小鼠白介素-6ELISA檢測試劑盒

1、小鼠白介素 -6 ELISA 檢測試劑盒日本 IBL 進口原裝 貨號:27768 規(guī)格： 96T前言簡介白介素 6 是一種細胞因子 ,已被證實為 B 細胞分化因子 .它是一種抗體形成系統(tǒng) , 它的生理特性 ,如肝細胞急性蛋白合成的誘導(dǎo)和基于和白介素3 協(xié)同作用的生長刺激等,也備受關(guān)注 . 并且已證實白介素 -6與病理學(xué)存在穩(wěn)定的相關(guān)關(guān)系 .例如,報 道多種疾病的生長因子為白介素 -6, 骨髓瘤細胞能合成白介素 -6 并表達白介素 -6 受體.此外, 白介素 6 在多種炎性疾病和自身免疫疾病發(fā)揮重要的作用 . 此試劑盒能高靈敏度的檢測小鼠血清和細胞基質(zhì)上清的白介素 6 原理 此試劑盒運用了兩種特

2、異性抗體 ,洗板后加入 TMB 底物液顯色 ,顯色的強度與小 鼠的白介素 -6的量成正比 .檢測范圍10.94 700 pg/mL預(yù)期用途96T此 IBL 試劑盒能用于小鼠血清 ,EDTA 血漿,細胞上清中白介素 -6 的定量檢測3 標準品 ：重組小鼠白介素 -60.5mL x 24 EIA 緩沖液 ：含 1% BSA, 0.05%吐溫 20 BPS30mL x 15 標記抗體稀釋液 ：含 1% BSA, 0.05%吐溫 20 BPS12mL x 16 顯色劑 ：TMB 底物液15mL x 17 終止液 ：1N 硫酸12mL x 18 濃縮洗滌液 ：（40 倍濃縮 ） 含 1% BSA, 0.

3、05%吐溫 20 BPS50mL x 1操作說明1 實驗所需器材 （但試劑盒沒有提供 ）酶標儀 (450nm)微移液管及其吸嘴量筒及燒杯去離子水冰箱(4 °C)坐標紙 (log/log)吸水紙試管（用于標準品稀釋 ）溫育箱（37 °C ±1°C）洗瓶 （用于洗板 ） 一次性試劑管 （用于濃縮酶標記抗體和顯色劑 ）0.4mL x 1試劑盒成分預(yù)包被板： 抗小鼠白介素-6兔子IgG親合純化 酶標記抗體 :（30倍濃縮）HRP標記抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化2準備1）洗滌液的準備試劑盒的洗滌液是一種40倍濃縮液，用1950 mL去離子水稀釋50 mL的

4、濃縮 洗滌液，制成2000mL即用稀釋洗滌液.置于冰箱內(nèi)可保存2周.2)酶標記抗體的準備試劑盒中的標記抗體是一種 30倍濃縮物,根據(jù)所需量,用標記抗體稀釋液稀釋 30倍.示例：如果你用一條板（8孔）,就需800卩L的標記抗體.就用870 uL勺標記抗體稀 釋液稀釋30 uL抗體濃縮液，充分混勻.并每孔各加100 uL 濃縮酶標記抗體需稀釋后才能用于實驗剩余的稀釋標記抗體液需密封瓶裝，存于4°C3)標準品的準備加0.5 mL的去離子水到瓶裝標準品，制成濃度為1,400 pg/mL小鼠白介素-6標 準品液4)標準品的稀釋準備8支試管，并每支各加230 u L EIA緩沖液.稀釋成如下濃度

5、，步驟如下 圖所示：試管 1700 P g/mL試管 2350 Pg/mL試管 3175 pg/ mL試管 487.5 Pg/mL試管 543.75 pg/mL試管 621.88 pg/mL試管 710.94pg/mL試管80 pg/mL（樣品空白對照）吸取230ul的標準品液于1號管混勻，然后從1號管吸取230ul加入2號管 混勻，如下圖所示，按此規(guī)律稀釋，系列標準品濃度范圍為 10.94-700 pg/mL，第8 號管為0 pg/mL作為樣品空白對照230uL standard soJuffon鶴£3 M恤r"230 wLCone. ggfmUX I i-&1

6、I7Q035： 吒 =7.5 國了£ 21 黑 門黑 :5）樣品稀釋樣品如需稀釋時，必須用EIA緩沖液進行稀釋如果樣品中小鼠白介素-6的濃度范圍一無所知的話，預(yù)先準備幾個不同稀釋濃 度的樣品液來確定最佳的檢測濃度.3實驗步驟使用前，將所有試劑應(yīng)平衡至室溫，大約 30mi n,充分混勻，確保試劑質(zhì)量無改 變，標準曲線和樣品檢測必須同時進行.試劑待檢測樣品標準品樣品空白試劑空白檢測樣品100ul稀釋標準品（1-7管）100ulEIA緩沖液（第8管）100ulEIA緩沖液 100ul蓋板，于4°C下溫育過夜洗板7次酶標抗 體100ul100ul100ul-蓋板，于4°C

7、下溫育30min洗板9次顯色劑100ul11 100ul100ul100ul室溫避光溫育30min終止液1 100ul1100ul11 100ul1100ul1)2)3)4)5)6)7)8)9)10)11)2)3)4)力卩終止液后，30min內(nèi)于 450nm 處讀取 0D 值設(shè)試劑空白對照，并于相應(yīng)的微孔中加入100ul EIA緩沖液確定好樣品空白對照孔，檢測樣品孔和標準品孔，分別將100ul樣品對照品（8號管）、檢測樣品和稀釋好的標準品（1-7號管）加入到相應(yīng)的微孔中。蓋板，4 °C下溫育過夜用洗滌瓶劇烈洗板，再加入稀釋洗滌液，靜置15-30秒，再徹底倒去孔內(nèi)反應(yīng)液 重復(fù)洗板7次.

8、最后在吸水紙上拍干，去除殘留液滴如用自動洗板機洗板，先自動洗4次，再按上述用洗瓶手工洗3次除試劑空白對照孔外，其余每孔各加100ul酶標抗體蓋板，4°C下溫育30min按照上述步驟4）洗板9次用一次性試管取所需量的顯色劑，各加100ul顯色劑于微孔中.為了避免污染，勿將剩余試劑在倒回試劑瓶中室溫避光溫育30min，加入顯色劑后溶液顏色會變成藍色每孔各加100ul終止液，溶液顏色會變成黃色擦去微孔板底部的污跡或水滴，確保微孔內(nèi)溶液無氣泡產(chǎn)生.加入終止液后30min內(nèi)于酶標儀450nm處讀取結(jié)果特別注意1）收集樣品后即盡快檢測.如需保存，凍存樣品，但要避免反復(fù)凍融.檢測前，將 樣品解凍至

9、室溫如樣品需稀釋，用EIA緩沖液稀釋 樣品和標準品建議做雙份檢測保持樣品處于中性PH范圍.有機溶劑的污染會影響實驗結(jié)果.75 6 7 8只能用本試劑盒提供的洗滌液洗板.不充足的洗板會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果 在吸水紙上拍干去除殘留液滴時，切勿用吸水紙刮擦孔內(nèi)壁 顯示劑應(yīng)避光保存并避免與金屬物質(zhì)接觸加終止液后，30 min內(nèi)就應(yīng)讀取實驗結(jié)果結(jié)果計算所有實驗數(shù)據(jù)（包括標準品，檢測樣品的OD值），都應(yīng)減去樣品空白對照的OD值. 在log-log坐標紙用，以較正的OD值為縱坐標,相對應(yīng)的濃度為橫坐標，建立標準曲 線.樣品直接在標準曲線上獲取濃度值.標準曲線示范Cone.(pg-'rnL)Absorban

10、ce450rirTi)TOO2732勢01 4991750.76587.50.40&4S750 21721 SB0.11310.040.0610 (Test SarrrpteB.ank'J0 010Example cf standard curve上圖所示典型標準曲線僅用于演示示范，不能用于試驗數(shù)據(jù)的獲取.每次實驗都應(yīng) 建立其標準曲線.使用及處理常規(guī)事項1所有試劑置于2 - 8C°保存.實驗前將試劑平衡至室溫（約30分鐘）2瓶裝標準品是凍干品，故小心打開瓶蓋3終止液是強酸物質(zhì).使用時，避免其接觸皮膚和衣膚4棄置用過的物質(zhì)前，用水沖洗5濃縮酶標抗體，EIA緩沖液和濃縮洗滌液可能會出現(xiàn)沉淀，但這并不會影響實驗6使用試劑后應(yīng)洗手7切勿混用不同批號的試劑8別使用過期的試劑9試劑盒僅供研究用，不能用于臨床診斷存儲與有