新風(fēng)膠囊對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠肺部HRCT及血清細(xì)胞因子的影響

1、新風(fēng)膠囊對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠肺部HRCT及血清細(xì)胞因子的影響    【關(guān)鍵詞】  佐劑性關(guān)節(jié)炎 HRCT 細(xì)胞因子 新風(fēng)膠囊    類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（Rheumatoid arthritis RA）是一種以慢性關(guān)節(jié)病變?yōu)橹鞯淖陨砻庖呒膊?，可反?fù)遷延多年，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸變及功能喪失12。然而RA病變并非局限于關(guān)節(jié)，還常伴有關(guān)節(jié)以外的其他臟器病變，甚至可引起主要臟器的血管炎而危及生命3。因肺含有豐富的結(jié)締組織和血管而更容易受累，且隨著RA病程延長(zhǎng)，肺受累的機(jī)率增高，約 11的RA病人會(huì)繼發(fā)肺間質(zhì)性病變4。細(xì)胞因子（cyto

2、kines，CK）參與了RA的整個(gè)病理過(guò)程，在RA的發(fā)病中具有促炎、抑炎或刺激、抑制的正負(fù)反饋的免疫調(diào)控作用。當(dāng)免疫調(diào)節(jié)功能失調(diào)，CK占優(yōu)勢(shì)時(shí)，則誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎癥發(fā)生或遷延發(fā)展。中醫(yī)研究表明，的基本病機(jī)為脾虛濕盛、痰瘀互結(jié)，采用健脾化濕通絡(luò)法治療效果良好，據(jù)此研制的中藥制劑新風(fēng)膠囊（藥物組成：黃芪、薏苡仁、雷公藤、蜈蚣）應(yīng)用于臨床取得了滿(mǎn)意療效56。為了進(jìn)一步探討新風(fēng)膠囊的作用機(jī)制，本文觀(guān)察了該藥對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠肺部HRCT及血清細(xì)胞因子TNF-、IL-10變化的影響，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。    1  材料與方法    1.

3、1   實(shí)驗(yàn)材料    1.1.1   實(shí)驗(yàn)動(dòng)物   雄性Wistar大鼠60只，體重（200±20），由安徽省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所動(dòng)物房提供。    1.1.2   藥品與試劑   新風(fēng)膠囊：由安徽中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院制劑中心提供，院內(nèi)批號(hào)：20051204。甲氨喋呤：2.5 mg/片，由上海醫(yī)藥（集團(tuán)）有限公司信誼制藥總廠(chǎng)生產(chǎn)，批號(hào)：20050902。雷公藤多苷片：10 mg/片，由上海醫(yī)科大學(xué)紅旗制藥廠(chǎng)生產(chǎn)，批號(hào)：200409

4、02。弗氏完全佐劑（Freunds complete adjuvant）：由美國(guó)SIGMA公司生產(chǎn)。    1.1.3   實(shí)驗(yàn)儀器   Toshiba Asteion CT機(jī)：由日本東芝公司生產(chǎn)；TECAN洗板機(jī)；TECAN酶標(biāo)定量測(cè)定儀；電動(dòng)離心沉淀器：由江蘇省響水縣醫(yī)療器械廠(chǎng)生產(chǎn)。    1.2   實(shí)驗(yàn)方法    1.2.1   動(dòng)物分組   將60只Wistar大鼠隨機(jī)分為5組：正常組，模型組，甲

5、氨喋呤（MTX）組，雷公藤多苷片（TPT）組，新風(fēng)膠囊（XFC）組，每組12只。    1.2.2   造模與給藥   除正常組外，向每只動(dòng)物右后足跖皮內(nèi)注射Freunds完全佐劑0.1 mL致炎，造成佐劑性關(guān)節(jié)炎（adjuvant arthritis，AA）模型7。致炎后第19天開(kāi)始給藥，劑量相當(dāng)于臨床用量的10倍。正常組和模型組：給予生理鹽水灌胃，1 mL/100 g體重，1次/d；MTX組：將MTX研成細(xì)末，加生理鹽水，配制成混懸液（每mL含MTX 0.3 mg），按1 mL/100 g體重劑量灌胃，1次/w，未用藥期

6、間給予生理鹽水灌胃，1 mL/100 g，1次/d；雷公藤組：將雷公藤多苷片研成細(xì)末，加生理鹽水，配制成混懸液（每mL含雷公藤多苷1 mg），按1 mL/100 g體重的劑量灌胃，1次/d；新風(fēng)膠囊組：將新風(fēng)膠囊去除膠囊殼，加生理鹽水，配制成混懸液（每mL含藥量0.3 g），按1 mL/100 g體重的劑量灌胃，1次/d。連續(xù)給藥30 d。    1.2.3   指標(biāo)觀(guān)察    1.2.3.1   足跖腫脹度   分別于致炎前、給藥前、末次給藥后1 h用自制容積測(cè)定儀測(cè)量各組

7、大鼠右后足容積，然后計(jì)算給藥前腫脹度=（給藥前足容積-致炎前足容積）/致炎前足容積，給藥后腫脹度=（給藥后足容積-給藥前足容積）/給藥前足容積。    1.2.3.2   肺部HRCT掃描  各組分別隨機(jī)取2只大鼠，用10水合氯醛（0.35 mL/100 g體重）腹腔注射麻醉，仰臥位，進(jìn)行HRCT掃描，掃描層厚2 mm，間隔1 mm，螺距3 ram，電壓120 kV，電流50 mA，濾波函數(shù)FC10/FC81，矩陣512×512，掃描時(shí)間0.75秒/圈，掃描范圍為全肺，重建時(shí)間1秒。    1.

8、2.3.3   細(xì)胞因子測(cè)定   末次用藥24 后，用10水合氯醛（0.35 mL/100 g體重）將大鼠腹腔注射麻醉，行腹主動(dòng)脈采血，將所采血液3000 r/min離心5 min，取上清液，置-20 保存待測(cè)。TNF-、IL-10測(cè)定采用ELISA法，按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。    1.3   統(tǒng)計(jì)學(xué)處理    計(jì)量資料以（x±s）表示，組間比較用t檢驗(yàn)。    2   結(jié)   果 

9、60;  2.1   各組大鼠足跖腫脹度結(jié)果比較    結(jié)果見(jiàn)表1。表1顯示：致炎前各組大鼠的足跖腫脹度無(wú)明顯差異；給藥前，模型組、MTX組、TPT組、XFC組大鼠足跖腫脹度顯著高于正常組（<0.01，或<0.05）；給藥后，模型組大鼠足跖腫脹度顯著高于正常組（<0.01）， MTX組、TPT組、XFC組3組大鼠足跖腫脹度顯著低于模型組（<0.01，或<0.05），且3組之間無(wú)明顯差異（>0.05）。    2.2   各組大鼠肺部HRCT

10、掃描結(jié)果    見(jiàn)圖1圖5。正常組大鼠肺輪廓清晰，肺紋理分布均勻，肺小葉間隔、間質(zhì)及小葉結(jié)構(gòu)正常，胸膜正常，交界面規(guī)則，無(wú)高密度影，血管、支氣管束走行自然，邊緣銳利，并且由內(nèi)向外逐漸分支而細(xì)。模型組大鼠肺輪廓欠清晰，肺部血管影擴(kuò)張，邊緣模糊且不規(guī)則，兩肺有索條狀密度增高影，鄰近胸膜輕度肥厚。MTX組大鼠肺部可見(jiàn)沿著肺紋理分布的斑片狀密度增高影，肺血管紋理模糊，邊緣不清楚。TPT組大鼠兩肺可見(jiàn)多發(fā)性結(jié)節(jié)狀及斑片狀密度增高影，境界欠清晰。XFC 組大鼠肺輪廓清晰，肺紋理分布均勻，部分肺組織顯示斑點(diǎn)狀密度增高影。    2.3 &

11、#160; 各組大鼠血清TNF-、IL-10比較    結(jié)果見(jiàn)表2。表2顯示：與正常組相比，模型組大鼠血清中TNF-含量顯著升高（P0.05），而IL-10顯著降低（P0.01）；與模型組比較，3個(gè)給藥組大鼠血清中TNF-含量顯著降低（P0.01），IL-10含量顯著升高（P0.01），但3個(gè)給藥組之間無(wú)顯著差異。    3   討   論    類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎不僅導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形，而且還常伴有關(guān)節(jié)以外的其他臟器病變。肺組織是易受累的臟器之一，主要病變?yōu)閮煞伍g質(zhì)廣泛纖維化

12、，表現(xiàn)出呼吸系統(tǒng)的癥狀、體征和胸部線(xiàn)、CT的改變及肺功能的異常。HRCT提高了CT的空間分辨率，能充分顯示肺間質(zhì)纖維化的各種征象，如蜂窩狀陰影，胸膜下線(xiàn)影，小葉間隔增厚，磨玻璃樣改變等常規(guī)CT無(wú)法觀(guān)察到的征象，顯示率為95。RA是一種自身免疫性疾病，他主要由于機(jī)體的免疫功能失調(diào)導(dǎo)致對(duì)細(xì)胞免疫和體液免疫的高敏感性。細(xì)胞因子能調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，具有抗炎、促炎和免疫抑制多種功能，他們之間的失衡可能是導(dǎo)致RA 遷延不愈的原因之一。而且，細(xì)胞因子參與肺纖維化過(guò)程，具體可分為3種情況：參與局部損傷和炎癥反應(yīng)；參與組織修復(fù)和纖維化的進(jìn)展；一些細(xì)胞因子能促進(jìn)受損上皮和血管內(nèi)皮的修復(fù)，具有抗損傷和抑制肺纖維化作用8

13、。在RA患者的血清中，主要存在的促炎因子有IL-1、IL-1、IL-6、 TNF-、GM-CSF和G-CSF，抗炎因子有IL-10、IL-4、IL-13。既往研究顯示， AA大鼠血清中IL-1、TNF-顯著升高，而IL-4、IL-10顯著降低，新風(fēng)膠囊能下調(diào)致炎因子（IL-1、TNF-）、上調(diào)抗炎因子（IL-4、IL-10）、抑制致炎效應(yīng)、增強(qiáng)抗炎效應(yīng)9。    新風(fēng)膠囊可益氣健脾、化濕通絡(luò)，方中藥物都具有不同程度的抗炎鎮(zhèn)痛作用，可消腫止痛，其中黃芪富含黃酮、多糖、苷類(lèi)和多種氨基酸，能增強(qiáng)免疫功能，調(diào)節(jié)糖代謝，加速受損組織修復(fù)6。劉巨源等10通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明黃芪可明顯

14、降低各期肺纖維化大鼠模型肺組織過(guò)氧化脂質(zhì)（LPO）及羥脯氨酸含量，明顯減輕肺泡炎及肺纖維化程度。雷公藤具有免疫抑制作用，可抑制患者體內(nèi)異常免疫反應(yīng);黃芪、薏苡仁與雷公藤相配一方面可以調(diào)節(jié)免疫，另一方面可以防止雷公藤免疫抑制作用大而造成機(jī)體免疫功能過(guò)于低下;黃芪還可降低胃酸，對(duì)胃黏膜起保護(hù)作用11。侯杰等12研究發(fā)現(xiàn)雷公藤多苷有改善肺泡炎和纖維化的作用，鐘殿勝等13研究表明雷公藤T4單體可使肺泡炎和肺纖維化程度減輕。MTX和TPT是目前較為公認(rèn)治療RA 的藥物，新風(fēng)膠囊也能明顯降低AA大鼠的足跖腫脹度，提示新風(fēng)膠囊具有與MTX、TPT同樣的抗炎作用。MTX可誘發(fā)急性或慢性肺間質(zhì)纖維化，這是其治療

15、 RA出現(xiàn)的不良反應(yīng)之一，而新風(fēng)膠囊能改善AA大鼠肺功能，提示在改善AA大鼠肺功能方面明顯優(yōu)于MTX。新風(fēng)膠囊對(duì)AA大鼠肺部影像學(xué)改變的改善作用優(yōu)于單獨(dú)應(yīng)用TPT，提示新風(fēng)膠囊中其他成分對(duì)雷公藤有增效、抑毒作用。由實(shí)驗(yàn)可知AA大鼠肺部影像學(xué)改變的機(jī)制可能與細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)失衡有關(guān)。新風(fēng)膠囊能下調(diào)致炎因子（TNF-）、上調(diào)抗炎因子（IL-10）、抑制致炎效應(yīng)、增強(qiáng)抗炎效應(yīng)，從而達(dá)到在降低AA大鼠足跖腫脹度的同時(shí)，也能改善肺部影像學(xué)改變。 【參考文獻(xiàn)】  1王立德，泮孝云，吳汝舟. 類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的早期診斷和治療J.中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2004，14（10）：66-68.2李志平，黃

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