001, (22 :1130.4 Gursoy-Ozdemir Y, Bolay H, et al. Role of endothelial ni tric oxide generatiion

4、and peroxynitrite formation in reperfusion inj ury after focal cerebral is themia J. Stroke, 2000, (31 :1974.。由于NO 不穩(wěn)定, 易降解成NO 2和-NO 3, 因此不易直接測定, 但通過測定其氧化代謝產(chǎn)物硝酸鹽和亞硝酸鹽可間接反映NO 的變化。本實驗利用硝酸還原酶特異性將NO 3-還原為NO 2-, 通過顯色反應測定其濃度高低, 從而反映NO 含量的變化。益脾通便方對脾虛便秘小鼠胃腸功能調(diào)節(jié)的研究楊勇1, 吳曉丹2, 任紅3, 李麗華3, 梁月華3, 王綿之1(指導(1. 北京中醫(yī)藥

5、大學, 北京100029;2. 黑龍江中醫(yī)藥大學, 黑龍江哈爾濱150040; 3. 北京大學醫(yī)學部中西醫(yī)結(jié)合教研室, 北京100083摘 要:益脾通便方是導師王綿之教授多年臨證總結(jié)的有效驗方, 臨床用于治療飲食不節(jié), 損傷脾胃, 脾胃虛損, 運化傳導不利之大便秘結(jié)。本實驗的目的在于探討益脾通便方對胃腸功能的調(diào)節(jié)作用及其可能的機理。實驗采取給小鼠灌胃易蒙停的方法建立了急性便秘模型, 并以此模型探討益脾通便方的藥效及作用機制。益脾通便方對正常小鼠的排便功能無明顯影響, 但對便秘小鼠有較好的通便作用, 且呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系; 能明顯增加便秘小鼠小腸推進; 能增加便秘小鼠的總酸排出量, 并能加強胃蛋

6、白酶的分泌, 從而促進消化; 能增加正常小鼠十二指腸、回腸、大腸各段的蠕動頻率和幅度, 從而加強胃腸動力, 能明顯增加便秘小鼠腦內(nèi)及大腸的5-HT 的含量, 說明益脾通便方可能通過影響5-HT 的釋放而調(diào)節(jié)胃腸運動。關(guān)鍵詞:脾虛; 便秘; 胃腸功能; 方劑; 實驗研究中圖分類號:R285. 5 文獻標識碼:A 文章編號:1002-2406(2008 03-0066-031 實驗材料1. 1 動物昆明小鼠雄性, 體質(zhì)量1822g, 由北京大學醫(yī)學作者簡介:楊勇(1971-, 男, 醫(yī)學博士, 北京中醫(yī)藥大學方藥系講師,主要研究方向:歷代名醫(yī)經(jīng)典名方的配伍理論和實驗研究。收稿日期:2008-01-

7、22修回日期:2008-02-10部實驗動物中心提供。適應性喂養(yǎng)1周, 飼料為市售固體飼料, 飲用水為自來水。1. 2 藥物益脾通便方(白術(shù)、炒枳實、檳榔、制香附、焦山楂、炙雞內(nèi)金、黃連、使君子、炙甘草 水煎濃縮液, 2g ml -1, 大黃水煎濃縮液1. 5g ml -1, 4 保存; 通便靈(河北省臨西縣制藥廠生產(chǎn) , 易蒙停(西安楊森制藥有限公司生產(chǎn) , 伊紅y 指示劑, 酚紅指示劑, 活性碳, 甲2008年第25卷第3期中 醫(yī) 藥 信 息Vol 25, No 3, 2008Information on Tradi tional Chinese Medicine67基橙, 五羥色胺(美國

8、Sigma 公司生產(chǎn) 。2 實驗方法脾虛便秘小鼠造模:本實驗采用飲食失節(jié)加勞逸失常方法, 結(jié)合灌止瀉藥易蒙停的復合方法造模, 小鼠每天18 冷水游泳20min, 每日2次, 每日限食4g/只, 共4周造成脾虛模型, 然后用易蒙停以1g kg -1的劑量給脾虛便秘小鼠灌胃, 造成復合脾虛便秘模型。2. 1 對脾虛便秘小鼠排便功能的影響參考文獻法, 觀察糞便的性狀(軟硬度、顆粒大小 , 記錄給藥后第1粒含指示劑糞便的排出時間及8h 內(nèi)排出的糞便粒數(shù)。2. 2 對脾虛便秘小鼠小腸推進的影響(碳末法參照文獻法2, 計算碳末推進距離與胃腸道全長的百分比。2. 3 對小鼠胃酸胃蛋白酶分泌的影響(滴定法,

9、蛋白毛細玻管法按照文獻法3, 4, 測量胃液量及總酸度、總酸排出量和胃蛋白酶活性及胃蛋白酶排出量。2. 4 對脾虛便秘小鼠離體平滑肌收縮功能的影響(離體腸管法參考文獻法51出時間長于大黃組, 但短于通便靈組。表1 益脾通便方對便秘小鼠排便功能的影響( x ! s 組別正常對照模型組通便靈組益脾通便方低益脾通便方中益脾通便方高大黃組藥物劑量0. 2ml/只0. 2ml/只1. 25g/kg 5g /kg 10g/kg 20g/kg 5g /kg排出時間(min 126. 2! 31. 7361. 23! 29. 25309. 15! 58. 23*265. 0! 67. 7*228. 75! 8

10、3. 40*186. 67! 52. 04*糞便粒數(shù)15. 8! 8. 473. 88! 2. 368. 57! 4. 16*9. 35! 3. 12*9. 78! 4. 51*10. 21! 5. 04* #*141. 26! 20. 16*-注:*與模型組比較P <0. 05, *與模型組比較P <0. 001, 與正常組比較P <0. 05, 與通便靈組比較P <0. 05, #與益脾通便方低劑量組比較P <0. 05。3. 2 對小鼠小腸推進的影響 見表2。實驗結(jié)果顯示, 益脾通便方能顯著增加便秘小鼠的小腸推進, 其作用要優(yōu)于通便靈。表2 益脾通便方對小鼠

11、小腸推進功能的影響( x ! s 組別正常對照組便秘組益脾通便方組通便靈組動物數(shù)10101010小腸推進比(% 64. 66! 12. 26*36. 82! 6. 4555. 41! 6. 35*48. 16! 3. 12* *, 測量離體腸管的頻率和幅度。2. 5 對脾虛便秘小鼠腦內(nèi)及胃腸道5-HT 的影響(熒光法參照文獻法6, 7, 在0. 4ml 的試管中, 按順序加入0. 1ml0. 5%的半胱胺酸, 2. 5ml 的OPT(鄰苯二甲醛, 0. 006%, 溶于10N 鹽酸 , 在沸水浴中加熱10min, 置入冰水浴中冷卻, 以激發(fā)光360nm, 發(fā)射光470nm 測定5-HT 的熒光

12、強度。5-H T 的空白管:將剩余的組織提取液混合取0. 4ml, 先加入0. 1ml 的高碘酸鈉(0. 02% , 其余步驟同樣品管。以上實驗結(jié)果均運用t 檢驗的方法加以統(tǒng)計分析。3 實驗結(jié)果3. 1 對便秘小鼠排便功能的影響 見表1。肉眼觀察糞便性狀, 可見便秘小鼠排出的糞便顆粒小、硬度大; 而益脾通便方中低組的小鼠排出的糞便顆粒大、糞質(zhì)軟、無稀糞; 高劑量組糞質(zhì)較稀軟, 但成形; 通便靈組小鼠排出的糞便較益脾通便方組顆粒要小, 糞質(zhì)也稍硬; 大黃組排出稀糞, 不成形。表2. 2實驗結(jié)果顯示:益脾通便方中、高劑量組均能縮短便秘小鼠第1粒含指示劑糞便的排出時間, 似乎可以看出有量效依賴的趨勢

13、, 但統(tǒng)計學分析無意義, 與模型組比較, 有顯著性差異, 但與正常組比較, 其第1粒糞便排, 1 注:*與模型組比較P <0. 001, 與通便靈組比較P <0. 01。3. 3 對小鼠胃酸和胃蛋白酶分泌的影響 見表3, 表4。結(jié)果顯示益脾通便方能顯著增加小鼠的胃酸排出量, 與通便靈比較, 有顯著性差異, 但對便秘小鼠的胃酸總酸度無明顯影響。表3 益脾通便方對小鼠胃酸分泌的影響( x ! s 組別正常對照模型組通便靈益脾通便方動物數(shù)10101010總酸度(mmol/L80. 71! 14. 2781. 50! 21. 6183. 79! 20. 3192. 03! 30. 93總酸

14、排出量(umol/h42. 57! 10. 5249. 94! 16. 2250. 16! 11. 36102. 36! 37. 06*注:*與正常組、模型組、通便靈組比較, P <0. 001。結(jié)果顯示:益脾通便方能明顯增加胃蛋白酶排出量, 與模型組和通便靈治療組比較, 有顯著性差異。表4 益脾通便方對小鼠胃蛋白酶分泌的影響( x ! s 組別正常對照模型組益脾通便方組通便靈動物數(shù)810108胃蛋白酶活性(活性單位/ml 195. 95! 12. 28190. 8! 15. 44202. 85! 15. 47203. 65! 17. 68胃蛋白酶排出量(活性單位/h 68. 67! 9

15、. 1573. 54! 14. 05149. 51! 19. 44*84. 83! 12. 53注:*68中 醫(yī) 藥 信 息2008年第25卷第3期Information on T raditional Chinese Medicine Vol 25, No 3, 20083. 4 益脾通便方對脾虛便秘小鼠腸道平滑肌功能的影響 見表5。頻率(次/min組別正常組部位給藥前十二指腸回腸大腸420! 34. 23269. 75! 21. 7425. 38! 2. 62結(jié)果顯示:益脾通便方能顯著提高脾虛便秘小鼠十二指腸、回腸、結(jié)腸的收縮頻率和幅度。幅度(cm給藥后給藥前0. 19! 0. 050.

16、29! 0. 070. 55! 0. 09給藥后0. 39! 0. 08*0. 59! 0. 15*1. 01! 0. 16*表5 益脾通便方對離體小鼠腸平滑肌的作用( x ! s 496. 25! 54. 23*304. 5! 13. 64*33. 38! 3. 58*注:*與給藥前比較P <0. 05, *與給藥前比較P <0. 001。3. 5 對小鼠腦內(nèi)及胃腸道神經(jīng)遞質(zhì)的影響 見表6。實驗結(jié)果顯示:便秘小鼠腦內(nèi)、大腸的5-HT 的含量較正常組明顯降低, 而應用益脾通便方可以明顯提高便秘小鼠腦內(nèi)及胃腸道5-HT 的含量, 有顯著性差異。便秘小鼠小腸內(nèi)5-HT 的含量也有降低的

17、趨勢, 但統(tǒng)計學上沒有差異, 應用益脾通便方有增加小腸內(nèi)5-HT 含量的趨勢。表6 益脾通便方對小鼠腦內(nèi)及胃腸道5-HT 的影響( x ! s , ug /g 組織組別正常對照組便秘模型組益脾通便方組動物數(shù)10910腦組織1. 18! 0. 170. 75! 0. 22*小腸4. 28! 1. 193. 59! 1. 204. 23! 1. 24大腸7. 61! 0. 746. 09! 0. 58*7. 32! 1. 51*1. 02! 0. 19*注:*與模型組比較P <0. 05, *與正常組比較P <0. 01。4 討論4. 1 增強胃腸道的運動益脾通便方能有效縮短便秘小鼠的

18、平均胃腸通過時間, 增加便秘小鼠的糞便排出粒數(shù), 雖然其在通便時間上長于大黃, 但從糞便性狀看, 小鼠排出成形軟便, 而大黃排出稀糞, 說明益脾通便方的通便作用是溫和的, 避免了峻下造成的氣津受損, 符合臨床攻補兼施的治療原則。進一步的實驗結(jié)果證實, 益脾通便方能加快胃排空和小腸推進, 從而縮短排便時間, 改善便秘癥狀。有報道8便秘患者有上消化道動力失常, 益脾通便方可以糾正便秘小鼠全消化道的動力減低, 從而增加排便。4. 2 增進化學消化機能益脾通便方增加胃酸和胃蛋白酶的分泌, 促進消化, 增加腸腔的容積和腸體重量, 表明其能增加腸腔分泌, 潤滑腸腔, 從而證實了其健脾助運、潤腸通便的作用。

19、4. 3 益脾通便方的可能作用機制益脾通便方能增加離體腸段的蠕動的頻率和幅度, 其促動力作用與體內(nèi)實驗結(jié)果相一致。胃腸動力受包括神經(jīng)、體液因素在內(nèi)的多種因素的影響, 其調(diào)控機制也極為復雜。離體實驗的結(jié)果說明益脾通便方能直接作用于腸道的神經(jīng)肌肉系統(tǒng), 引起平滑肌蠕動增強?，F(xiàn)代研究表明, 支配消化道的神經(jīng)以腸神經(jīng)為主, 而腸神經(jīng)系統(tǒng)(E NS 具有相對完整的獨立性, 其可以在去除外來神經(jīng)的情況下獨立完成一系列的反射活動, 如蠕動反射, 大腦和ENS 之間有某種程度的相似, 因此有人將ENS 稱為腸腦, 益脾通便方可以直接影響ENS 而發(fā)揮作用。本實驗測定了腦內(nèi)及胃腸道神經(jīng)遞質(zhì)5-HT 的含量, 結(jié)果表明, 益脾通便方能增加胃腸道及腦內(nèi)5-H T 的含量, 故認為益脾通便方主要通過增強副交感神經(jīng)的興奮性, 增加5-HT 的釋放而實現(xiàn)其影響胃腸電活動, 進而加強腸肌蠕動, 并增加胃腸道的分泌, 從而促進排便。盡管現(xiàn)在還不明確腦內(nèi)5-HT 的增加對胃腸道的運動和分泌有何影響, 但可以斷言其對胃腸道功能的調(diào)節(jié)作用是整體和局部的綜合效應。5 結(jié)論5. 1 益脾通便方有促進胃腸道運動、改善便秘癥狀的作用, 其能促進胃腸消化液的分泌, 增強消化機能, 符合中醫(yī)臨床健脾助運, 消積通便的功效。5. 2