RANTES-403GA、MCP-1-2518AG基因多態(tài)性

1、RANTES-403G/A、MCP-1-2518A/G基因多態(tài)性與呼吸道合胞病毒毛細(xì)支氣管炎易感性的相關(guān)性         11-04-01 10:47:00     編輯：studa20              作者：張亞麗，董琳，陳小芳，周曉聰，李錦燕，李孟榮【摘要】  目的?：探討調(diào)節(jié)激活正常T細(xì)胞表達(dá)、分泌的細(xì)胞因子(

2、RANTES)-403G/A、單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1)-2518A/G基因多態(tài)性與呼吸道合胞病毒(RSV)毛細(xì)支氣管炎易感性的相關(guān)性。方法：應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性酶切片段長度多態(tài)性技術(shù)(PCR-RFLP)檢測150例RSV毛細(xì)支氣管炎患兒和120例正常兒童上述位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性(SNPs)。結(jié)果：病例組RANTES-403G/A基因型和等位基因型頻率分別為GG 20.7%、GA 63.3%、AA 16.0%、G 52.3%、A 47.7%，對照組為GG 37.5%、GA 46.7%、AA 15.8%、G 60.8%、A 39.2%，兩組基因型頻率差異有顯著性(P<0.05);病

3、例組A等位基因頻率高于對照組(P<0.05)，與G等位基因攜帶者相比，A等位基因攜帶者患病風(fēng)險增加(OR=1.415，P<0.05)。兩組MCP-1-2518基因型和等位基因頻率差異無顯著性(均P>0.05)。結(jié)論：RANTES-403 A等位基因與RSV毛細(xì)支氣管炎易感性相關(guān)，其可能是影響發(fā)病的一個重要候選基因;未發(fā)現(xiàn)MCP-1-2518A/G基因多態(tài)性與RSV毛細(xì)支氣管炎易感性存在關(guān)聯(lián)。 【關(guān)鍵詞】  呼吸道合胞病毒;毛細(xì)支氣管炎;基因多態(tài)性;RANTES;MCP-1Abstract: ? Objective: To explore the correlatio

4、n of regulated on activation，normal T cell expressed and secreted (RANTES) and monocyte chemotactic protein 1(MCP-1) gene polymorphisms with the susceptibility of respiratory syncytial virus (RSV) bronchiolitis. Methods:?RANTES-403G/A and MCP-1-2518A/G were genotyped with polymerase chain reaction-r

5、estriction fragment length polymorphism in 150 children with RSV bronchiolitis and 120 healthy subjects. Results:The frequency of each genotype for RANTES-403G/A was 20.7%?(GG)，63.3%?(GA)，16.0%?(AA) in case group and 37.5%?(GG)，46.7%?(GA)，15.8%?(AA) in control one，respectively. There was significant

6、 difference between two groups?(P<0.05). The frequency of each allele was 52.3%(G)，47.7%?(A) in case group，and 60.8%(G)，39.2%?(A) in control group. The frequency of A allele was significantly increased in case group?(P<0.05);Children carrying with A allele increased risk for RSV bronchiolitis

7、compared with those with G allele (OR=1.415， P<0.05). There were no significant differences for genotype and allele frequency of MCP-1-2518A/G between two groups?(P>0.05). Conclusion:?RANTES-403A allele is associated with the susceptibility and may be one of candidate genes for RSV bronchiolit

8、is. No correlation is found between MCP-1-2518A/G gene polymorphisms and the susceptibility of RSV bronchiolitis.Key words: ? respiratory syncytial virus;bronchiolitis;gene polymorphisms;regulated on activation，normal T cell expressed and secreted;monocyte chemotactic protein-1呼吸道合胞病毒(RSV)是嬰幼兒下呼吸道感染

9、最常見的病原，研究顯示，RSV感染的氣道上皮細(xì)胞能產(chǎn)生調(diào)節(jié)激活正常T細(xì)胞表達(dá)、分泌的細(xì)胞因子(RANTES)和單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1)等趨化因子，從而引發(fā)過度的氣道炎癥反應(yīng)1-2。RSV感染患兒鼻腔盥洗液及鼻咽分泌物RANTES水平明顯增高，且與疾病嚴(yán)重程度相關(guān)3-4，有低氧表現(xiàn)的RSV毛細(xì)支氣管炎患兒鼻炎分泌物中MCP-1水平明顯升高5，提示趨化因子可能在RSV感染發(fā)病中發(fā)揮重要作用。幾乎所有兒童2歲時均感染RSV，但僅1%2%需住院治療，造成病情差異的原因尚不清楚，許多嚴(yán)重RSV感染患兒并不存在早產(chǎn)、先天性心臟病、支氣管肺發(fā)育不良等高危因素，因此，宿主的遺傳因素與RSV感染發(fā)病的關(guān)

10、系正成為研究的焦點(diǎn)。既往研究已證實(shí)調(diào)控RANTES和MCP-1的基因位點(diǎn)存在多態(tài)性6-7。本研究通過病例-對照分析，探討RANTES-403G/A、MCP-1-2518A/G的單核苷酸多態(tài)性(SNPs)與RSV毛細(xì)支氣管炎易感性的相關(guān)性，篩選與疾病易感性相關(guān)的SNP位點(diǎn)。1?對象和方法1.1?對象?病例組為2006年11月-2007年3月入住溫州醫(yī)學(xué)院附屬育英兒童醫(yī)院呼吸科，診斷為RSV毛細(xì)支氣管炎患兒150例，其中男111例，女39例，年齡124個月，有早產(chǎn)、雙胎、先天性心臟病、支氣管肺發(fā)育不良、免疫缺陷等基礎(chǔ)疾病者除外。對照組選擇同期健康體檢的兒童120例，男92例，女28例，年齡224個

11、月。兩組均無特應(yīng)性疾病史及家族特應(yīng)性疾病史，均為漢族，無血緣關(guān)系。1.2?方法1.2.1?基因組DNA提?。河肅helex-100快速提取法提取基因組DNA。1.2.2?聚合酶鏈反應(yīng)-限制性酶切片段長度多態(tài)性技術(shù)(PCR-RFLP)檢測：各位點(diǎn)信息、引物、產(chǎn)物長度、PCR反應(yīng)條件及限制性內(nèi)切酶見表1。PCR反應(yīng)體系為20L：Primer F(10mol/L)1L，Primer R(10mol/L)1L，dNTPMix(2 mmol/L)2L，MgCl2(25 mmol/L)1.6L，10×Buffer 2L，DNA模板2L，Taq DNA聚合酶(1?U/L) 1.5L，去離子水8.9

12、L。取PCR產(chǎn)物5L，限制性內(nèi)切酶3 U，10×Buffer 1L，余用去離子水補(bǔ)齊，總體積為10L，37 水浴箱中酶切過夜。30 g/L瓊脂糖凝膠鑒定基因型(見圖1、圖2)。1.3?統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法?基因型與等位基因頻率Hardy-Weinburg平衡吻合程度用x2檢驗(yàn);基因型及等位基因頻率的比較用x2檢驗(yàn);用Logistic回歸模型判斷等位基因型對發(fā)病危險度的影響。2?結(jié)果2.1?RANTES-403G/A基因型及等位基因分布?病例組和對照組均可見GG、GA、AA 3種基因型，以GA雜合子基因型為主;經(jīng)Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)，對照組的遺傳平衡，表明該群體來自同一孟德爾群體(x2=0.052，P>0.05);而病例組的遺傳不平衡(x2=10.894，P<0.05)。兩組基因型頻率差異有顯著性(x2=10.024，P<0.05);病例組A等位基因的頻率明顯高于對照組(x2=3.912， P<0.05)(見表2);與G等位基因攜帶者相比，A等位基因攜帶者患RSV毛細(xì)支氣管炎的風(fēng)險明顯增加 (OR=1.415，9