番茄紅素對急性肺損傷大鼠肺泡巨噬細(xì)胞影響

1、    番茄紅素對急性肺損傷大鼠肺泡巨噬細(xì)胞影響            作者：董殿軍，林曉明時間：2007-11-22 11:41:00                     【關(guān)鍵詞】  番茄紅素；急性肺損傷；肺泡巨噬細(xì)胞；吞

2、噬功能摘要： 目的   觀察番茄紅素對急性肺損傷大鼠肺泡巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響。方法   以05，10，30mg/(kgbw)的番茄紅素連續(xù)給雄性Wistar大鼠灌胃30d，用脂多糖制造大鼠急性肺損傷模型，分別在1，4，6h后支氣管肺泡灌洗，檢測肺泡巨噬細(xì)胞吞噬功能、細(xì)胞計數(shù)以及肺相對重等指標(biāo)。結(jié)果   在各劑量番茄紅素作用下，肺泡巨噬細(xì)胞吞噬功能明顯增強(qiáng)，與模型組相比，注射脂多糖1h后，喂飼番茄紅素組吞噬功能增強(qiáng)，增強(qiáng)率分別為112%，279%，381%;4h后，增強(qiáng)率分別為59%，44%，170%；6h后，增強(qiáng)率分別為166%，1

3、52%和219%。番茄紅素3個劑量組之間呈劑量反應(yīng)關(guān)系(P<005)。結(jié)論   番茄紅素在05，10，30mg/(kgbw)劑量下能增強(qiáng)肺泡巨噬細(xì)胞的吞噬功能。關(guān)鍵詞： 番茄紅素；急性肺損傷；肺泡巨噬細(xì)胞；吞噬功能Effect of lycopene on function of pulmonary alveolar macrophages of rat's acute lung injury   Abstract： Objective   To study the effect of lycopene on the f

4、unction of pulmonary alveolar macrophages(PAMs)of rat's acute lung injury(ALI).Methods   Male rats were gavaged continuously by lycopene with 05,10,30mg/kg for 30 days;Lipopolysaccharide was used to make the model of ALI rats.After 1hour,4 and 6hours,bronchoalveolar lavage was done，and

5、 the function of PAMs,the amount of PAMs and the lung relative weight were determined.Results   Lycopene could increase the phagocytic function of PAMs significantly .Compared with the model group,the phagocytic function of PAMs was increased significantly in lycopene groups,with increasin

6、g rates of 112%,279%,381% after injection of LPS for 1 hour,with increasing rates of 59%,44%,170% after injection of LPS for 4 hours,and with increasing rates of 166%,152%,219% after injection of LPS for 6 hours,respectivelely  compared with the model group.The phagocytic function of PAMs was i

7、ncreased obviously by three different dose of lycopene,showing a doseresponse relationship(P<005).Conclusion   Lycopene,at the dose of 05,10 and 30mg/kg,could reinforce the phagocytic function of PAMs.Key words： lycopene;acute lung injury(ALI);pulmonary alveolar macrophages(PAMs)；phagoc

8、ytic function      研究顯示，番茄紅素具有抗氧化、預(yù)防腫瘤和心血管疾病以及調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能等多種生理功能，是良好的抗氧化劑1-6。為觀察番茄紅素對脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致急性肺損傷(acute lung injury,ALI)大鼠肺泡巨噬細(xì)胞(pulmonary alveolar macrophages,PAMs)吞噬功能的影響，為番茄紅素的開發(fā)提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)進(jìn)行了本研究。1   材料與方法11   主要儀器與試劑   LPS(美國Sig

9、ma公司)。番茄紅素由北京聯(lián)合大學(xué)生物活性與功能食品重點(diǎn)實驗室應(yīng)用超臨界流體萃取技術(shù)分離純化，純度95%。RPMI1640培養(yǎng)基(美國Hy Clionepierce公司)。小牛血清(天津市財慧生化制品廠)。其他試劑均為國產(chǎn)分析純。B80型低速自動平衡離心機(jī)(河北省安新縣白洋離心機(jī)廠)；724微機(jī)型可見光分光光度計(上海光學(xué)儀器廠)；CO2培養(yǎng)箱(Yamato，日本)；超凈工作臺(北京半導(dǎo)體設(shè)備廠)。12   實驗動物及處理   將體重為160170g的清潔級雄性Wistar大鼠(北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實驗動物科學(xué)部提供)120只，隨機(jī)分為正常對照組(對照組)、L

10、PS損傷模型組(模型組)及番茄紅素05，10和30mg/(kgbw)劑量組，每組8只。番茄紅素避光水浴以大豆色拉油溶解，以灌胃方式給予，根據(jù)動物體重調(diào)整番茄紅素濃度，灌胃量12ml，對照組和模型組在同樣條件下組予等量大豆色拉油，連續(xù)灌胃30d。13   Wistar大鼠肺泡巨噬細(xì)胞的獲取131   支氣管肺泡灌洗   參照文獻(xiàn)7進(jìn)行。132   細(xì)胞存活率測定   取肺支氣管原位灌洗(BALF)細(xì)胞懸液10l與01%臺盼藍(lán)溶液以1：1的比例混合，立即用細(xì)胞計數(shù)盤鏡下計數(shù)。細(xì)胞存活率在95%以上，

11、方可進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)和吞噬功能測定。14   觀察指標(biāo)及方法   (1)肺的一般指標(biāo)：肺的肉眼觀察及肺切片的鏡下觀察。(2)細(xì)胞計數(shù)：BALF以1800r/min離心5min，再以RPMI1640培養(yǎng)液沖散細(xì)胞塊、洗滌細(xì)胞2次，棄去上清液。沉淀部分以含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液調(diào)勻細(xì)胞后，取少量細(xì)胞懸液加入等體積的1%冰醋酸，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。按實驗要求配制成細(xì)胞濃度為10×105個/ml的巨噬細(xì)胞懸液備用。(3)細(xì)胞吞噬功能的測定：參照文獻(xiàn)8進(jìn)行。15   統(tǒng)計分析   采用SPSS 100軟件進(jìn)行

12、單因素方差分析。2   結(jié)果21   番茄紅素對ALI大鼠肺臟的影響(表1)   表1可見，在本實驗條件下，與對照組比較，模型組、番茄紅素05，10，30mg/(kgbw)劑量組右肺重量和肺體比有增加趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。腹腔注射脂多糖后，模型組大鼠肺部肉眼可見體積略有增大，肺表面存在散在的出血點(diǎn)。對照組光鏡下觀察，可見肺組織結(jié)構(gòu)清楚，肺泡內(nèi)無白細(xì)胞浸潤和紅細(xì)胞。脂多糖損傷組光鏡下觀察，可見肺內(nèi)血管充血，腔內(nèi)有炎性細(xì)胞滯留，部分血管壁上皮脫落，周圍有中性粒細(xì)胞浸潤；支氣管壁呈炎性灶狀細(xì)胞浸潤，肺泡隔增寬變厚，肺泡內(nèi)可見水腫液，部分

13、可見肺泡結(jié)構(gòu)破壞。但腹腔注射多糖1，4，6h 3個時點(diǎn)之間的病理改變未見明顯區(qū)別。表1   番茄紅素對ALI大鼠右肺重量的影響（略）注：肺體比=右肺(濕)重（mg）/體重(g）；n822   番茄紅素對ALI大鼠BALF中PAMs數(shù)量的影響(表2)   本實驗條件下，與對照組比較，在注射脂多糖1，4，6h后，模型組和番茄紅素05，10，30mg/(kgbw)劑量組肺泡巨噬細(xì)胞數(shù)量顯著增高(P<001)；番茄紅素各劑量組之間，隨著蕃茄紅素的劑量增加，肺泡巨噬細(xì)胞數(shù)量有下降趨勢，但均高于對照組。表2   番茄紅素

14、對ALI大鼠BALF中PAMs的影響（略）注：與對照組比較，aP<005，bP<001；與模型組比較，cP<001；n823   番茄紅素對ALI大鼠PAMs吞噬功能的影響(表3)   在本實驗條件下，與對照組比較，模型組和番茄紅素各劑量組吞噬功能顯著增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<005）。在注射脂多糖后，模型組及番茄紅素各劑量組肺泡巨噬細(xì)胞吞噬功能都有所增強(qiáng)；從時間上看，注射脂多糖1h后各組增加更為明顯。3   討論本實驗中，與對照組比較，模型組和番茄紅素各劑量組右肺重量和肺體比有增加趨勢。與對照組比較，模型組

15、肉眼和光鏡下可見肺病理結(jié)構(gòu)明顯改變，說明在本實驗條件下，腹腔注射脂多糖6mg/kg造成了大鼠急性肺損傷。與對照組比較，脂多糖損傷組肺泡巨噬細(xì)胞數(shù)量增多明顯。說明由于脂多糖造成肺損傷后，可能是大量的肺泡巨噬細(xì)胞向肺部聚集吞噬的結(jié)果。同時，隨著番茄紅素劑量的增加，肺泡巨噬細(xì)胞數(shù)量有減少趨勢，但高于對照組。表明隨著番茄紅素劑量增加，可能在一定程度上緩解由于吞噬活動造成的肺泡巨噬細(xì)胞聚集作用。實驗表明，在注射脂多糖1，4，6h后的不同時點(diǎn)內(nèi)，隨著番茄紅素劑量增加，肺泡巨噬細(xì)胞吞噬功能逐漸增強(qiáng)；在脂多糖注射6h后，與模型組比較，番茄紅素30mg/(kgbw)劑量組肺巨噬細(xì)胞吞噬功能差異有統(tǒng)計學(xué)意義。說明番茄紅素在一定劑量下，可能對脂多糖造成的急性肺損傷的大鼠的肺泡巨噬細(xì)胞有一定的保護(hù)作用，從而維持其吞噬活性。表3   番茄紅素對ALI大鼠BALF中PAMs吞噬功能的影響（略）注：與對照組比較，aP<005，bP<0