臨床醫(yī)學(xué)檢驗主管技師考試輔導(dǎo)100

1、最新修正版第二十八章移植免疫及其免疫檢測第一節(jié) 引起排斥反應(yīng)的靶抗原第二節(jié)排斥反應(yīng)的種類及發(fā)生機制第三節(jié)HLA分型第四節(jié) 常見的組織或器官移植第五節(jié)排斥反應(yīng)的預(yù)防與治療第六節(jié)排斥反應(yīng)的免疫監(jiān)測移植是指將健康細(xì)胞、組織或器官從其原部位移植到自體或異體的一定部位、用以替代或補償機體所 喪失的結(jié)構(gòu)和（或）功能的現(xiàn)代醫(yī)療手段。被移植的細(xì)胞、組織或器官稱移植物，提供移植物的個體稱為供體，接受移植物的個體稱為受體或宿 主。第一節(jié) 引起排斥反應(yīng)的靶抗原由主要組織相容性復(fù)合體（ 移植時發(fā)生排斥反應(yīng)的主要成分,MHC編碼的人類白細(xì)胞抗原（HLA，是不同個體間進行器官或組織細(xì)胞 這種代表個體特異性的同種抗原又稱組

2、織相容性抗原或移植抗原。一、主要組織相容性抗原在進行同種異體移植時，引起移植排斥反應(yīng)最強烈的同種抗原當(dāng)屬HLA。在三類HLA分子中，I、n類分子是觸發(fā)移植排斥反應(yīng)的首要抗原，尤其是HLA-DR位點的抗原分子，其次為HLA-A、HLA-B HLA-DQ和 HLA-DP, HLA-C與移植排斥反應(yīng)無明顯關(guān)系。在移植過程中，受體的免疫細(xì)胞對移植物表面HLA的識別存在著直接和間接兩種方式。直接識別，是指受體T細(xì)胞對移植物表面完整的同種異型HLA分子的識別，無須對其加工、處理和提呈；通過直接識別，活化以CD8+CTL為主的T細(xì)胞，參與強烈的急性排斥反應(yīng)。間接識別，即受體 T細(xì)胞對APC所加工、處理的移植

3、物 HLA抗原肽的識別；間接識別則以CD4Th為主, 在慢性排斥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。二、其他組織相容性抗原特別是骨髓移植。（一）次要組織相容性抗原 盡管mHA并非主要組織相容性抗原，但在某些組織或器官移植時同樣發(fā)揮重要作用，（二）ABO血型抗原系統(tǒng)ABO血型抗原具有極為廣泛的組織分布，幾乎所有人體組織器官的血管內(nèi)皮細(xì)胞表面均含有此類抗原。 在進行器官移植時，應(yīng)力求供、受體間ABO血型的一致。（三）組織特異性抗原組織特異性抗原，是一類特異性地表達于各種器官、組織、細(xì)胞上的抗原系統(tǒng)。第二節(jié)排斥反應(yīng)的種類及發(fā)生機制移植排斥反應(yīng)是針對移植抗原產(chǎn)生免疫應(yīng)答，從而導(dǎo)致移植物功能喪失或受者機體損害的過程。根

4、據(jù)排斥反應(yīng)發(fā)生的時間、免疫損傷機制和組織病理改變等，排斥反應(yīng)可分為超急性、急性和慢性排 斥反應(yīng)。一、超急性排斥反應(yīng)超急性排斥反應(yīng)，是在移植物與受者血液循環(huán)恢復(fù)后的數(shù)分鐘至12天內(nèi)發(fā)生的不可逆轉(zhuǎn)的體液排斥反應(yīng)。常見于ABO等血型不符、多次妊娠、反復(fù)輸血或接受過器官移植者，也可發(fā)生在被移植器官灌流不暢 或缺血時間過長等情況時。超急性排斥反應(yīng)發(fā)生迅速、反應(yīng)強烈、不可逆轉(zhuǎn)。二、急性排斥反應(yīng)急性排斥反應(yīng)，發(fā)生于移植后數(shù)周至數(shù)月內(nèi)，是排斥反應(yīng)最常見的類型。1. 急性體液性排斥反應(yīng)主要由內(nèi)皮細(xì)胞表面 HLA分子的抗體所介導(dǎo)，其病理改變與超急性排斥反應(yīng)不同，不引起血栓，而是 導(dǎo)致移植組織或器官的血管炎。2.

5、急性細(xì)胞性排斥反應(yīng)又稱加速性細(xì)胞排斥反應(yīng)。發(fā)生此類排斥反應(yīng)患者的血液中，可以有抗供者的抗體，但并不一定引起 有效的脈管排斥反應(yīng)。急性細(xì)胞性排斥反應(yīng)的病理特征以移植組織或器官實質(zhì)性損傷為主，伴有淋巴細(xì)胞 和巨噬細(xì)胞浸潤。三、慢性排斥反應(yīng)慢性排斥反應(yīng)一般發(fā)生于移植后數(shù)月甚至數(shù)年，病程進展緩慢。血管壁細(xì)胞浸潤、間質(zhì)纖維化和瘢痕 形成是此類排斥反應(yīng)的病理特點，時有血管硬化性改變。纖維化的形成與在遲發(fā)型超敏反應(yīng)中活化的巨噬 細(xì)胞分泌的IL-1，以及血小板和內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的血小板源性生長因子（PDGF等有關(guān)。引起慢性排斥反應(yīng)的因素包括： T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等介導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)等免疫損傷； B細(xì)胞產(chǎn)生的抗體活

6、化補體或通過ADCC破壞血管內(nèi)皮細(xì)胞； 急性排斥反應(yīng)反復(fù)發(fā)作所導(dǎo)致的移植物組織退行性變，此與細(xì)胞和體液免疫均有關(guān)系； 非免疫相關(guān)因素，諸如局部缺血、再灌注損傷、微生物感染等。四、移植物抗宿主反應(yīng)上述三類皆屬于受體對供體的排斥反應(yīng)，即宿主抗移植物反應(yīng)（HVGR。在骨髓移植時，由于移植的骨髓也含有豐富的免疫細(xì)胞，且受體處于嚴(yán)重的免疫抑制狀態(tài)，因而對供者骨髓表現(xiàn)免疫無能，使供者骨 髓中的免疫細(xì)胞不僅得以生長，而且以受者細(xì)胞為抗原產(chǎn)生免疫應(yīng)答，引起攻擊受者的移植物抗宿主反應(yīng)（GVHR。GVHR也可見于脾、胸腺和小腸移植。第三節(jié)HLA分型一、血清學(xué)分型法血清學(xué)分型法，是應(yīng)用一系列已知抗HLA的特異性標(biāo)準(zhǔn)

7、分型血清與待測淋巴細(xì)胞混合，借助補體的生物學(xué)作用介導(dǎo)細(xì)胞裂解的細(xì)胞毒試驗。因分型血清和淋巴細(xì)胞用量少，稱為補體依賴的微量細(xì)胞毒（CDC試驗。能夠應(yīng)用該法檢測的抗原稱為SD抗原，包括 HLA-A、HLA-B、HLA-C HLA-DR HLA-DQ所有應(yīng)用HLA抗血清或抗體來確定 HLA抗原性的方法均應(yīng)屬血清學(xué)分型法，而微量細(xì)胞毒試驗只是應(yīng) 用最為廣泛的傳統(tǒng)方法。血清學(xué)分型法操作簡便易行、節(jié)約試劑、結(jié)果可靠、重復(fù)性好、無須特殊設(shè)備。其缺點是需花費大量 時間去篩選抗血清，且不同批號抗血清結(jié)果常有不同。二、細(xì)胞學(xué)分型法（一）單向MLC根據(jù)選用的刺激細(xì)胞類型，可將單向MLS為陽性和陰性分型法。1. 陰性

8、分型法 又稱純合子細(xì)胞分型法。該法使用的刺激細(xì)胞或稱標(biāo)準(zhǔn)分型細(xì)胞，系表面只具有一種 LD抗原的純合子分型細(xì)胞（HTC，其與待分型細(xì)胞混合進行單向MLC時，若待分型細(xì)胞的 LD抗原與HTC相同，則不發(fā)生或僅出現(xiàn)輕微的增殖反應(yīng)。HLA-D抗原可用陰性和陽性分型法檢測，HLA-D P抗原只用陽性分型法檢測。P LT）。2. 陽性分型法陽性分型法又稱預(yù)致敏淋巴細(xì)胞分型法（二）雙向MLCHLA不同，能相互刺激導(dǎo)致對方淋巴細(xì)遺傳型不同的兩個個體淋巴細(xì)胞在體外混合培養(yǎng)時，由于兩者 胞增殖，故稱雙向 MLC本法不能判斷型別，只能說明供、受體HLA抗原配合程度，雙向 MLC雖度與兩個體間 HLA抗原差異成正比，

9、器官或細(xì)胞移植時，應(yīng)選擇MLC最弱者為供體。三、分子生物學(xué)分型法（一）RFLP與 PCR-RFLP分型法限制性片段長度多態(tài)性（RFLP）分析，是最早建立的研究 HLA多態(tài)性的DNA分型技術(shù)。這種 HLA分型 法稱為DNA-RFLP若對DNA片段進行體外擴增，然后再用限制性內(nèi)切酶進行酶切分析，可使限制性長度分 析的敏感度大大增加，此類引入DNA體外擴增技術(shù)的限制性片段長度多態(tài)性分析則稱為P CR-RFLP分型法。PCR-RFLP分型法所應(yīng)用的PCR引物為HLA組特異性的，此法特別適應(yīng)于小量標(biāo)本的研究和異基因骨髓 移植供者的選擇。（二）P CR-SS酚型法序列特異性寡核苷酸-聚合酶鏈反應(yīng)（PCR-

10、SSO是PCR與雜交相結(jié)合的技術(shù)，從而對擴增產(chǎn)物作出HLA型別判斷。其操作過程包括待測細(xì)胞HLA基因片段擴增、擴增的DNA變性后移至固相支持物、基因雜交和DNADNA印跡或點至固相支持后者則適用于少量標(biāo)本的測定。HLA-DR HLA-DQ HLA-DP等位雜交部位的顯示。根據(jù)固相支持物所載成分的不同，通常將P CR-SS0分為兩類：斑點或印跡法：即用擴增的待測印跡或點至固相支持物，再與探針行雜交試驗；反向斑點或印跡法：系將已知 物，然后與擴增的待測 DNA（預(yù)先標(biāo)記）雜交。前者有利于大量標(biāo)本的分型，PCR-SSOin類HLA分型應(yīng)用最廣泛的方法，能夠鑒定所有已知序列的基因。HLA分型，可使分型

11、趨于規(guī)模化基因芯片是近年發(fā)展起來的一項新技術(shù)，將其與P CR-SSO吉合應(yīng)用于和自動化，尤其在 HLA多態(tài)性和疾病遺傳背景分析等方面更具優(yōu)勢。（三）P CR/SSP分 型法該方法應(yīng)用設(shè)計的一套 HLA等位基因的序列特異性引物（SSF），對待測DNA進行PCRT增，從而獲得 HLA型別特異性的擴增產(chǎn)物。（四）P CR-SSCP分 型法單鏈構(gòu)象特異性-聚合酶鏈反應(yīng)（PCR-SSCP,是以待測基因PCRT增為基礎(chǔ)，對擴增的DNA單鏈（ssDNA 的HLA分型方法。（五）SBT分型法基于序列的HLA分型法（SBT，可通過對擴增后的 HLA基因片段進行的核酸序列測定判斷HLA型另第四節(jié)常見的組織或器官移

12、植一、腎臟移植腎臟移植是臨床開展最早、應(yīng)用最多和效果最佳的一種器官移植。（一）組織配型在腎臟移植中的應(yīng)用在臨床實際工作中，供腎的選擇應(yīng)遵循以下原則：以ABO血型完全相同者為好，至少能夠相容。比較ABO配型與HLA配型在移植中的作用時發(fā)現(xiàn)， 非O型血受者，HLA相配程度與移植腎臟的存活率呈正相關(guān), 這在O型血受者則不明顯。如果無合適的腎臟選擇，而用ABO血型不合的器官時，可選擇血漿交換或免疫ABO血型配吸附法清除受者體內(nèi)預(yù)存的ABO血型抗體；組織配型是腎臟移植前選擇供者的重要手段，包括“可允許10個I類和 不強型、HLA配型和交叉配型。選擇最佳HLA配型的供者器官。由于復(fù)雜的HLA抗原系統(tǒng)，難以

13、選擇到完全匹配的腎臟。的不相容匹配法則”的提出，使供者的選擇范圍得以擴大。該法則規(guī)定的必須匹配位點，包括 5個n類HLA位點，其余的位點均為“可允許的不相容配型位點”?？傊谄鞴贌o可選擇的情況下， 調(diào)HLA配型，但AB0血型最好相容，預(yù)存的細(xì)胞毒抗體必須陰性。（二）腎移植受者的療效檢測腎移植中，急性、超急性排斥反應(yīng)和慢性排斥反應(yīng)均可出現(xiàn)。同時，因免疫抑制劑的應(yīng)用，導(dǎo)致病毒 等細(xì)胞內(nèi)寄生的微生物感染，也將影響移植物的存活和受者的健康。腎移植的療效監(jiān)測，主要依賴于受者 免疫狀態(tài)的檢測。臨床觀測的項目包括：T細(xì)胞總數(shù)、CD4/CD8比值和IL-2及其受體的檢測，以幫助判斷排斥反應(yīng)的發(fā)生和評估免疫抑

14、制劑治 療效果；組織活檢觀察腎組織炎癥細(xì)胞的浸潤或CsA中毒情況，以預(yù)測排斥反應(yīng)的發(fā)生和調(diào)整用藥劑量；根據(jù)條件，選用 RIA或HPLC法動態(tài)測定CsA血藥濃度，以指導(dǎo)合理用藥，減少腎毒性。二、肝臟移植肝臟移植手術(shù)已經(jīng)成為治療原發(fā)性膽道閉鎖、原發(fā)性膽汁性肝硬化、原發(fā)性硬化性膽管炎、肝炎后肝硬化、酒精性肝病、肝細(xì)胞性肝癌、自身免疫性肝病、急性肝功能衰竭以及藥物誘導(dǎo)的肝臟損傷等疾病，挽救晚期肝病患者生命的最有效方法。肝臟移植一般考慮實施于移植存活可達18個月以上的患者。此外,對合適的患者也可采取肝臟部分移植，此時單一供體可以用于兩個以上的受體。三、心臟移植與心肺聯(lián)合移植心肺聯(lián)合移植已成為人們可以接受

15、的治療終末期心肺疾病的一種有效方法。（一）組織配型在心臟和心肺聯(lián)合移植中的應(yīng)用心臟移植和心肺聯(lián)合移植時，應(yīng)進行ABO血型鑒定、HLA配型、淋巴細(xì)胞毒交叉配合試驗和群體反應(yīng)性抗體檢測。（二）移植受者的療效檢測T、B細(xì)胞的轉(zhuǎn)化能力；T細(xì)胞亞類百分?jǐn)?shù)及比值； CTL細(xì)胞ADCC效應(yīng)；細(xì)胞因子及其受體表達或轉(zhuǎn)錄水平；黏附分子及免疫監(jiān)測主要包括：外周血淋巴細(xì)胞總數(shù)； 毒作用；NK K細(xì)胞數(shù)及其介導(dǎo)的自然殺傷或其配體在各類細(xì)胞表達情況等，可選擇性進行。轉(zhuǎn)化生長因子在移植物免疫耐受、急性和慢性排斥反應(yīng)中 的作用也在引起人們的關(guān)注。四、骨髓與其他來源的干細(xì)胞移植（一）骨髓移植骨髓移植是移植中獨具特性的移植類型

16、，與其他器官移植不同，移植的骨髓和受者之間可同時存在HVGR和GVHR此類移植可被應(yīng)用于造血系統(tǒng)疾病和原發(fā)性免疫缺陷病的治療。根據(jù)被移植骨髓的來源，骨髓移植分為自體骨髓移植、同基因骨髓移植、同種異基因骨髓移植三種類 型。為了提高移植的成功率，應(yīng)進行HLA紅細(xì)胞血型配型。對配型不理想者，可通過適當(dāng)減少供體骨髓中的T細(xì)胞，以減輕 GVHR皮疹活檢、血清總膽紅素及結(jié)合膽紅素測定、腹瀉癥狀等，均有助于判斷GVHR勺發(fā)生?；颊咴煅δ艿幕謴?fù)可看成是移植成功。骨髓移植實際上是造血干細(xì)胞移植，因此，骨髓中造血干細(xì)胞的質(zhì)和量對移植的成敗至關(guān)重要。對造 血干細(xì)胞的測定可選用 FCM細(xì)胞培養(yǎng)、免疫標(biāo)記分析及細(xì)胞因

17、子（ CSF IL-3等）刺激等方法。當(dāng)受到腎 上腺皮質(zhì)激素、抗腫瘤藥及某些重組細(xì)胞因子等作用后，外周血CD34細(xì)胞可大幅增高，此為干細(xì)胞移植提供了另一條可能的途徑。（二）外周血和臍血干細(xì)胞移植在進行外周血和臍血干細(xì)胞移植時，應(yīng)進行相同于骨髓移植的一系列實驗室檢查，包括：HLA和AB0血型配型、血常規(guī)與骨髓檢驗、性染色體測定、造血干細(xì)胞鑒定和GVHR征象追蹤等。第五節(jié)排斥反應(yīng)的預(yù)防與治療一、組織配型（一）HLA配型在常規(guī)組織配型中，多用血清學(xué)方法作 HLA-A、HLA-B、HLA-DR配型，然而需要 MLC確定的HLA-n類分 子是否匹配，是關(guān)系到移植物能否長期存活更有用的指標(biāo)。此外，HLA氨

18、基酸殘基配型（Res M）,有助于鑒別不同型別 HLA的共同抗原。移植物存活與HLA配型的關(guān)系是：供、受者 HLA-A和HLA-B相配的位點數(shù)越多，移植物存活幾率越 高；供、受者HLA-DR位點相配更重要，因為HLA-DR和 HLA-DQ基因有很強的連鎖不平衡，DR位點相配的個體，通常DQ位點也相配；不同地區(qū)HLA匹配程度與移植結(jié)果的關(guān)系有著不同的預(yù)測價值。（二）HLA交叉配型與預(yù)存抗體的檢測移植前如果受者血清中預(yù)先存在抗供者淋巴細(xì)胞的抗體，移植后80%發(fā)生超急性排斥反應(yīng)，因此必須做HLA交叉配型，以檢測受者體內(nèi)抗供者淋巴細(xì)胞的細(xì)胞毒性抗體。根據(jù)反應(yīng)時參與的細(xì)胞成分不同，又有以下幾種具體做法：

19、1. 淋巴細(xì)胞交叉配合2. T細(xì)胞淋巴細(xì)胞毒性交叉配型3. B細(xì)胞淋巴細(xì)胞毒性交叉配型4. 流式細(xì)胞法交叉配型（FCC5. 自身交叉配型交叉配型陽性表明受者預(yù)存有抗供體的抗體。在做受體選擇時，組織配型差，但交叉配型為陰性，仍 可實施移植。然而，若交叉配型陽性，即使組織配型好，也不宜進行移植，否則將發(fā)生超急性排斥反應(yīng)。 交叉配型常用于腎臟移植，而并不用于肝、心、肺等器官移植，因為預(yù)存抗體與這些器官移植的排斥反應(yīng) 并無明顯關(guān)系。（三）群體反應(yīng)性抗體的檢測國際上，應(yīng)用群體反應(yīng)性抗體（PRA水平，判斷器官移植時受體的敏感程度。二、移植物與受體的預(yù)處理（一）移植物的預(yù)處理不同的組織器官的移植，其移植物的

20、處理不盡相同。細(xì)胞輸注已經(jīng)成為臨床移植的重要組成部分，骨髓移植、胰島細(xì)胞移植、臍帶血輸注以及胚胎干細(xì)胞 移植等的開展，開辟了臨床治療的新途徑。在上述移植過程中，既要有效地保證被移植細(xì)胞的生物學(xué)活性， 又要控制移植細(xì)胞中過客細(xì)胞的作用，防止GVHR勺發(fā)生。對移植細(xì)胞的處理多采用體外補體依賴的細(xì)胞毒作用，即選擇針對過客細(xì)胞的單克隆抗體，在補體的存在下，特異性地清除過客細(xì)胞。（二）受體的準(zhǔn)備在受者符合相應(yīng)器官移植適應(yīng)證的前提下，除了進行必要的組織配型或交叉配型外，對于接受器官移 植者，于移植前應(yīng)用一定劑量的免疫抑制劑，可有效地提高器官移植的成功率，尤其是在異基因骨髓移植 時，受者往往必須在移植前接受

21、大劑量免疫抑制劑或放療。三、免疫抑制措施器官移植成功的最大障礙是排斥反應(yīng)。移植術(shù)后，人工調(diào)節(jié)受者機體的免疫狀態(tài)是控制排斥反應(yīng)發(fā)生 的主要途徑。目前采取的措施有：使用免疫抑制劑，控制受者的免疫應(yīng)答，降低對移植物的排斥能力； 誘導(dǎo)受者對移植抗原的特異性免疫耐受。（一）免疫抑制劑的應(yīng)用常用DNAT細(xì)胞由于參與移植排斥反應(yīng)的免疫細(xì)胞以T細(xì)胞為主，因此免疫抑制藥物主要是抑制T細(xì)胞的作用，者有：1. 化學(xué)性免疫抑制劑 常用的免疫抑制劑有：環(huán)孢素（環(huán)孢菌素、環(huán)孢霉素A, CsA。糖皮質(zhì)激素。硫唑嘌呤：是一種抗代謝藥，影響合成，干擾T細(xì)胞的增殖，從而抑制自身免疫、HVGR GVHR以及DTH此外也抑制抗體生成

22、，但對的抑制強于B細(xì)胞。此類藥物的主要副作用是對骨髓和肝臟的毒性，為減少毒性作用，自環(huán)孢素問世后,常與之聯(lián)合應(yīng)用。環(huán)磷酰胺：主要作用于細(xì)胞分裂周期的G2期，分裂速度快的 B細(xì)胞比T細(xì)胞對其更為敏感。他克莫司（Tacrolimus ）:又名FK506,商品名為普樂可復(fù)（Prograf ），他克莫司的免疫抑制作用機制與環(huán) 孢素相似，通過抑制多種相關(guān)細(xì)胞因子的產(chǎn)生和表達來抑制T細(xì)胞的活化，其對 T細(xì)胞的抑制作用比環(huán)孢素強10100倍。麥考酚嗎乙酯（MMF霉酚酸酯）：是 20世紀(jì)90年代問世的一種強力而有效的新型免疫抑制劑，它 在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為活性成分霉酚酸（ MPA，通過選擇性抑制 T、B細(xì)胞的次黃嘌呤

23、單磷酸脫氫酶，阻斷了細(xì)胞 DNA和RNA的合成，抑制 T、B細(xì)胞的分化、增殖。2. 生物性免疫抑制劑ALG或抗胸腺細(xì)胞球蛋白臨床上已使用的生物性免疫抑制劑及其作用機制：抗淋巴細(xì)胞球蛋白（ （ATG。細(xì)胞性單克隆抗體：只針對單一種細(xì)胞發(fā)揮作用，其作用更加特異。某些融合蛋白：如可殺傷過客細(xì)胞的CD45單克隆抗體與蓖麻毒素的融合蛋白；能特異性殺傷IL-2R陽性T細(xì)胞的IL-2與白喉毒素的融合蛋白；阻斷 B7與CD28結(jié)合的CTLA4-lg融合蛋白等。反義寡核苷 酸，可阻斷相應(yīng)細(xì)胞因子、黏附分子和細(xì)胞分化抗原的表達。3. 某些中草藥 如雷公藤和冬蟲夏草。（二）對移植抗原特異性免疫耐受誘導(dǎo)誘導(dǎo)受體對移植

24、物的免疫耐受，可以在不影響整體免疫功能的情況下，保護移植物不被排斥，是最理想的排斥反應(yīng)防治措施。目前，仍限于研究階段，尚未應(yīng)用于臨床。第六節(jié)排斥反應(yīng)的免疫監(jiān)測一、體液免疫與細(xì)胞免疫水平檢測的臨床意義（一）體液免疫水平檢測的臨床意義1. 特異性抗體水平的檢測相關(guān)的免疫指標(biāo)包括：ABO等血型和HLA抗體、抗供者組織細(xì)胞抗體、血管內(nèi)皮細(xì)胞抗體、冷凝集素等。測定的方法，可以根據(jù)相應(yīng)抗原的特性，分別采取各種交叉配型、補體依賴 的細(xì)胞毒性試驗等。2. 補體水平的檢測 補體活性與急性移植排斥反應(yīng)的發(fā)生有關(guān)，這是因為在急性排斥反應(yīng)中，抗體發(fā)揮 著重要作用。當(dāng)移植物遭受排斥時，補體成分的消耗增加，導(dǎo)致血清中總補

25、體或單個補體成分的減少，可采用溶血法或比濁法進行檢測。此外，補體的裂解產(chǎn)物，如C3a、C3b C3d等的測定，對了解補體的活性也很有幫助，其常用的檢測方法有免疫電泳、免疫標(biāo)記技術(shù)等。（二 ）細(xì)胞免疫水平檢測的臨床意義細(xì)胞免疫水平的測定，包括參與細(xì)胞免疫的有關(guān)細(xì)胞數(shù)量、功能和細(xì)胞因子水平的檢測。不同檢測指 標(biāo)對檢測移植排斥反應(yīng)的發(fā)生、判斷排斥反應(yīng)的類型等均具有一定的臨床意義。1. 外周血T細(xì)胞及其亞類的計數(shù)免疫熒光法或流式細(xì)胞儀測定T細(xì)胞及其亞群，在急性排斥反應(yīng)臨床癥狀出現(xiàn)前15天，T細(xì)胞總數(shù)和CD4/CD8比值升高，巨細(xì)胞病毒感染時此比值降低。一般認(rèn)為，CD4/CD8比值大于1.2時，預(yù)示急性

26、排斥即將發(fā)生，而此比值小于 1.08時則發(fā)生感染的可能性很大。若進行動態(tài)監(jiān)測，對急性排斥反應(yīng)和感染具有 鑒別診斷的意義。此外，淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗也可用于T細(xì)胞總數(shù)和功能的測定，例如 4小時T細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗，是一項預(yù)報急性排斥反應(yīng)危象較為滿意的方法。2. NK細(xì)胞活性測定3. 血清細(xì)胞因子測定骨髓移植中發(fā)生的 GVHRi移植排斥反應(yīng)的特殊類型。4. 黏附分子及其配體的檢測免疫細(xì)胞以及血管內(nèi)皮細(xì)胞等細(xì)胞膜表面黏附分子及其配體的表達，與急性排斥反應(yīng)的發(fā)生密切相關(guān)。諸如ELAM-1 VCAM ICAM和HLA分子等。二、尿微量蛋白檢測的臨床意義Alb）、IgG、IgA、轉(zhuǎn)鐵蛋白（TRFTamm-Horsfall在臨床移植領(lǐng)域，尿微量蛋白的檢測，一方面有助于判斷大器官移植，尤其是腎臟移植時排斥反應(yīng)的 發(fā)生；另一方面，也可作為免疫抑制藥物肝腎毒副作用的觀察指標(biāo)。a 1微球蛋白是能較早反映腎功能損害的指標(biāo)，目前