益腎平喘活血合劑對哮喘氣道重塑大鼠血清及氣道上皮炎性因子的影

1、益腎平喘活血合劑對哮喘氣道重塑大鼠血清及氣道上皮炎性因子的影         作者：張燕萍，張元元，苗青，王書臣，譚素貞 【摘要】 目的初步探討益腎平喘活血合劑對哮喘氣道重塑大鼠血清及氣道上皮炎性因子的影響。方法SD大鼠60只，隨機分為正常組，造模組，激素組和中藥高、中、低劑量組各10只。按文獻方法制成支氣管哮喘模型。用放免法測定血               

2、60;         作者：張燕萍，張元元，苗青，王書臣，譚素貞【摘要】  目的初步探討益腎平喘活血合劑對哮喘氣道重塑大鼠血清及氣道上皮炎性因子的影響。方法SD大鼠60只，隨機分為正常組，造模組，激素組和中藥高、中、低劑量組各10只。按文獻方法制成支氣管哮喘模型。用放免法測定血清IL-2、IL-4濃度，免疫組化法測定大鼠氣道TGF-，苦味酸天狼星紅染色，觀察氣道膠原分布和變化。結(jié)果與正常組比較，中藥3個組血清IL-2水平下降，IL-4水平升高均輕于造模組和激素組，與造模組比較有顯著差異（P<0.0

3、1），與激素組比較無顯著差異（P>0.05）；中藥組組間比較，高、中劑量組優(yōu)于低劑量組（P<0.05）。TGF-免疫組化造模組陽性反應最強，呈深棕色，激素組，中藥3個組陽性反應稍弱，呈棕黃色至淺黃色，正常組呈淡淺黃色?？辔端崽炖切羌t染色，偏振光顯微鏡觀察，造模組支氣管粘膜及上皮下型和型膠原纖維明顯增多；激素組較造模組減少，中藥低劑量組改變與激素組類似，中藥中、高劑量組膠原纖維沉積少于激素組；正常組可見少量膠原纖維分布。結(jié)論益腎平喘活血合劑治療哮喘慢性持續(xù)期的作用途徑，可能有一部分是通過調(diào)節(jié)IL-2、IL-4、TGF-水平，減少氣道壁膠原等來延緩支氣管哮喘氣道重塑的形成。 【關(guān)鍵詞】

4、  支氣管哮喘； 氣道重塑； 炎性因子 ChinaAbstract：ObjectiveTo investigate the effect of YiShenHuoXue decoction on serum inflammation factor of bronchus asthma airway remolding model.MethodsSixty SD rats were randomly divided into six groups: blank group,asthma group,hormone group, and high, middle and low

5、 dosage Chinese medicine groups, 10 rats in each group.The asthmatic model was established by sensitization and challenge with ovalbumin.Radioimmunoprecipitation was used to determine the contents of serum IL-2, IL-4.  ELISA was used to measure the level of serum TGF-. Picric acid sirius red dy

6、eing was used to observe the dostritmtion and change of collagen in the rat airway.  Results(1) Compared with the blank group, serum IL-2 was descreased, and IL-4 was increased in other five groups. The change of rat's serum in the three Chinese medicine groups was smaller than in the asthm

7、a group and hormone group. The levels of serum IL-2, IL-4 among Chinese medicine groups and the asthma group were different. （P<0.01）. They were similar among the Chinese medicine groups and hormone group （P>0.05）The high and middle dosage groups were better than the low dosage group （P<0.0

8、5）.(2) The positive reaction of serum TGF- in the asthma group was the strongest, deep brown look. The positive reaction of serum TGF- in the hormone group and the Chinese medicine were much lighter, brown and buff look.The blank group looked like pale buff color. (3)In picric acid sirius red dyeing

9、 and  polarizable optic microscope, tapeand tape collagen in bronchus mucous membrane and under the epidermis of  the asthma group increased obviously. The change of Chinese low dosage medicine group and the hormone group were smaller, which were less than the asthma group. In the Chinese

10、middle and high dosage medicine groups , the collagen textile fiber was less than the hormone group. There was a little collagen textile fiber in the blank group. ConclusionYiShenHuoXue decoction may control the level of rat serum IL-2 , IL-4 and TGF- in the bronchus asthma airway remolding model, r

11、educe the collagen in the cliff of the airway, which may slow the remodeling of bronchus in asthma rats.Key words：Bronchus asthma ;   Airway remolding ;   Inflammation factor    益腎平喘活血合劑是我院呼吸科治療支氣管哮喘的常用方劑，在臨床上取得了較好的療效。我們建立了大鼠支氣管哮喘模型（以下簡稱哮喘模型）以觀察其氣道重塑的改變。通過益腎平喘活血合劑對

12、其干預，初步探討益腎平喘活血合劑治療哮喘慢性持續(xù)期的作用途徑，觀察其對與哮喘氣道重塑密切相關(guān)的血清白細胞介素2（IL-2）、白細胞介素4（IL-4）與大鼠氣道上皮轉(zhuǎn)化生長因子-（TGF-）表達的影響，為臨床應用提供可靠的理論基礎(chǔ)。1  材料與儀器1.1  動物健康雄性SD大鼠，體質(zhì)量(200±10)g ，60只。北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供許可證編號：SOXK(京)20020203。1.2  藥品卵蛋白（ovalbumin OVA）Grade，購于Sigma公司；滅活百日咳桿菌苗購于北京生物制品研究所；氫氧化鋁購于北京市化學試劑公司（批號 200

13、40618）；3.5%水合氯醛，（批號 20050916）西苑醫(yī)院制劑室提供；潑尼松購于天津力生制藥股份有限公司（批號0410086 ）；血清IL-2、IL-4放免試劑盒購于北京華英生物技術(shù)研究所（批號20040625 ）；免疫組化試劑盒（SP-9001）美國ZYMED公司；濃縮型DAB試劑盒，北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；TGF-抗體，美國Santa Cruz生物技術(shù)公司益腎平喘活血合劑補骨脂、生地、 川芎、赤芍、炙麻黃、杏仁、穿山龍、茯苓、甘草，由中國中醫(yī)科學院西苑醫(yī)院制劑室制備（批號 20050321），1ml藥液4 g生藥量，再根據(jù)實驗要求進行稀釋）。1.3  儀器402型醫(yī)

14、用霧化器，上海合力醫(yī)療器械廠生產(chǎn)；802臺式離心機，上海醫(yī)療器械廠生產(chǎn)；全自動RIA16免疫計數(shù)器，美國Capintec公司生產(chǎn)；石蠟切片機，德國LEICA公司生產(chǎn)；圖像分析系統(tǒng)，德國LEICA-Q550CW;偏振光顯微鏡，德國NIKON公司。2  方法2.1  大鼠分組及哮喘模型的建立哮喘模型的建立：參考Temelkovski等13的方法，配置成每毫升含OVA 100 mg、Al(OH)3 100 mg、滅活百日咳桿菌約6×109個的溶液。第1步致敏：第1天每只大鼠腹腔注射以上溶液1 ml，第8天重復腹腔注射1 ml。第2步激發(fā)：第15天將致敏大鼠置于密閉噴霧箱，給予10g/l的OVA生理鹽水溶液，超聲霧化，每天激發(fā)20 min，連續(xù)14 d，制成支氣管哮喘模型。    60只大鼠隨機分為6組，在中國中醫(yī)科學院西苑醫(yī)院二級動物室飼養(yǎng)設(shè)施合格證號SYXK(京)20030008）開始實驗適應性喂養(yǎng)1周后開始實驗。分組：正常對照組（正常組）：腹腔注射及霧化均用生理