苯丙氨酸定量檢測試劑盒(熒光法)說明書

1、苯丙氨酸定量檢測試劑盒（熒光法）說明書【產(chǎn)品名稱】通用名稱：英文名稱： 【包裝規(guī)格】【預(yù)期用途】【檢驗原理】【主要組成成分】 【儲存條件及有效期】【適用機型】【 樣本要求】【檢驗方法】【參考值（參考范圍）】【檢驗結(jié)果的解釋】【檢驗方法的局限性】【產(chǎn)品性能指標(biāo)】【注意事項】【參考文獻】【生產(chǎn)企業(yè)】【 醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)許可證編號】 【醫(yī)療器械注冊證書編號】 【產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)編號】 【說明書批準(zhǔn)及修改日期】【產(chǎn)品名稱】通用名稱：苯丙氨酸定量檢測試劑盒（熒光法）英文名稱：Phenylalanine Kit（FA）【包裝規(guī)格】96人份/盒 480人份/盒【預(yù)期用途】 用于定量檢測采集在S&S 903# 濾紙上

2、的新生兒全血樣品中苯丙氨酸的濃度。適用于新生兒苯丙酮尿癥（PKU）的篩查，僅用于體外檢測。苯丙酮尿癥（簡稱PKU）是一種較常見的常染色體隱性遺傳性氨基酸代謝病，發(fā)病率約1/10,000。本病可因苯丙氨酸羥化酶缺乏引起，也可因輔酶因子BH4缺陷引起。這些缺陷致使苯丙氨酸不能被轉(zhuǎn)化為酪氨酸，導(dǎo)致大量的苯丙氨酸及其代謝產(chǎn)物在體內(nèi)堆積，引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害。其臨床主要表現(xiàn)為：發(fā)育遲緩，毛發(fā)、皮膚及虹膜變淺，癲癇，進行性智力低下等。由于本病的早期發(fā)現(xiàn)早期治療，對患兒的生長發(fā)育、智力發(fā)育不受影響，因此被我國列為新生兒疾病篩查項目之一。檢測方法還有細(xì)菌抑制法、酶法等?！緳z驗原理】在含有琥珀酸緩沖液、二肽溶液

3、和茚三酮溶液的混合液中，茚三酮可以和苯丙氨酸反應(yīng)，產(chǎn)生一種熒光物質(zhì)，其中二肽可提高此熒光反應(yīng)，琥珀酸緩沖液控制PH 5.80.1，可保證理想的熒光值和最大的特異性，加入銅溶液后可以使熒光化合物更加穩(wěn)定并終止反應(yīng)。使用熒光讀數(shù)儀（激發(fā)光390nm，發(fā)射光486nm）測定熒光物質(zhì)的強弱，即可反映苯丙氨酸的濃度?！局饕M成成分】名稱96人份/盒480人份/盒包裝琥珀酸緩沖液 （琥珀酸）5ml/瓶25ml/瓶無色透明玻璃瓶或白色塑料瓶二肽溶液 （L-leucyl-L-alanine）1 ml/瓶5ml/瓶茚三酮溶液（茚三酮）2 ml/瓶10ml/瓶銅溶液（碳酸鈉、酒石酸鉀納、硫酸銅）25ml/瓶125

4、ml/瓶96孔微孔板（透明）1塊5塊 無色透明塑料袋96孔微孔板（白色）1塊5塊 標(biāo)準(zhǔn)血片S1S6 （0.24、1.06、2.76、5.32、8.34、13.47 mg/dl）1份2份鋁箔袋質(zhì)控血片C1、C2 1份2份說明書1份質(zhì)量驗證單1份注：標(biāo)準(zhǔn)品或質(zhì)控血片的濃度若有改變，將在試劑盒內(nèi)放通知單，同時電話通知。 【儲存條件及有效期】 儲存條件：28，防止冷凍。 有效期：12個月。本試劑為一次性使用產(chǎn)品，開啟后一次性使用。 【適用機型】 芬蘭PE公司W(wǎng)ALLAC 1420型熒光儀（激發(fā)波長390nm,發(fā)射波長486nm）。 【樣本要求】遵循衛(wèi)生部新生兒篩查血斑采集常規(guī)采集和保存血斑?！緳z驗方法

5、】1. 實驗前將試劑盒先放在室溫（1825）平衡，銅溶液仍放在28冰箱內(nèi)，即取即用。配制80乙醇溶液：無水乙醇和雙蒸水按4：1比例混合，即配即用；2. 反應(yīng)混合液：琥珀酸緩沖液、二肽溶液和茚三銅溶液按512比例混合,避光保存，4小時內(nèi)用完；3. 用專用打孔器打下直徑3mm標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品、樣本的濾紙血斑，放入透明微孔板相應(yīng)的孔中；4. 每孔加入80乙醇80ul,蓋膜，室溫振蕩30分鐘（振蕩時避免血片上下跳動，以免萃取不完全)；5. 每孔取出萃取液50ul轉(zhuǎn)移到白色微孔板的相對應(yīng)孔中；6. 每孔加入反應(yīng)混合液50 ul，蓋膜，振蕩15秒，60溫育1小時或37溫育2小時；7. 從溫育箱中取出微孔板，

6、放入冰箱（-18-20）冷凍35分鐘；8. 每孔加冷的銅溶液200ul（28冰箱內(nèi)取出），避光在室溫溫育1530分鐘；9. 上機測定，熒光儀使用的激發(fā)波長390nm,發(fā)射波長486nm 。10. 結(jié)果計算：可利用熒光儀提供數(shù)據(jù)自動處理軟件，自動繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品的苯丙氨酸濃度。手工計算：（a）坐標(biāo)紙上以標(biāo)準(zhǔn)品熒光值（縱軸或Y軸）和與其相對應(yīng)的濃度（橫軸或X軸）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。（b）質(zhì)控品和樣品的苯丙氨酸濃度值：首先在Y軸上查找熒光值，橫向延伸至標(biāo)準(zhǔn)曲線，以標(biāo)準(zhǔn)曲線上的點拉垂直線與X軸相交，得出苯丙氨酸濃度值，判斷結(jié)果。計算公式：y = ax b （a標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率，b標(biāo)準(zhǔn)曲線在y軸上的截距）單位

7、轉(zhuǎn)換：1mg/dl=60.6umol/L【參考值】（參考范圍）對1013例正常新生兒血斑樣品使用本試劑盒進行檢測，95的百分位數(shù)為1.5 mg/dl，97.5的百分位數(shù)為1.7mg/dl，99的百分位數(shù)為2.0mg/dl。參考值即切值（Cut off）：1.7mg/dl。見分布圖1圖1 建議每個實驗室根據(jù)所在地區(qū)新生兒樣品，建立適合本地區(qū)自己實驗室的正常參考值?！緳z驗結(jié)果的解釋】1.如果血斑的苯丙氨酸濃度大于1.7 mg/dl，為 可疑陽性，應(yīng)進行原血斑復(fù)檢，如果復(fù)查的結(jié)果仍高于1.7mg/dl, 應(yīng)采集新的血斑，進行確認(rèn)實驗。2.結(jié)果本身不能成為治療的惟一因素。必須與其他的臨床觀察和診斷試驗

8、相聯(lián)系。3.質(zhì)控品的結(jié)果必須控制在要求范圍之內(nèi)，否則實驗結(jié)果不符合可接受范圍視為無效。4.血樣采集時間為出生72小時，并充分哺乳6次以上，否則會導(dǎo)致假陰性結(jié)果?！緳z驗方法的局限性】1. 任何高濃度值的結(jié)果都要視為可疑陽性須復(fù)查。存在任何苯丙氨酸病歷或臨床癥狀都要復(fù)查。2. 不排除藥物對病人苯丙氨酸的直接影響。若病人有PKU臨床癥狀或相關(guān)病歷，即使苯丙氨酸的值正常也要復(fù)查。3. 應(yīng)使用新生兒篩查專用S&S 903#濾紙采集血斑。使用其它濾紙結(jié)果將不同?！井a(chǎn)品性能指標(biāo)】1. 試劑盒外觀整潔，文字符號標(biāo)識清晰2. 液體組分的外觀： 琥珀酸緩沖液、二肽溶液應(yīng)為無色透明液體；茚三酮溶液應(yīng)為淡黃色透明液體

9、；銅溶液應(yīng)為淡藍色透明液體；以上溶液均應(yīng)性狀均一，無顆粒物，無絮狀物。3. 血制品經(jīng)抗-HIV、HBsAg、抗-HCV、梅毒抗體、轉(zhuǎn)氨酶檢測呈陰性4. 劑量反應(yīng)曲線的線性范圍0.24 mg/dl13.47 mg/dl（其確定值以隨行質(zhì)量驗證單為準(zhǔn)）。5. 批內(nèi)精密度 不大于10 %；6. 批間精密度 不大于15 %；7. 準(zhǔn)確性 回收率為85%119%；8. 特異性 與酪氨酸、組氨酸和甘氨酸無交叉反應(yīng)；9 靈敏度 最低可檢出限小于0.6 mg/dl；10. 相關(guān)性 實驗中分別使用60溫育1小時和372溫育小時的溫育條件，共檢測47例未知樣品，其相關(guān)性R0.989 見圖2 圖2【注意事項】1.

10、僅用于體外診斷。一次性使用產(chǎn)品，供專業(yè)人員使用。2. 不同批號的試劑不可混用；超出有效期的試劑不可使用。3. 按照檢測程序加樣，不可顛倒順序，否則會導(dǎo)致實驗失敗。4. 試劑和樣本應(yīng)視為存在潛在的生物危害，實驗結(jié)束后作為潛在傳染源處理。5. 茚三酮溶液對皮膚有刺激作用，進行操作時應(yīng)戴手套。6. 自備實驗材料：熒光儀、振蕩器、溫育箱、無水乙醇溶液、移液器、一次性手套等?！緟⒖嘉墨I】1Guthrie R, Susi A. (1963) 小兒科2McCaman M W, Robins E (1962) J.Lab.臨床醫(yī)學(xué) 59 8853Wendel U, Hummel W, Langenbeck U (1989)生物化學(xué)年鑒 180