五鶴續(xù)斷多糖的提取及動(dòng)態(tài)分布規(guī)律的研究

1、五鶴續(xù)斷多糖的提取及動(dòng)態(tài)分布規(guī)律的研究         【摘要】 目的以恩施州道地藥材五鶴續(xù)斷為原料，初步研究其多糖提取分離及其動(dòng)態(tài)分布規(guī)律。方法采用石油醚脫脂、熱水浸提、乙醇沉淀分離、sevage脫蛋白、冷凍干燥等方法提取分離續(xù)斷多糖，并采用蒽酮比色法測定續(xù)斷多糖的含量，了解其多糖的動(dòng)態(tài)分布規(guī)律。結(jié)果在提        【摘要】  目的以恩施州道地藥材五鶴續(xù)斷為原料，初步研究其多糖提取分離及其動(dòng)態(tài)分布規(guī)律。方法采用石油醚脫脂

2、、熱水浸提、乙醇沉淀分離、sevage脫蛋白、冷凍干燥等方法提取分離續(xù)斷多糖，并采用蒽酮比色法測定續(xù)斷多糖的含量，了解其多糖的動(dòng)態(tài)分布規(guī)律。結(jié)果在提取2次、加料液比為120、提取時(shí)間2 h、提取溫度為95 時(shí)，續(xù)斷多糖得率最高，三年生續(xù)斷根多糖分布最高。結(jié)論五鶴續(xù)斷多糖分布規(guī)律為：三年生根兩年生根一年生根葉，人工種植的續(xù)斷根野生根。 【關(guān)鍵詞】  五鶴續(xù)斷 多糖 提取分離 分布規(guī)律Abstract：ObjectiveTo extract and separate polysaccharide in Dipsacus asper and extract polysaccharide a

3、nd study its regularities.MethodsDuring the extraction of polysaccharide, the effects of extraction times, temperature, proportion and time on yield of polysaccharide investigated by orthogonal experiment. The separation procedure of precipitation with alcohol and purification from the removing prot

4、eins and fats were analyzed. The contents of polysaccharides were determined by anthrone colorimetry. ResultsThe results showed that the optimum parameters were as follows: 2 times extraction ratio of material solvent 1:20, the time 2h, the temperature was 95. ConclusionThe regularities of polysacch

5、aride distribution in Dipsacus asper is as follows: the polysaccharide in the roots grew for three years the one for two yearsfor one yearthe one in the leaves, the cultivation Wu-He Dipsacus roots the wild form.Key words：Wu-He Dipsacus asper；  Polysaccharide；Extraction；Separation procedure；

6、60; The regularities of distribution    五鶴續(xù)斷屬于川續(xù)斷科植物（Dipsacus asper），藥用部位為其干燥根，其產(chǎn)地以湖北鶴峰縣、五峰縣為主，并且是川續(xù)斷中的優(yōu)質(zhì)品1，具有補(bǔ)肝益腎、續(xù)接筋骨、抗骨質(zhì)疏松、止血安胎等功效，臨床上主要用于治療腰膝酸軟，跌打損傷，骨折，腰椎骨質(zhì)增生，先兆性流產(chǎn)和習(xí)慣性流產(chǎn)等癥狀2。已有研究表明，續(xù)斷根的熱水提取物中存在著抗補(bǔ)體多糖和具免疫調(diào)節(jié)活性的高分子活性成分3。多糖尤其是中藥多糖因具有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能及抗腫瘤等藥理作用，而且?guī)缀鯖]有毒性，愈來愈成為當(dāng)前的研究熱點(diǎn)。本研究以五鶴續(xù)斷為原料

7、，探究續(xù)斷多糖的提取和動(dòng)態(tài)分布規(guī)律，以拓寬五鶴續(xù)斷的應(yīng)用范圍和產(chǎn)品類型,為進(jìn)一步開展其藥用及保健方面的應(yīng)用開發(fā)奠定基礎(chǔ)。1  材料與儀器1.1  采樣及樣品預(yù)處理本研究所用材料均來自恩施州鶴峰縣走馬鎮(zhèn)萬寺坪道地藥材五鶴續(xù)斷GAP研究及種植基地，野生續(xù)斷采自GAP基地周圍的環(huán)境。采用隨機(jī)取樣的方法，分別取人工種植一年生、二年生、三年生和野生的新鮮植株各10株（其根生長三年以后木質(zhì)化，不能藥用），用無離子水將其根、莖、葉分別洗凈，切碎后放在105 的烘箱里殺青3060 min后，于80 下烘至恒重，將各樣品用粉碎機(jī)打成粉末，過60目篩，裝于試劑瓶中，貼上標(biāo)簽，置于干燥器內(nèi)貯存?zhèn)?/p>

8、用。1.2 儀器與試劑植物樣品粉碎機(jī)，756MC-紫外分光光度計(jì)，RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，HWS12電熱恒溫水浴鍋，DGX型電熱鼓風(fēng)干燥箱，磁力攪拌器，pH計(jì)（PHS-3C），電子天平，冷凍干燥機(jī)，低速大容量多管離心機(jī)，雙重蒸餾水器。95%乙醇、無水乙醇、氯仿、正丁醇、葡萄糖、石油醚、蒽酮、濃硫酸、HClO4、葡萄糖等，所有試劑均為分析純（由恩施州人合科貿(mào)有限責(zé)任公司提供），所用水為雙蒸水。2 方法2.1  續(xù)斷多糖的提取工藝流程石油醚脫脂熱水浸提水提液過濾冷凍濃縮乙醇沉淀多糖Sevage試劑去蛋白冷凍干燥測定含量。2.2 多糖含量測定多糖含量測定采用鄒琦主編的植物生理生化實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)中

9、蒽酮比色法4，采用葡萄糖作標(biāo)準(zhǔn)溶液，得線性回歸方程曲線為：Y=266.03X-3.004 7，相關(guān)系數(shù)r2=0.997 6。樣品中多糖的測定：吸取樣品溶液和蒸餾水（作空白）各1 ml，分別置于試管中，沿壁緩慢加入5 ml冷的蒽酮溶液，混合均勻后，在試管口蓋上玻璃塞，在沸水浴上加熱10 min后，在流水中冷卻20 min，在620 nm波長處以試劑空白作參比，測定吸光度，根據(jù)回歸曲線查出樣品中多糖的濃度。3 結(jié)果3.1  五鶴續(xù)斷中續(xù)斷多糖的提取影響續(xù)斷多糖提取率的因素很多，如料液比、溫度、時(shí)間以及提取次數(shù)等，為綜合分析各因素的影響程度，本實(shí)驗(yàn)采用4因素3水平正交實(shí)驗(yàn)5L9（34），以確定續(xù)斷多糖的最佳提取工藝。實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)見表1。表1  影響續(xù)斷多糖提取因素實(shí)驗(yàn)水平表（略）根據(jù)因素水平表1，按正交實(shí)驗(yàn)L9（34）浸提。將浸提液過濾、濃縮后，濃縮液加無水乙醇沉淀，4靜置過夜后離心(5 000 r/min，15 min)， Sevage試劑去蛋白，冷凍干燥，得續(xù)斷粗多糖, 重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次，正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。經(jīng)直觀分析，初步篩選出續(xù)斷多糖提取工藝的最佳水平組合為A2B3C2D2。表2  續(xù)斷多糖提取正交實(shí)驗(yàn)L9（34）結(jié)果（略）表3&