銀屑病患者抗角蛋白自身抗體的初步研究

1、    銀屑病患者抗角蛋白自身抗體的初步研究        銀屑病患者表皮中角蛋白有異常表達(dá)，特別是角蛋白K16,它常在銀屑病活動(dòng)的早期即在皮損邊緣處的基底層上表達(dá)1，2。為了研究銀屑病患者血清中是否存在針對(duì)角蛋白K16的自身抗體，以及該抗體與銀屑病病情變化的確切關(guān)系，我們用間接酶聯(lián)免疫測(cè)定法（ELISA）和免疫印跡法（IBT）分別檢測(cè)銀屑病患者血清中的抗角蛋白自身抗體（AKautoAB）和抗角蛋白K16自身抗體（AK16autoAB）的滴度。 一、病例與方法（一）臨床病例：

2、尋常型銀屑病患者53例，其中進(jìn)行期30例，靜止期23例；女19例，男34例；年齡2072歲(43.2±14.1歲)，病期2周至31年。正常人對(duì)照組為健康體檢者20例，其中男12例，女8例，年齡3552歲(42.9±5.5歲)。銀屑病患者的皮損面積和嚴(yán)重程度按PASI評(píng)分為4.834.8分（13.75±7.18)。（二）血清標(biāo)本：對(duì)照組和患者組每例采血3mL，待凝固離心后取血清分裝，置20保存?zhèn)溆?。（三）主要試劑：辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記兔抗人IgG購(gòu)自Dako公司，辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記羊抗鼠IgG和抗角蛋白單抗Ks8.12均購(gòu)自Sigma公司。（四）實(shí)驗(yàn)方法：收集正常人的足部

3、胼胝來(lái)提取其中的角蛋白3。抽提得到的角蛋白液（抗原液）經(jīng)SDSPAGE電泳觀察角蛋白抽提的結(jié)果,將SDSPAGE凝膠上的角蛋白抗原組分通過(guò)電泳轉(zhuǎn)移至硝酸纖維薄膜上。先加血清標(biāo)本，再加兔抗人IgG抗體（以單抗Ks8.12與K16結(jié)合的條帶作陽(yáng)性對(duì)照）,進(jìn)行固相酶聯(lián)免疫檢測(cè)。顯色后的抗體含量經(jīng)VIDAS象分析儀進(jìn)行灰度讀數(shù)，用密度積分值來(lái)分別比較AKautoAB和AK16autoAB的含量。另外，再分別用ELISA法測(cè)定AKautoAB和雙抗夾心ELISA法測(cè)定AK16autoAB。二、結(jié)果（一）AKautoAb的檢測(cè)結(jié)果：正常人與銀屑病患者血清中均存在AKautoAB。2種方法（IBT和ELIS

4、A）檢測(cè)結(jié)果顯示：正常人血清中的AKautoAB水平明顯高于銀屑病患者組（P值均<0.01）；靜止期患者AKautoAb抗體水平高于進(jìn)行期患者（僅ELISA結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義）（見(jiàn)表1）。表1抗角蛋白自身抗體及抗角蛋白K16自身抗體檢測(cè)結(jié)果組別IBTELESA例數(shù)密度積分值（<"xx1 (881 bytes)" src="/med/cano/201003/20100317183350218" 12 14>±s）t值P值例數(shù)密度積分值（<"xx1 (881 bytes)" src="/med/c

5、ano/201003/20100317183350218" 12 14>±s）t值P值抗角蛋白自身抗體正常人對(duì)照組92.662±278.21200.37±0.104.45<0.01銀屑病患者組222319.75±290.243.02<0.01530.23±0.13進(jìn)行期132284.91±324.89300.19±0.122.47<0.05靜止期92370.07±240.770.67>0.05230.28±0.14抗角蛋白K16自身抗體正常人對(duì)照組9206.24&#

6、177;55.692.91 2.37<0.01 <0.05200.59±0.102.94 3.11<0.01 <0.01銀屑病進(jìn)行期13303.48±88.33300.67±0.12銀屑病靜止期9228.16±41.93230.57±0.10（二）AK16autoAB的檢測(cè)結(jié)果:IBT與ELISA2種方法均顯示銀屑病進(jìn)行期患者組AK16autoAB水平不僅明顯高于靜止期患者,而且也高于正常人對(duì)照組，并均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(見(jiàn)表1)。（三）銀屑病患者AKautoAB水平(ELISA檢測(cè)結(jié)果)與PASI評(píng)分之間無(wú)顯著性相關(guān)性，r

7、s=0.14，P>0.05。AK16autoAB水平與PASI評(píng)分之間呈顯著正相關(guān)，rs=0.61，P<0.05。 三、討論幾乎所有正常人的血清中都含有AKautoAB，其中尤以IgG型為多4。AKautoAB能與不同的角蛋白抗原反應(yīng)，特別是破壞、凋亡的角質(zhì)形成細(xì)胞釋放的角蛋白中間絲。AKautoAB能促進(jìn)單核細(xì)胞、多核白細(xì)胞對(duì)角蛋白中間絲集聚物的吞噬，還能包繞結(jié)合于組織中的角蛋白小體（KB）表面而有利于KB的清除，防止免疫系統(tǒng)對(duì)自身角蛋白發(fā)生進(jìn)一步的炎癥反應(yīng)5。我們用ELISA方法來(lái)檢測(cè)正常人、銀屑病患者血清中IgG型AKautoAB的水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：銀屑病患者進(jìn)行期和靜止期血清

8、中的AKautoAB較正常人有明顯降低，銀屑病患者AKautoAB水平的下降可能與銀屑病患者表皮的病理變化有關(guān)。我們通過(guò)ELISA的雙抗夾心法來(lái)檢測(cè)正常人和銀屑病患者血清中的AK16autoAB的水平，發(fā)現(xiàn)銀屑病進(jìn)行期患者AK16autoAB的水平明顯高于靜止期及正常對(duì)照組。這可能與銀屑病患者表皮中角蛋白K16的異常增高和K16本身具有抗原性有關(guān)。我們將銀屑病患者PASI的評(píng)分分別與AKautoAB水平和AK16autoAB水平作相關(guān)性分析的結(jié)果表明，PASI評(píng)分與AKautoAB水平無(wú)相關(guān)關(guān)系，而PASI評(píng)分與AK16autoAB水平呈正相關(guān)，即AK16autoAB與銀屑病患者皮損的面積和嚴(yán)

9、重程度成正比，故我們認(rèn)為AK16autoAB可以用來(lái)作為評(píng)估銀屑病病情的血清學(xué)指標(biāo)之一。作者單位：陸毅（200025上海第二醫(yī)科大學(xué)附屬瑞金醫(yī)院皮膚科）馮信忠（200025上海第二醫(yī)科大學(xué)附屬瑞金醫(yī)院皮膚科）參 考 文 獻(xiàn) 1Thewes M， Stadler R， Korge B， et al. Normal psoriatic epidermis expression of hyper proliferation? associated keratins. Arch Dermatol Res, 1991, 283: 465 471. 2Castelijns FA, Gerritsen MJ

10、, van Vlijmen? Willems IM, et al. The epidermal phenotype during initiation of the psoriatic lesion in the symptomless margin of relapsing psoriasis. J Am Acad Dermatol, 1999,40: 901 909. 3Aoki S， Yaoita H， Kitajima Y. An elevated level of autoantibodies against 48? to 50? kD keratins in the serum of patients with psoriasis. J Invest Dermatol, 1989,92:179 183. 4劉玉峰，車乃增，劉彥仿,等人血清抗角蛋白自身抗體的免疫組化研究.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，1989,9:311313.5Hintner H， Romani N， Sta