不同川芎藥材中川芎嗪及阿魏酸含量及指紋圖譜研究

1、栽培與育種不同川芎藥材中川芎嗪及阿魏酸含量及指紋圖譜研究朱長福1,石全信2,嚴(yán)玉平1,劉世威3,孫立亞1,劉芳菊1,同利琪13(11河北醫(yī)科大學(xué),河北石家莊050091;21石家莊樂仁堂藥業(yè)有限公司,河北石家莊050051;31河北瑞生藥業(yè)有限公司,河北石家莊050035摘要目的:測定不同產(chǎn)地不同季節(jié)的川芎藥材老芎和奶芎的川芎嗪及阿魏酸的含量,并建立指紋圖譜,以考察兩種川芎質(zhì)量。方法:采用W aters 液相色譜儀測定川芎嗪及阿魏酸含量。結(jié)果:老芎的川芎嗪及阿魏酸含量高過奶芎,灌縣產(chǎn)的老芎含量最高;不同產(chǎn)地的相同藥材品種的指紋圖譜相似度較好,而老芎和奶芎相似度較差。結(jié)論:老芎與奶芎的差別較大,

2、不宜作為同一藥材使用。關(guān)鍵詞川芎;奶芎;川芎嗪;阿魏酸;HP LC;指紋圖譜中圖分類號:R28212文獻標(biāo)識碼:A 文章編號:100124454(20080821113203D eter m i n a ti on and F i n gerpr i n t Ana lysis of Tetram ethylpyraz i n eand Feruli c Ac i d i n L igusticum chuanx iongZ HU Chang 2fu 1,SH IQuan 2xin 2,Y AN Yu 2p ing 1,L I U Shi 2wei 3,S UN L i 2ya 1,L iu

3、Fang 2ju 1,T ONG L i 2qi1(11Hebei Medicine University,Shijiazhuang 050091;21Shijiazhuang Lerentang Phar maceutical Co .L td,Shijiazhuang 050051;31Hebei Ruisheng Phar maceutical Co .L td,Shijiazhuang 050035,China Abstract Objective:T o deter m ine the contents of tetra methyl pyrazine (T MP and ferul

4、ic acid in L igusticum chuanxiong fr om different p r oducing areas and seas ons 1Methods:The contents of T M P and ferulic acid were deter m ined by HP LC,and then analyzed by Chr omat ographic Finger p rints 1Results:The contents of T M P and ferulic acid fr om different seas ons were obvi ously d

5、ifferent fr om each other 1It was much higher in “l(fā)aoxi ong ”than that in “naixi ong ”1The si m ilarity of finger p rints was high if the sa mp les were collected fr om the sa me seas on,or the sa me areas,but not different seas ons .Conclusi ons:The contents of T M P and ferulic acid were different

6、 fr om different p r oducing areas 1The evident variety of L igusticum chuanxiong s finger p rints fr om different collecting seas ons,Laoxi ong and Naixi ong,was not relevant for clinical use as the sa me medicine 1Key words L igusticum chuanxiong Hort 1;Naixi ong;Tetra methyl pyrazine (T M P ;Feru

7、lic Acid;HP LC;Finger p rint3通訊作者:同利琪。傘形科川芎L igusticum chuanxiong Hort 1的干燥根莖,為中醫(yī)臨床活血行氣、祛風(fēng)止痛之要藥。傳統(tǒng)使用的川芎均指老芎。通常在無性繁殖過程中,于大寒后立春前,采挖壩區(qū)未成熟的根莖稱“奶芎”,運上山育苓1。奶芎也主要出口日本,也有些農(nóng)戶將奶芎在藥材市場作川芎或奶芎出售。此時距川芎(老芎收獲期尚有4個月左右,奶芎則擾亂藥材市場,嚴(yán)重影響川芎藥用的質(zhì)量2。老芎與奶芎是否有明顯區(qū)別,筆者測定了灌縣、都江堰、彭州及江西九江的川芎、奶芎中川芎嗪和阿魏酸含量,并建立指紋圖譜及相似度比較。1儀器與材料211川芎嗪2

8、1111色譜條件:色譜柱為依利特Hypersil ODS2(416mm ×150mm ,5m ,流動相甲醇21%醋酸(2080,流速110m l/m in,檢測波長322nm ,柱溫30,進樣量20l 。21112供試品溶液的制備3:分別取粉碎、過30目篩的6個樣品粉末1g,精密稱定,加稀乙醇10m l,超聲提取1h,過濾,殘留物用2m l 稀乙醇洗滌,過濾,合并濾液,定容至10m l,經(jīng)0145m 微孔濾膜過濾,作為供試品溶液。對照品溶液的制備:精密稱取干燥至恒重的鹽酸川芎嗪對照品適量,加甲醇制成1819g/m l 的對照品溶液。21113標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:稱川芎嗪對照品3166mg,

9、置10m l 容量瓶,用甲醇定容為A 液(含川芎嗪28816g/m l ,取A 液5m l,置100m l 容量瓶,用甲醇定容為B 液。分別取B 液0125、0175、1125、3111 Journal of Chinese MedicinalM aterials 第31卷第8期2008年8月1175、2125m l 置于10m l 容量瓶,用甲醇定容后混勻,按上述條件,各進樣20l,測定,計算得回歸方程:y =1184598E 23+1142754E 2015x,r =019997,進樣量在0100885g 0107965g 線性良好。21114加樣回收率試驗:精密稱取已知川芎嗪含量的川芎6

10、份,加入川芎嗪對照品,同法制備供試液,測定,計算回收率為99112%,RS D =1178%。21115樣品測定結(jié)果:6種樣品供試液進樣20l,按上述條件測定。結(jié)果見表1。212阿魏酸21211色譜條件:色譜柱為依利特Hypersil ODS2,柱溫35,流速1m l/m in,波長322nm ,流動相:甲醇2水236%乙酸(30673,進樣量為10l 。21212供試品溶液制備4:取川芎藥材粉末約1g 精密稱定,置于具塞錐形瓶, 加95%(V /V 乙醇10m l,放置過夜,超聲提取20m in,過濾,揮干溶劑后加20 m l 水溶解,再分別以20、20、10m l 乙酸乙酯萃取3次,合并萃

11、取液,揮干,殘渣加甲醇溶解并定容至10m l,經(jīng)0145m 微孔濾膜過濾,即得。對照品溶液制備:精密稱取干燥至恒重的阿魏酸對照品適量,加甲醇制成011mg/m l 的對照品溶液。21213標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:精密稱取阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)品約50mg,加甲醇少量使溶解,加水定容為100m l,精密量取 20m l 置100m l 棕色量瓶,加水稀釋至刻度,搖勻,即得011mg/m l 的對照品儲備液。分別吸取該溶液014、018、112、116、210m l,置10m l 量瓶,用水稀釋至刻度,搖勻,吸取上述溶液各10l 進樣,測定得回歸方程為:y =728472+32882153x,r =0199914,進樣

12、量在40200g 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。21214加樣回收率測定:精密稱取已知阿魏酸含量的川芎樣品5份,每份約0145g,加入阿魏酸對照品適量(按11的比例加入,按供試品溶液制備方法制備并進行測定,加樣回收率為99190%,RS D 為2131%。21215樣品測定結(jié)果:分別取6種川芎樣品溶液,進樣10l,記錄圖譜,計算結(jié)果(見表1:不同川芎藥材(老芎、奶芎中川芎嗪及阿魏酸的含量,老芎均遠高于奶芎,灌縣老芎最高。3指紋圖譜的建立311色譜條件照阿魏酸測定色譜條件和供試液制備法,內(nèi)標(biāo)物為上述阿魏酸對照液;理論塔板數(shù)n =6758123,保留時間為30m in 。312方法與結(jié)果分別取上述6種川芎藥

13、材提取液進樣10l 。記錄圖譜30m in 。用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)軟件處理數(shù)據(jù),將3種老芎及3種奶芎計6種川芎藥材的色譜圖分別比較并多點校正與匹配,得到可全面反映多個色譜圖特征的對照模式色譜圖(見圖13。以此模式為基準(zhǔn),計算每個色譜圖的相似度。表16種川芎藥材中阿魏酸及川芎嗪含量編號川芎藥材樣品質(zhì)量(g 阿魏酸含量(%樣品質(zhì)量(g 川芎嗪含量(%江西九江,奶芎01997701000611038219187注:“日本種子”指用日本的川芎種子在都江堰種植的材料圖13種不同產(chǎn)地老芎指紋圖譜S11灌縣S21都江堰S31九江R 1對照品圖23種不同產(chǎn)地奶芎指紋圖譜S11日本種子S21彭州S3

14、1九江R 1對照品指紋圖譜和相似度計算結(jié)果,3個不同產(chǎn)地的老芎樣品相似度較為接近,相似值在0195以上;3個不同產(chǎn)地奶芎樣品相似度也較為接近,其中都江堰的日本種子奶芎與九江產(chǎn)奶芎樣品最為相似,其相似度在0195以上;由6種不同產(chǎn)地、不同品種的川芎藥材指紋圖譜及相似度計算比較可以看出老芎與奶芎之間的相似性較差,它們之間的相似值均低于0195。4111Journal of Chinese MedicinalM aterials 第31卷第8期2008年8月 圖36種不同產(chǎn)地川芎藥材指紋圖譜S11灌縣S21都江堰S31九江S41日本種子S51彭州S61九江R 1對照品4討論411對不同地區(qū)不同季節(jié)采

15、收的川芎藥材(含老芎及奶芎分析結(jié)果表明,川芎嗪的含量差異較大。文獻有關(guān)川芎中川芎嗪含量報道,從千萬分之幾到千分之幾,相差萬倍5,不排除確有川芎嗪含量異常高的品種,但亦不能排除因測試干擾所致。阿魏酸對照溶液不穩(wěn)定,隨著時間延長,色譜中雜質(zhì)峰明顯增高,同時發(fā)現(xiàn)不同溶劑對樣品分解有明顯的影響,在甲醇中分解較快,而采用甲醇溶解加水定容,分解較慢。412通過6份川芎藥材提取液的有效部位指紋圖譜中包括川芎嗪和阿魏酸在內(nèi)的12個以上主要色譜峰相對保留時間分析,其RS D 均小于3%,表明主要色譜峰的總面積可以反映有效部位在不同樣本中的絕對含量,以阿魏酸作為指標(biāo)峰所建立的川芎有效部位定性鑒別的指紋圖譜,可以鑒

16、別真?zhèn)?評價中藥材、半成品和成品質(zhì)量均勻性和穩(wěn)定性,有參考價值。參考文獻1祁淑玲1川芎的研究及應(yīng)用進展1天津藥學(xué),2005,17(1:6126412陳閡軍,吳永江,范曉暉,等1色譜指紋圖譜分析技術(shù)用于鑒別中藥川芎產(chǎn)地1中國中藥雜志,2003,28(7:606261013劉圓,賈敏如1奶芎、山川芎與川芎藥材質(zhì)量研究1中藥材,2003,26(9:623262514宋金春,胡傳芹,劉紅,等1川芎高效液相指紋圖譜的建立1中國藥房,2005,16(9:716271815孫新國,王濤,朱景申1逆流萃取2反相高效液相色譜法測定川芎中川芎嗪的含量1同濟醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2001,30(3:20922101(200

17、7-11-29收稿2008-04-08修回中藥材雜志來稿要求1來稿以科研論文、經(jīng)驗總結(jié)、簡報、譯文等形式均可?？蒲姓撐募敖?jīng)驗總結(jié)必須觀點明確,有分析,有結(jié)論,避免材料堆積羅列,字?jǐn)?shù)一般在4000字以內(nèi)(包括圖表。簡報及會議消息,字?jǐn)?shù)一般在1000字以內(nèi)。譯文可節(jié)譯或全譯,要求鄱譯準(zhǔn)確,文字流暢。2凡2000字以上的文章,請作者寫好200字左右的摘要,放在正文之前。研究論文,請附上英文標(biāo)題、英文摘要及關(guān)鍵詞(一般35個。3稿件力求語句通順,簡明精煉,用A4紙打印清楚;外文用印刷體書寫或打字;表格要簡煉,兩端開口,不用縱線,欄頭左上角不用斜線,除欄頭外,表身中不用或少用橫線;插圖用繪畫紙黑墨水筆正確繪制,要求黑白分明,圖注文字用鉛筆標(biāo)明。照片要清晰,盡可能附上底