芳香胺類藥物特殊雜質(zhì)的檢驗(yàn)

1、藥品檢驗(yàn)技術(shù)課程單元教學(xué)設(shè)計(jì)情境：芳香胺類藥物的分析（07） 任務(wù)：芳香胺類藥物特殊雜質(zhì)的檢驗(yàn)(03) 教學(xué)目標(biāo)設(shè)計(jì)序號5上課地點(diǎn)理實(shí)一體化教室授課形式講授、學(xué)生操作練習(xí)教 學(xué) 目 標(biāo)技能目標(biāo)知識目標(biāo)掌握芳胺類藥物的雜質(zhì)檢查、苯乙胺類藥物的雜質(zhì)檢查。掌握芳香胺類藥物特殊雜質(zhì)的檢驗(yàn)方法教 學(xué) 重 點(diǎn)對乙酰氨基酚中乙醇溶液的澄清度與顏色檢查、鹽酸普魯卡因中對氨基苯甲酸的檢查、苯乙胺類藥物中酮體及有關(guān)物質(zhì)的檢查教 學(xué) 難 點(diǎn)對乙酰氨基酚中乙醇溶液的澄清度與顏色檢查、鹽酸普魯卡因中對氨基苯甲酸的檢查、苯乙胺類藥物中酮體及有關(guān)物質(zhì)的檢查能力訓(xùn)練任務(wù)及案例通過結(jié)合案例進(jìn)行實(shí)驗(yàn)講解，使同學(xué)們增強(qiáng)學(xué)習(xí)興趣，提

2、高課堂積極性。教學(xué)進(jìn)程設(shè)計(jì)（下面各格均可合并）步驟教學(xué)內(nèi)容教學(xué)方法教學(xué)手段學(xué)生活動時(shí)間分配基礎(chǔ)知識講解雜質(zhì)的檢查方法教師舉例、點(diǎn)評、歸納概括引出知識點(diǎn)。任務(wù)引導(dǎo)同學(xué)們做好課堂筆記，畫出知識重點(diǎn)20分鐘案例分析例如：鹽酸去氧腎上腺素中有關(guān)物質(zhì)的檢查分組實(shí)驗(yàn)研究，增強(qiáng)同學(xué)們的實(shí)驗(yàn)操作能力25分鐘芳胺類藥物的雜質(zhì)檢查1對乙酰氨基酚中雜質(zhì)檢查對乙酰氨基酚的合成可以對硝基氯苯為原料，水解后制得對硝基酚，經(jīng)還原生成對氨基酚，再經(jīng)乙酰化而制得。反應(yīng)如下：也可以苯酚為原料，經(jīng)亞硝化及還原反應(yīng)制得對氨基酚。在生產(chǎn)過程中除可能引入一般雜質(zhì)外，還可能引入特殊雜質(zhì)。因此，中國藥典2010年版（二部）規(guī)定本品除了檢查酸

3、度、氯化物、硫酸鹽、重金屬、水分和熾灼殘?jiān)纫话汶s質(zhì)外，還需檢查以下項(xiàng)目。（1）乙醇溶液的澄清度與顏色 對乙酰氨基酚的生產(chǎn)工藝中使用鐵粉作為還原劑，可能帶入成品中，致使乙醇溶液產(chǎn)生渾濁。另外，中間體對氨基酚的有色氧化產(chǎn)物在乙醇中顯橙紅色或棕色。乙醇溶液的澄清度與顏色的檢查方法為：取本品1.0g，加乙醇10mL溶解后，溶液應(yīng)澄清無色；如顯渾濁，與1號濁度標(biāo)準(zhǔn)溶液比較，不得更濃；如顯色，與棕紅色2號或橙紅色2號標(biāo)準(zhǔn)比色液（附錄 A第一法）比較，不得更深。（2）對氨基酚及有關(guān)物質(zhì) 由于本品的生產(chǎn)工藝路線較多，不同的生產(chǎn)工藝所帶入的雜質(zhì)有所不同。這些有機(jī)雜質(zhì)主要包括中間體、副產(chǎn)物及分解產(chǎn)物，如對氨基酚

4、、對氯苯乙酰胺、鄰乙?；鶎σ阴０被印⑴嫉?、氧化偶氮苯、苯酪和酮亞胺等。對氨基酚及有關(guān)物質(zhì)的檢查，采用高效液相色譜法。其方法為：取本品適量，精密稱定，加溶劑甲醇-水（4:6）制成每1mL中約含20mg的溶液作為供試品溶液；另取對氨基酚對照品和對乙酰氨基酚對照品適量，精密稱定，加上述溶劑溶解并制成每1mL中約含對氨基酚1g和對乙酰氨基酚20g的混合溶液，作為對照品溶液。用辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸鹽緩沖液（取磷酸氫二鈉8.95g，磷酸二氫鈉3.9g，加水溶解至1000mL，加10%四丁基氫氧化銨溶液12mL）-甲醇（90:10）為流動相；檢測波長為245nm；柱溫為40；理論板數(shù)按對乙

5、酰氨基酚峰計(jì)算不低于2000，對氨基酚色譜峰的峰與對乙酰氨基酚峰的分離度應(yīng)符合要求。取對照品溶液20L，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使對氨基酚色譜峰的峰高約為滿量程的10%，再精密量取供試品溶液與對照品溶液各20L，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的4倍；供試品溶液的色譜圖中如有與對照品溶液中對氨基酚保留時(shí)間一致的色譜峰，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，含對氨基酚不得超過0.005%；其他雜質(zhì)峰面積均不得大于對照品溶液中對乙酰氨基酚的峰面積（0.1%）；雜質(zhì)總量不得過0.5%。對氨基酚對照溶液不穩(wěn)定，應(yīng)臨用前配制。（3）對氯苯乙酰胺 取對氨基酚及有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)下的供試品溶液作為供試品溶液

6、；另取對氯苯乙酰胺對照品適量，精密稱定，加上述溶劑溶解并制成每1mL中約含1g的溶液，作為對照品溶液。照高效液相色譜法試驗(yàn)（附錄 D）。用辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸鹽緩沖液（取磷酸氫二鈉8.95g，磷酸二氫鈉3.9g，加水溶解至1000mL，加10%四丁基氫氧化銨溶液12mL）-甲醇（60:40）為流動相；檢測波長為245nm；柱溫為40；理論板數(shù)按對乙酰氨基酚峰計(jì)算不低于2000，對氯苯乙胺峰與對乙酰氨基酚的分離度應(yīng)符合要求。取對照品溶液20L，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使對氯苯乙酰胺色譜峰的峰高約為滿量程的10%，再精密量取供試品溶液與對照品溶液各20L，分別注入液相色譜儀，

7、記錄色譜圖；按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，含對氯苯乙酰胺不得過0.005%。2鹽酸普魯卡因中對氨基苯甲酸的檢查鹽酸普魯卡因易發(fā)生水解作用，生成對氨基苯甲酸。經(jīng)長久貯存或高溫加熱，對氨基苯甲酸還可進(jìn)一步脫羧轉(zhuǎn)化為苯胺，苯胺又可被氧化為有色物質(zhì)，導(dǎo)致藥物療效下降，且毒性增加。其檢查方法為：取本品，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每1mL中含0.2mg的溶液，作為供試品溶液；另取對氨基苯甲酸對照品，精密稱定，加水溶解并定量制成每1mL中含1g的溶液，作為對照品溶液；取供試品溶液1mL與對照品溶液9mL混合均勻，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以含0.1%庚烷磺酸鈉的0.05mol/L

8、磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0）-甲醇（68:32）為流動相；檢測波長為279nm。取系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液10L，注入液相色譜儀，理論板數(shù)按對氨基苯甲酸峰計(jì)算不低于2000，鹽酸普魯卡因峰和對氨基苯甲酸峰的分離度應(yīng)大于2.0。取對照品溶液10L，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分峰高約為滿量程的20%。精密量取供試品溶液與對照品溶液各10L，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。供試品溶液色譜圖中如有與對氨基苯甲酸峰保留時(shí)間一致的色譜峰，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，不得過0.5%。苯乙胺類藥物的雜質(zhì)檢查1酮體本類藥物多由其酮體氫化還原制得，若還原不完全則可能在產(chǎn)品中引入酮體雜質(zhì)。腎上腺素、重

9、酒石酸去甲腎上腺素、鹽酸去氧腎上腺素及鹽酸異丙腎上腺素等均需檢查酮體雜質(zhì)。中國藥典2010年版（二部）采用的檢查方法為紫外-可見分光光度法，檢查依據(jù)為酮體在310nm波長處有最大吸收，而藥物本身在該波長處幾乎沒有吸收，見圖7-4。II圖7-4 重酒石酸去甲腺素及去甲腎上腺素酮的紫外吸收圖譜I0.005%重酒石酸去甲腺素溶液；II0.0025%去甲腎上腺酮（含等量的酒石酸）溶液例12：鹽酸去氧腎上腺素中酮體的檢查取本品2.0g，置100mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，取10mL，置于50 mL量瓶中，用0.01mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻。照紫外-可見分光光度法（附錄 A），在31

10、0nm的波長處測定吸光度，不得大于0.20。2有關(guān)物質(zhì)本類藥物結(jié)構(gòu)中多含有酚羥基，易被氧化，所以除了檢查酮體外還需檢查有關(guān)物質(zhì)，如鹽酸去氧腎上腺素、硫酸沙丁胺醇等。有關(guān)物質(zhì)檢查多采用色譜法，以便使藥物與結(jié)構(gòu)性質(zhì)相近的雜質(zhì)完全分離，避免相互干擾。中國藥典2010年版（二部）收載的本類藥物除鹽酸苯乙雙胍采用紙色譜法，鹽酸去氧腎上腺素及其注射液采用薄層色譜法，其余均采用高效液相色譜法檢查有關(guān)物質(zhì)。例13：鹽酸去氧腎上腺素中有關(guān)物質(zhì)的檢查取本品，加甲醇溶解并定量稀釋制成每1mL中約含20mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，加甲醇稀釋成每1mL中含約0.10mg的溶液，作為對照溶液。照薄層色譜法（

11、附錄VB）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10L，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以異丙醇-三氯甲烷-濃氨溶液（80:5:15）為展開劑，展開，晾干，噴以重氮苯磺酸試液使顯色。供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，與對照溶液的主斑點(diǎn)比較，顏色不得更深（0.5%）。該項(xiàng)檢查需避光操作。例14：鹽酸多巴胺中有關(guān)物質(zhì)的檢查取本品，加流動相溶解并稀釋制成濃度約為0.3mg/mL的溶液，作為供試品溶液；精密量取1mL，置100mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。取鹽酸多巴胺對照品與4-乙基鄰苯二酚適量，加流動相溶解并稀釋制成每1mL中分別含6g的混合溶液，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液。照高效液相色譜法（附錄V D）試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.005mol/L十二烷基硫酸鈉-乙腈-冰醋酸-0.1mol/L乙二胺四醋酸二鈉（700:300:10:2）為流動相；檢測波長為280nm。取系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液20L，注入液相色譜儀，鹽酸多巴胺峰和4-乙基鄰苯二酚峰的