PDCD5基因多態(tài)性與乳腺癌臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系

1、PDCD5基因多態(tài)性與乳腺癌臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系              作者：胡英，徐曄，歐陽濤，李金鋒，王天峰， 范照青，范鐵，林本耀，解云濤，耿排力 【摘要】  目的 探討PDCD5基因多態(tài)性與乳腺癌患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。方法 采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性（PCR-RFLP）分析方法，檢測311例長期隨訪的原發(fā)性乳腺癌患者PDCD5基因多態(tài)性，用Pearson 2檢驗分析PDCD5基因多態(tài)性與乳腺癌患者臨床病理特征間的關(guān)系，并通過Kap

2、lan-Meier曲線分析其與乳腺癌患者生存率之間的關(guān)系。結(jié)果 在311例乳腺癌病例中，PDCD5 CG/GG基因攜帶者的孕激素受體（progesterone receptor，PR）陰性率（50.9%）顯著高于CC基因攜帶者的PR陰性率（38.6%），P=0.035；PDCD5基因多態(tài)與乳腺癌患者的其他臨床病理特征均無相關(guān)性（P0.05），也未見其與患者預(yù)后相關(guān)（P0.05）。結(jié)論 PR陰性高表達的乳腺癌患者常提示預(yù)后不良。PDCD5基因多態(tài)與PR陰性高表達有關(guān)，提示PDCD5基因型可能與預(yù)后不良有關(guān)，但生存分析卻未顯現(xiàn)其與乳腺癌患者預(yù)后間具有相關(guān)性。本研究結(jié)果初步顯示，PDCD5基因多態(tài)性

3、檢測對女性乳腺癌患者預(yù)后評價可能沒有直接參考價值。 胡英（1977），女，土族，青海籍，講師，青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院2005級研究生 【關(guān)鍵詞】  PDCD5 乳腺癌 多態(tài)性 預(yù)后   Abstract  Objective  To investigate the contributions between PDCD5 polymorphisms and clinicopathologic characteristics, Prognosis in patients with breast cancer. Methods The polymorphis

4、ms of PDCD5 were detected by using polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphisms assay (PCR-RFLP) in 311 patients with breast cancer with a long-term follow-up. Pearson 2 was applied to assess the association between the polymorphisms in PDCD5 and clinicopathologic characterist

5、ics, Survival curves were analyzed by Kaplan-Meier method (log-rank test statistics). Results  In 311 patients with breast cancer, PR( progesterone receptor)-negative rate (50.9%) in Patients with PDCD5 CG/GG genotype were more than those in patients with CC genotype(38.6%), P=0.035. The polymo

6、rphism of PDCD5 were not significantly associated with other clinicopathologic characteristics (P0.05) and survival (P0.05). Conclusion The prognosis of the patients with PR-negative higher expression is worse than that of the patients with PR-negative lower expression. The polymorphism of PDCD5 is

7、significantly associated with PR and may suggest a worse prognosis, but survival curves showed they were not associated with prognosis. The research implied that the polymorphism of PDCD5 has no significant value for evaluating prognosis in women with breast cancer.   Key Words  

8、 PDCD5   Breast cancer   Polymorphism   Prognosis   程序性細胞死亡因子5 (programmed cell death 5，PDCD5)也被稱為TF-1細胞凋亡相關(guān)基因19 (TF-1 cell apoptosis related gene-19，TFAR19)，是由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部免疫學(xué)重點實驗室利用cDNA代表差異分析技術(shù)(cDNA-representational difference analysis ,cDNA-RDA)從人紅白血病細胞株TF-1細胞中克隆

9、到的凋亡相關(guān)基因之一。研究表明它參與調(diào)控細胞凋亡過程。近年來國內(nèi)外已有PDCD5的表達失調(diào)與腫瘤密切相關(guān)的報道， ,卻鮮見有關(guān)PDCD5基因多態(tài)性與乳腺癌相關(guān)關(guān)系的研究。本文對具有長期隨訪資料的乳腺癌樣本進行回顧分析，總結(jié)判斷PDCD5基因多態(tài)性與女性乳腺癌患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。   1  材料與方法   1.1  研究對象   1984年9月1996年7月，北京大學(xué)臨床腫瘤學(xué)院乳腺中心收治的原發(fā)性乳腺癌患者311例，全組患者均為女性，平均年齡49.7歲（1682歲）。依據(jù)UICC（Union Intern

10、ational Contre le Cancer）進行TNM分期，I期45例，期181例，III期39例，未知分期43例。依據(jù)北京大學(xué)臨床腫瘤學(xué)院病理科組織病理學(xué)檢查確定淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，其中淋巴結(jié)陰性乳腺癌患者146例，淋巴結(jié)陽性患者114例，未知淋巴結(jié)狀況者48例。患者中位隨訪時間11年（0.216.1年），至末次隨訪死于乳腺癌者94例，隨訪期間患者失訪、死于其他原因或研究終止者均計為刪失數(shù)據(jù)。本研究得到北京大學(xué)臨床腫瘤學(xué)院倫理委員會審查認可。   1.2  DNA提取和基因型檢測   應(yīng)用酚-氯仿方法提取乳腺癌腫瘤組織基因組DNA。通過聚合

11、酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性（PCR-RFLP）方法檢測PDCD5基因多態(tài)，根據(jù)文獻4，從GenBank查找基因登記號為AF014955的人PDCD5基因全序列。根據(jù)此序列采用Primer 5.0、Oligo 6.0軟件輔助設(shè)計引物。引物由北京賽百盛生物技術(shù)有限公司合成。PDCD5F：5-GGG CCA TGC AGA GTG ACT GT-3，PDCD5R：5-GCA ACC ACA GGC AGC ATT C-3。PCR反應(yīng)體系（20l）含100ng模板DNA，1×Go Taq reaction buffer，0.8mmol/L dN，0.5mol/L上、下游引物，1.0 U

12、Taq DNA聚合酶（美國promega公司）。反應(yīng)條件：95預(yù)變性3 min，94變性30 sec，61退火30 sec，72延伸30 sec，共35個循環(huán)后于72延伸10 min。15 l PCR產(chǎn)物用限制性核酸內(nèi)切酶BssS1（美國New England Biolabs公司）于37孵育2 h，酶切產(chǎn)物于2.5%瓊脂糖凝膠（含溴化乙錠0.5 g/ml）中行電泳分離。AlphaImager 2200凝膠成像系統(tǒng)觀察酶切結(jié)果，結(jié)果顯示，PDCD5 GG純合突變型為1條帶（190bp）,CC純合野生型為2條帶（100和90bp）, CG雜合型為3條帶（190、100和90bp），見圖1。部分樣本

13、通過測序驗證結(jié)果（北京利嘉泰成科技有限公司），測序結(jié)果與實驗結(jié)果相符（圖24為部分測序結(jié)果）。   1.3  統(tǒng)計學(xué)分析   應(yīng)用SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理。用群體遺傳學(xué)Hardy-Weinberg 平衡定律檢驗分析311例原發(fā)性乳腺癌患者PDCD5的基因型頻率是否符合Hardy-Weinberg 平衡定律，用Pearson 2檢驗分析其基因多態(tài)性與乳腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系，并用log-rank檢驗、Kaplan-Meier生存曲線分析基因多態(tài)性與乳腺癌患者預(yù)后之間的關(guān)系。檢驗方法均為雙側(cè)概率檢驗，以P0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。&#

14、160;  2  結(jié)果   2.1  基因型分布   311例原發(fā)性乳腺癌患者中，PDCD5基因多態(tài)頻率分布為：CC純合野生型41.8%（130/311）、CG雜合型43.4%（135/311）、GG純合突變型14.8%（46/311）。其基因多態(tài)頻率分布符合Hardy-Weinberg 平衡定律（P=0.260）。同時檢測了30對乳腺癌腫瘤組織基因型和正常配對乳腺組織基因型，證實兩者基因型一致。            圖1&

15、#160; PCR-RFLP檢測PDCD5基因多態(tài)性   M：100 bp ladder   1，4：純合突變型GG (190 bp) ；   2，3，6：雜合型CG (190 bp、100 bp、90bp) ；   5，7：純合野生型CC(100 bp、90 bp) 圖2  PDCD5基因測序結(jié)果（為CG）   2.2  PDCD5基因多態(tài)性與臨床病理參數(shù)的關(guān)系   在311例病例中，PDCD5基因型與乳腺癌患者的PR狀態(tài)相關(guān)，PDCD5 CG/GG基因

16、攜帶者的PR陰性率（50.9%）顯著高于CC攜帶者的PR陰性率（38.6%），P=0.035，而PDCD5基因多態(tài)性與年齡、腫瘤大小、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)、雌激素受體（estrogen receptor，ER）狀態(tài)、孕激素受體（Progesterone receptor,PR）狀態(tài)等臨床病理特征均無顯著相關(guān)性（P0.05），見表1。   2.3  PDCD5基因多態(tài)性與乳腺癌預(yù)后的相關(guān)性   表2顯示，在311例病例中，PDCD5基因多態(tài)性與乳腺癌患者預(yù)后均無相關(guān)性。PDCD5 CC、PDCD5 GG+CG的5年無病生存率（Disease

17、-free survival，DFS）分別為76.7%和77.8%（P=0.671）；5年總生存率（Overall survival，OS）分別為80.7%和81.7%（P=0.770），生存曲線見圖5。此外，乳腺癌患者的腫瘤大小、TNM分期、淋巴結(jié)狀態(tài)、ER狀態(tài)、PR狀態(tài)與預(yù)后顯著相關(guān)（P0.05）。   3  討論   細胞增殖與細胞凋亡之間的不平衡是腫瘤形成的基礎(chǔ)，PDCD5基因是調(diào)控細胞凋亡的因子之一，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著非常重要的作用。Spinola等5應(yīng)用單核苷酸多態(tài)性全基因組掃描技術(shù)行肺癌易感基因研究，統(tǒng)計分析顯示，與常見的CC

18、基因型相比，變異型GG或CG基因型攜帶者肺癌發(fā)病風(fēng)險顯著升高，提示PDCD5基因多態(tài)在腫瘤發(fā)生過程  表1PDCD5的多態(tài)性與臨床病理參數(shù)關(guān)系表2 PDCD5基因多態(tài)性對乳腺癌患者DFS和OS的影響 中起重要作用。至今國內(nèi)外尚未見關(guān)于此基因多態(tài)與乳腺癌易感性及預(yù)后之間的報道。   本文對具有長期隨訪資料的乳腺癌腫瘤組織樣本進行回顧性研究，探討PDCD5基因多態(tài)與乳腺癌患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，實驗中同時檢測了30對乳腺癌腫瘤組織和配對正常組織基因型，其基因型結(jié)果一致，說明對于PDCD5基因多態(tài)檢測而言，腫瘤組織基因型基本可以代表患者胚系基因型情況。研究結(jié)果顯示

19、，在311例病例中，PDCD5基因型與乳腺癌患者的PR狀態(tài)相關(guān)，PDCD5 CG/GG基因攜帶者的PR陰性率顯著高于CC基因攜帶者，PR陰性高表達的乳腺癌患者常提示預(yù)后不良。PDCD5基因多態(tài)與PR陰性高表達有關(guān)，提示PDCD5基因型可能與預(yù)后不良有關(guān)。但在311例病例中，PDCD5基因多態(tài)與預(yù)后無顯著相關(guān)性，與Spinola等5報道不一致，他們對254例意大利肺癌患者進行生存分析，結(jié)果顯示變異型PDCD5 CG/GG基因型攜帶者的生存率低于CC基因型攜帶者。這種結(jié)果可能是由種族差異引起，也可能是由于病例數(shù)或病種不一致或引物序列不一致所致，Spinola等5采用的是rs1862214序列，所以PDCD5是否是不同種族的腫瘤患者的易感因素或是否與不同腫瘤的預(yù)后有關(guān)尚待進一步研究。本研究結(jié)果初步顯示，PDCD5基因多態(tài)性檢測對乳