組蛋白乙酰化在嗎啡戒斷及其相關(guān)環(huán)境線索記憶中的作用研究

1、組蛋白乙?；趩岱冉鋽嗉捌湎嚓P(guān)環(huán)境線索記憶中的作用研究上海醫(yī)學(xué)院04基礎(chǔ)醫(yī)學(xué) 王雪復(fù)旦大學(xué)藥理研究中心 馬蘭 教授摘 要：目的：研究組蛋白乙?；欠裼绊懰幬锝鋽嗪铜h(huán)境線索記憶。方法：采用嗎啡慢性給藥、納洛酮急性促戒斷和去乙?；敢种苿┒∷徕c的干預(yù)形成的大鼠CPA模型，分為嗎啡生理鹽水生理鹽水組、嗎啡納洛酮生理鹽水組、嗎啡納洛酮丁酸鈉組，觀察記錄戒斷癥狀，并用免疫組化方法觀測(cè)大鼠大腦海馬下托區(qū)乙?；℉3K14Ac）水平以及c-fos蛋白的激活情況。結(jié)果：與對(duì)照組嗎啡生理鹽水生理鹽水組相比，嗎啡納洛酮生理鹽水組表現(xiàn)出明顯的戒斷癥狀，嗎啡納洛酮丁酸鈉組的戒斷癥狀依然存在，但比嗎啡納洛酮生理鹽水組相

2、對(duì)較弱。免疫組化染色中，乙?；?H3k14Ac)對(duì)照組與嗎啡納洛酮生理鹽水組相近，而嗎啡納洛酮丁酸鈉組明顯上調(diào)；c-fos水平嗎啡納洛酮丁酸鈉組最高，嗎啡納洛酮生理鹽水組居中，嗎啡生理鹽水生理鹽水組最低。結(jié)論：丁酸鈉可以減弱納洛酮形成的戒斷癥狀；已完成的部分CPA測(cè)試結(jié)果也提示納洛酮可以減弱CPA和戒斷記憶的形成（結(jié)果未給出）。組蛋白乙?；母淖兛赡芤鹆撕ｑR下托區(qū)基因表達(dá)的改變，進(jìn)而影響藥物戒斷和環(huán)境線索記憶的動(dòng)物行為學(xué)。關(guān)鍵字：藥物成癮，戒斷，條件性位置厭惡（CPA），表觀遺傳學(xué)，組蛋白乙?；疉bstract: Conditioned reinforcement is hypothes

3、ized to be critically involved in drug addiction as a factor contributing to compulsive drug use and relapse. The present study focused on the neurobiology involved in the acquisition and expression of conditioned reinforcing effects of morphine withdrawal employing a conditioned place aversion (CPA

4、) paradigm in chronic-dependent rats. On the other hand, a group of sodium butyrate pretreated mice was aimed at accessing the effect of histone acetylation. The result showed the sodium butyrate group express lighter withdrawal symptoms than the control group, which indicated sodium butyrate could,

5、 weaken the effect of naloxone. The level of c-Fos in the hippocampus following naloxone-precipitated withdrawal (including a sodium butyrate pretreated group) showed that the sodium butyrate group revealed most c-fos positive expression, the saline group revealed the least while the naloxone-only g

6、roup revealed the middle, which indicated there are indeed relationships between histone acetylation and related aversion memory, and the possible mechanism of gene expression effected by histone acetylation. Key words: drug addiction, withdrawl, Conditioned Place Aversion, epigenetic, histone acety

7、lation藥物成癮是一種慢性復(fù)發(fā)性腦疾病1 ，濫用者為了追求藥物帶來(lái)的愉悅感和欣快感，會(huì)不顧后果的尋求和使用藥物2，這種異常行為表現(xiàn)的產(chǎn)生隨著反復(fù)用藥而漸進(jìn)性發(fā)展的。研究發(fā)現(xiàn)，濫用者在停止用藥以后，即使遠(yuǎn)離藥物數(shù)月甚至更長(zhǎng)的時(shí)間，仍會(huì)因?yàn)槟承┮蛩囟T發(fā)其重新濫用藥物。這種行為在臨床上稱為復(fù)吸。濫用者長(zhǎng)期、反復(fù)濫用藥物，會(huì)造成一種機(jī)體的適應(yīng)狀態(tài)，只有繼續(xù)使用藥物才能維持正常的生理狀態(tài)，而一旦中斷用藥（或突然減少用量），便會(huì)出現(xiàn)一系列生理功能的紊亂，稱之為戒斷。 戒斷是引起復(fù)吸的一個(gè)重要原因。在藥物促戒斷過(guò)程中，給予實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一個(gè)特定的環(huán)境，它會(huì)將生理不適與當(dāng)前的環(huán)境線索聯(lián)系在一起，當(dāng)再次放入相同

8、環(huán)境后，會(huì)喚起動(dòng)物對(duì)此環(huán)境厭惡的記憶，稱為戒斷記憶。以上都說(shuō)明成癮的異常行為涉及到大腦神經(jīng)系統(tǒng)長(zhǎng)期穩(wěn)定的變化，出現(xiàn)了由藥物誘導(dǎo)的行為和神經(jīng)元突觸可塑性的穩(wěn)定變化。形成神經(jīng)元可塑性變化的重要原因可能在于精神活性物質(zhì)可以誘導(dǎo)相關(guān)腦區(qū)基因表達(dá)的改變。在動(dòng)物模型上，研究者發(fā)現(xiàn)，在伏隔核，紋狀體，杏仁核等多個(gè)成癮相關(guān)腦區(qū)都有基因（如：c-fos, BDNF等）的表達(dá)發(fā)生了改變。到目前為止的研究發(fā)現(xiàn)，基因表達(dá)有兩個(gè)重要的調(diào)控機(jī)制：一是轉(zhuǎn)錄因子如cAMP 反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)和FosB38，二是表觀遺傳學(xué)修飾。表觀遺傳是指DNA序列不發(fā)生變化，但基因表達(dá)卻發(fā)生了可遺傳的改變3。表觀遺傳學(xué)的研究?jī)?nèi)容包

9、括DNA的甲基化和染色質(zhì)重塑等。DNA的甲基化是基因組DNA 的一種主要表觀遺傳修飾形式,是調(diào)節(jié)基因組功能的重要手段。染色質(zhì)重塑是指組成核小體的組蛋白可以被多種化學(xué)加合物所修飾，如磷酸化、乙酰化和甲基化等，組蛋白的這類結(jié)構(gòu)修飾可使染色質(zhì)的構(gòu)型發(fā)生改變，從而影響轉(zhuǎn)錄因子和轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物和基因轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)區(qū)的結(jié)合，調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄。組蛋白乙?；潜碛^遺傳學(xué)修飾的一種重要形式，已知組蛋白的乙?；梢源龠M(jìn)基因轉(zhuǎn)錄，而反之去乙?；瘎t抑制基因的轉(zhuǎn)錄。Nestler4等研究結(jié)果顯示急性可卡因處理可以誘導(dǎo)大鼠紋狀體c-fos基因啟動(dòng)子區(qū)組蛋白H4乙?；黾?， 持續(xù)的可卡因刺激可以誘導(dǎo)FosB基因啟動(dòng)子區(qū)的組蛋白H3乙

10、?；?。組蛋白脫乙?；敢种苿┒∷徕c增強(qiáng)大鼠腦內(nèi)的乙?；胶?，能增強(qiáng)可卡因的獎(jiǎng)賞效應(yīng)5。這些結(jié)果提示成癮性藥物可誘導(dǎo)組蛋白乙?；?，繼而導(dǎo)致某些基因表達(dá)的改變。已有研究表明環(huán)境線索記憶能誘導(dǎo)基因表達(dá)的改變。在嗎啡的戒斷記憶中，將大鼠放回之前發(fā)生戒斷的環(huán)境中，可誘發(fā)c-fos基因的表達(dá)改變。在背景相關(guān)的記憶中也發(fā)現(xiàn)，回到以前的環(huán)境后，海馬結(jié)構(gòu)中zif268的表達(dá)上調(diào)。同時(shí)也有研究表明，背景相關(guān)的恐懼記憶模型中，抑制海馬組蛋白3的乙?；茉鰪?qiáng)大鼠的恐懼記憶。因此，本課題基于鹽酸嗎啡慢性給藥和納洛酮急性促戒斷建成的CPA模型，以c-fos蛋白作為基因表達(dá)激活標(biāo)記物，觀測(cè)大鼠海馬下托區(qū)神經(jīng)元的活動(dòng)情況，

11、以借此說(shuō)明組蛋白乙?；趩岱冉鋽嗉跋嚓P(guān)環(huán)境線索記憶中的作用機(jī)制.1 材料和方法11 藥品與器材鹽酸嗎啡注射液（Morphine Hydrochloride Injection）為沈陽(yáng)第一制藥廠 生產(chǎn)。 鹽酸納洛酮（Naloxone）為上海中科院提供。 丁酸鈉（Sodium butyrate）為上海國(guó)藥集團(tuán)公司產(chǎn)品。 C-fos rabbit抗體為Santa Cruz公司產(chǎn)品。 Anti-rabbit E為Vector公司產(chǎn)品。羊血清為Sigma公司產(chǎn)品。DAB(C12H14N4·4HCl·2H2O)為生工生物工程（上海）有限公司產(chǎn)品。 PBS、TBS為本實(shí)驗(yàn)室自配。 中性樹

12、膠（Neutral balsam）為國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)。 電熱恒溫水槽（DK-600型）為上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司制造。 CPA模型箱（30×60×30cm）為本實(shí)驗(yàn)室自備。 切片機(jī)（Leica Microsystems Nussloch GmbH Olympus）為D-69229 Nussloch。 攝片機(jī)規(guī)格為18.2 Color Mosaic。 CPA模型箱（30×60×30cm）1.2 動(dòng)物分組和慢性嗎啡處理 雄性SD大鼠20只（中國(guó)科學(xué)院上海動(dòng)物中心），體重200g左右，隨機(jī)分為5組，每組4只。其中包括嗎啡生理鹽水組(Mor + Sa

13、l + Sal)，嗎啡納洛酮組(Mor + Nal + Sal)，嗎啡納洛酮丁酸鈉組(Mor + Nal + NaB)（按丁酸鈉不同劑量100mg/kg,200mg/kg,400mg/kg分為三組）。實(shí)驗(yàn)前先將大鼠放入箱內(nèi)適應(yīng)，每次一只，一次50min，并且在適應(yīng)后的下一天測(cè)基礎(chǔ)值：將大鼠放入測(cè)試箱15min并能在兩側(cè)自由移動(dòng)，記錄它在兩側(cè)分別停留的時(shí)間，看有無(wú)基礎(chǔ)偏好。嗎啡為連續(xù)7天遞增腹腔給藥，從10mg/kg到70mg/kg。每天給藥時(shí)間為8：00和20：00，遞增量為5mg，即第一天早晨給藥10mg/kg，晚上給藥15mg/kg；第二天早晨給藥20mg/kg，晚上給藥25mg/kg，依

14、此類推。至第七天早晨給藥70mg/kg后分別做如下處理。1.3 納洛酮促戒斷，CPA模型的建立和丁酸鈉對(duì)CPA形成的影響 第七天早晨給藥70mg/kg一小時(shí)之后，嗎啡納洛酮組腹腔注射1mg/kg納洛酮，嗎啡生理鹽水組注射與上等體積的生理鹽水，嗎啡納洛酮丁酸鈉組分別注射100、200或400mg/kg丁酸納，再分別注射納洛酮1mg/kg，以上各組分別放入箱的大鼠初始偏愛(ài)側(cè)50min（插好隔板使之不能在兩側(cè)自由移動(dòng)而只能停留在一側(cè)）。觀察大鼠的戒斷癥狀，記錄下列行為的次數(shù)：濕狗樣抖、伸展、清理皮毛、吞咽、站立、跳躍、上瞼下垂，并在放入前和放入后分別稱其體重和50min的糞便重，記錄體重丟失量。1.

15、4 大鼠灌流處死及取腦 先后用250ml生理鹽水和250ml4多聚甲醛灌流以處死大鼠，取腦，先用4多聚甲醛后固定6h，再分別用20和30的蔗糖溶液脫水（20蔗糖溶液脫水約需24h，30蔗糖溶液脫水約需48h72h），速凍于-70備用。1.5 切腦片及腦片處理 將腦片從-70冰箱取出，放入切片機(jī)左邊的槽中。一般將刀片（切頭）溫度調(diào)為-20，切片機(jī)箱體溫度調(diào)為25。腦片厚度定為30m。切至側(cè)腦室等較易觀察的地方時(shí)調(diào)節(jié)底座方向使兩側(cè)對(duì)稱。當(dāng)發(fā)現(xiàn)明顯突起的上丘時(shí)可開(kāi)始保留所切腦片，將玻璃蓋板放下，勻速連續(xù)切腦片710片，用毛筆輕輕挑起放入盛有保護(hù)液的小燒杯中，再移至盛有保護(hù)液的12孔板中，標(biāo)記，置于2

16、0冰箱備用。1.6 免疫組化 用ABC染色法觀察c-fos在海馬下托區(qū)被激活的情況從冰箱中取出樣品（每組3張腦片），用PBS洗三次，每次十分鐘（置于搖床上），洗后用濾紙吸水。取anti c-fos Rabbit 0.3l，按1:2000滴度稀釋，放入一抗稀釋液600l（其中含92PBS，5山羊血清，2TritonX-100(濃度10)）中。 將一抗稀釋液分裝在EP管中，每管120l，分別做標(biāo)記，放入相應(yīng)腦片，在搖床上shake一小時(shí)，放入4冰箱過(guò)夜。次日，取出腦片，用PBS洗三次，每次十分鐘（置于搖床上），洗后用濾紙吸水。取l，按1:500滴度稀釋，放入600l稀釋液中，將此稀釋液分裝在EP管

17、中，每管120l，分別做標(biāo)記，放入相應(yīng)腦片，在搖床上shake一小時(shí)。取出腦片，用PBS洗三次，每次十分鐘（置于搖床上），洗后用濾紙吸水。配置AB液，內(nèi)含1.2lA、1.2lB和600l稀釋液，EP管分裝，室溫下孵育40min。取出腦片，用PBS洗三次，再用TBS洗一次，每次十分鐘（置于搖床上）。配DAB液，內(nèi)含12mlTBS、6mgDAB、6l30H2O2，分裝在12孔板中，每孔2ml，將腦片放入。染色約5min用自來(lái)水中止顯色，裱片，過(guò)夜晾干。第三日，依次將裱好腦片的載玻片浸入75、85、95、100的酒精中脫水，每次10min。再浸入二甲苯中10min，使之透明。待干燥，用中性樹脂加蓋玻

18、片封片。 用ABC染色法觀察海馬下托區(qū)乙?；℉3Ac(14K)）的情況從冰箱中取出樣品（每組3張腦片），用PBS洗三次，每次十分鐘（置于搖床上），洗后用濾紙吸水。取H3Ac(K14) rabbit 1.2l，按1:500滴度稀釋，放入一抗稀釋液600l（其中含92PBS，5山羊血清，2TritonX-100(濃度10)）中。 將一抗稀釋液分裝在EP管中，每管120l，分別做標(biāo)記，放入相應(yīng)腦片，在搖床上shake一小時(shí)，放入4冰箱過(guò)夜。次日，取出腦片，用PBS洗三次，每次十分鐘（置于搖床上），洗后用濾紙吸水。取l，按1:500滴度稀釋，放入600l稀釋液中，將此稀釋液分裝在EP管中，每管120

19、l，分別做標(biāo)記，放入相應(yīng)腦片，在搖床上shake一小時(shí)。取出腦片，用PBS洗三次，每次十分鐘（置于搖床上），洗后用濾紙吸水。配置AB液，內(nèi)含1.2lA、1.2lB和600l稀釋液，EP管分裝，室溫下孵育40min。取出腦片，用PBS洗三次，再用TBS洗一次，每次十分鐘（置于搖床上）。配DAB液，內(nèi)含12mlTBS、6mgDAB、6l30H2O2，分裝在12孔板中，每孔2ml，將腦片放入。染色約5min用自來(lái)水中止顯色，裱片，過(guò)夜晾干。第三日，依次將裱好腦片的載玻片浸入75、85、95、100的酒精中脫水，每次10min。再浸入二甲苯中10min，使之透明。待干燥，用中性樹脂加蓋玻片封片。1.7

20、 顯微鏡攝片，統(tǒng)計(jì) 用Olympus顯微鏡攝片，用Image-Pro Plus 5.1軟件分析，并用Simga Plot v9.0軟件統(tǒng)計(jì)數(shù)目。2 結(jié)果2.1 戒斷癥狀納洛酮促戒斷癥狀明顯，大鼠表現(xiàn)出激惹、腹瀉、跳躍、體重減輕等癥狀。與對(duì)照組相比，嗎啡納洛酮生理鹽水組和嗎啡納洛酮丁酸納組均比嗎啡生理鹽水生理鹽水組具有更明顯的戒斷癥狀。如表1所示。戒斷癥狀大鼠編號(hào)戒斷前體重（g）戒斷后體重（g）體重減輕（g）濕狗樣抖清理皮毛伸展跳躍上瞼下垂MorNS1015000201000330200004023000Mor+NAL511015613431705436813225905221Mor+Nal+1

21、00mg/kg丁酸鈉1009200113570312040041315201Mor+Nal+200mg/kg丁酸鈉140131101523917161751111708104Mor+Nal+400mg/kg丁酸鈉18212171319012515720137682102513表1由圖1所示，其中體重減輕作為最明顯和易于評(píng)估的一項(xiàng)指標(biāo)，經(jīng)卡方檢驗(yàn)可發(fā)現(xiàn)，納洛酮處理的大鼠與對(duì)照組對(duì)比的p<0.05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明納洛酮可以使大鼠產(chǎn)生戒斷癥狀。經(jīng)丁酸鈉預(yù)處理的三組從圖中發(fā)現(xiàn)，丁酸鈉可以減弱納洛酮產(chǎn)生的戒斷癥狀，其中丁酸鈉200mg/kg的劑量可使戒斷癥狀減弱程度最小（本次實(shí)驗(yàn)p>0

22、.05，可以增大樣本空間進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)繼續(xù)測(cè)量）。 Mor+NS NSMor+NALMor+NAL+naBu100Mor+NAL+naBu200Mor+NAL+naBu400圖12.2 免疫組化2.2.1 乙?；旧℉3K14Ac）由圖2所示，嗎啡生理鹽水生理鹽水組和嗎啡納洛酮生理鹽水組的H3K14Ac水平接近，嗎啡納洛酮丁酸鈉組的H3K14Ac水平最高。（其中嗎啡納洛酮丁酸鈉組的丁酸鈉劑量為200mg/kg。）由圖3所示，將上述三組的大鼠腦片經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法檢驗(yàn)，可從圖中看出，嗎啡生理鹽水生理鹽水組和嗎啡納洛酮生理鹽水組的H3K14Ac水平接近(p>0.05)，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。而嗎啡納

23、洛酮丁酸鈉比嗎啡生理鹽水組生理鹽水組表達(dá)更高(p<0.05)；也比嗎啡納洛酮生理鹽水組表達(dá)明顯更高（p<0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。表明去乙?；敢种苿┒∷徕c明顯增強(qiáng)了大鼠大腦海馬下托區(qū)的乙?；℉3K14Ac）水平，即表觀遺傳學(xué)修飾發(fā)生了改變。2.2.2 c-fos蛋白染色由圖4所示，嗎啡生理鹽水生理鹽水組的c-fos水平最低，嗎啡納洛酮生理鹽水組的c-fos水平居中，嗎啡納洛酮丁酸鈉組的c-fos水平最高。若要確定丁酸鈉本身對(duì)CPA的影響，需在以后的研究中證實(shí)。（其中嗎啡納洛酮丁酸鈉組的丁酸鈉劑量為200mg/kg。）由圖5所示，將上述三組的大鼠腦片經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法檢驗(yàn)，可從圖中看

24、出，嗎啡生理鹽水生理鹽水組的c-fos蛋白表達(dá)水平最低，嗎啡納洛酮生理鹽水組的c-fos水平居中，嗎啡納洛酮丁酸鈉組的c-fos水平最高。提示經(jīng)納洛酮處理的大鼠腦內(nèi)海馬下托區(qū)的基因表達(dá)可能發(fā)生了改變，而經(jīng)過(guò)丁酸鈉預(yù)處理的大鼠基因表達(dá)可能發(fā)生了更明顯的改變。 圖2 圖3圖4 圖53 討論藥物誘發(fā)的條件性位置厭惡是與測(cè)量藥物獎(jiǎng)賞和厭惡性質(zhì)的相關(guān)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。在經(jīng)慢性嗎啡處理的大鼠形成嗎啡依賴后，用納洛酮急性促戒斷時(shí)放入CPA測(cè)試箱的一側(cè)，可引起大鼠的戒斷癥狀和對(duì)該側(cè)環(huán)境的厭惡，當(dāng)厭惡記憶形成后，把它再放入相同的環(huán)境可再次誘發(fā)它的厭惡記憶，使之在該側(cè)停留的時(shí)間減少，稱之為條件性位置厭惡。本研究中所考察的

25、戒斷反應(yīng)包括利用條件性位置模型考察戒斷誘發(fā)的CPA 和軀體戒斷癥狀。軀體戒斷癥狀主要記錄了體重減輕、伸展、跳躍、站立、濕狗樣抖等客觀性強(qiáng)、易于觀察的指標(biāo)。可從結(jié)果表格中觀察出對(duì)照組和納洛酮組具有不同的戒斷癥狀，其中p值均小于0.05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可證明大鼠形成了戒斷癥狀。對(duì)于嗎啡+納洛酮+丁酸鈉組，從體重減輕一項(xiàng)結(jié)果中可以發(fā)現(xiàn)，去乙?；敢种苿┒∷徕c可以減弱大鼠的條件性位置厭惡， 200mg/kg的劑量可以使戒斷癥狀減弱程度最小。已經(jīng)完成的CPA（結(jié)果未給出）提示與戒斷癥狀相一致，在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步推測(cè)其表觀遺傳學(xué)的改變是否有變化。組蛋白乙酰化屬于表觀遺傳學(xué)的一種，組蛋白可通過(guò)磷酸化、乙?；?/p>

26、和甲基化等結(jié)構(gòu)修飾使染色質(zhì)的構(gòu)型發(fā)生改變，從而影響轉(zhuǎn)錄因子和轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物和基因轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)區(qū)的結(jié)合，調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄。已經(jīng)知道，組蛋白的乙?；梢源龠M(jìn)基因轉(zhuǎn)錄，而反之，去乙?；瘎t抑制基因的轉(zhuǎn)錄7。已有研究表明，可卡因可誘導(dǎo)紋狀體c-fos mRNA表達(dá)和組蛋白H3磷酸化乙?；?， 該效應(yīng)可被HDAC抑制劑所協(xié)同， 說(shuō)明在紋狀體組蛋白乙酰化與基因表達(dá)之間具有明顯的正相關(guān)。 相似的協(xié)同作用同樣體現(xiàn)在可卡因行為學(xué)結(jié)果：組蛋白去乙?；敢种苿┒∷徕c本身對(duì)運(yùn)動(dòng)能力沒(méi)有影響，但可以顯著增強(qiáng)可卡因?qū)?dòng)物運(yùn)動(dòng)行為的影響。 以上結(jié)果提示，組蛋白乙酰化的水平和成癮過(guò)程中誘導(dǎo)的某些基因的表達(dá)具有相關(guān)性，上調(diào)基因的啟動(dòng)子

27、區(qū)的乙?；酱_實(shí)發(fā)生了改變。用藥物干預(yù)組蛋白乙?；乃骄涂梢员苊馑幬镎T發(fā)的行為學(xué)變化，說(shuō)明了乙?；脚c基因表達(dá)之間確實(shí)有內(nèi)在的聯(lián)系。海馬是大腦重要結(jié)構(gòu)，研究表明海馬下托區(qū)作為海馬的主要輸出通路，在藥物相關(guān)的環(huán)境線索誘發(fā)的藥物尋求行為中起著關(guān)鍵作用。早期研究表明，在背景相關(guān)記憶中，回到以前的環(huán)境后，海馬結(jié)構(gòu)中zif268的表達(dá)上調(diào)；同時(shí)也有研究表明，背景相關(guān)的恐懼記憶模型中，抑制海馬組蛋白3的乙?；茉鰪?qiáng)大鼠的恐懼記憶。這表明藥物誘發(fā)的環(huán)境記憶線索與海馬區(qū)基因改變和組蛋白修飾有關(guān)。腦內(nèi)的c-fos基因的表達(dá)與學(xué)習(xí)記憶過(guò)程與密切相關(guān)。由學(xué)習(xí)記憶所誘導(dǎo)的c-fos基因表達(dá)在腦內(nèi)廣泛分布，以皮層

28、、海馬和邊緣系統(tǒng)為多，已經(jīng)知道，依學(xué)習(xí)記憶訓(xùn)練模型的不同，其表達(dá)時(shí)程有所差異；但一般于訓(xùn)練后立即或30分鐘左右出現(xiàn)，12小時(shí)左右達(dá)峰值。被動(dòng)和主動(dòng)回避訓(xùn)練、光辨別訓(xùn)練及味覺(jué)厭惡性條件反射訓(xùn)練等多種學(xué)習(xí)記憶模型均可誘導(dǎo)腦內(nèi)c-fos基因的表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)即是旨在通過(guò)監(jiān)測(cè)c-fos的表達(dá)，來(lái)反映干預(yù)組蛋白乙?；瘜?duì)條件性位置厭惡訓(xùn)練的影響。從免疫組化染色的結(jié)果來(lái)看，大鼠海馬下托區(qū)c-fos水平：經(jīng)納洛酮處理的比未經(jīng)處理的更高，而經(jīng)丁酸鈉預(yù)處理的比另兩者都高，海馬下托區(qū)的c-fos蛋白的表達(dá)逐次上升，提示了該區(qū)的基因可能被激活。在乙酰化染色中可見(jiàn)，經(jīng)過(guò)去乙?；敢种苿┒∷徕c預(yù)處理的大鼠海馬下托區(qū)的乙?；?/p>

29、平最高（與另兩組相比p值均小于0.05），而嗎啡+納洛酮與嗎啡+生理鹽水組的差異并不十分明顯。與c-fos染色相對(duì)照，丁酸鈉組的陽(yáng)性率都為最高，提示海馬下托組蛋白乙?；c該區(qū)基因表達(dá)緊密相關(guān)，從而影響大鼠對(duì)環(huán)境線索的厭惡記憶，這些即提示了組蛋白乙?；诎⑵愃幬锝鋽嗪拖嚓P(guān)環(huán)境線索記憶中的可能作用機(jī)制。至于丁酸鈉本身對(duì)CPA的形成有無(wú)作用本實(shí)驗(yàn)并未涉及，將在以后的實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步研究。另外，已知丁酸鈉可以減弱納洛酮的戒斷癥狀并引起相關(guān)腦區(qū)的激活和乙?；淖?，反過(guò)來(lái)它是否影響CPA測(cè)試結(jié)果也將在以后的研究中進(jìn)行。參考文獻(xiàn)1 Koob GF ,Sanna PP ,Bloom FE. Neuroscience of addictionJ . Neuron ,1998 ,21 :4672476.2 Cami J ,Fare M. N Engl J Med ,2003 ,349 :975-86.3 Wolffe AP, et al. Science, 1999, 286 (5439) : 481486.4 Kumar A, et al. Neuron, 2005, 48: 303-314.5 Kmar A, Choi KH, Rent