調(diào)理脾胃復(fù)方對(duì)PTZ點(diǎn)燃癲癇模型阿片肽含量的影響

1、    調(diào)理脾胃復(fù)方對(duì)PTZ點(diǎn)燃癲癇模型阿片肽含量的影響        摘要：為了研究調(diào)理脾胃復(fù)方的抗癇作用，本實(shí)驗(yàn)采用放免法觀察大鼠PTZ點(diǎn)燃以及服用調(diào)理脾胃復(fù)方治療后，腦內(nèi)阿片肽含量的變化。結(jié)果表明，PTZ點(diǎn)燃大鼠海馬內(nèi)亮腦啡肽(L-ENK)、-內(nèi)啡肽(-EP)明顯升高，強(qiáng)啡肽A1-13(DYNA1-13)顯著降低；大腦皮層內(nèi)L-ENK明顯升高，DYNA1-13、-EP無明顯變化。用調(diào)理脾胃復(fù)方治療后，上述腦區(qū)L-ENK、-EP顯著減少，DYNA1-13明顯增加。提示癲癇

2、發(fā)作及調(diào)理脾胃復(fù)方抗癇作用可能與腦內(nèi)L-ENK、-EP、DYNA1-13的變化有關(guān)。關(guān)鍵詞：調(diào)理脾胃復(fù)方；PTZ點(diǎn)燃大鼠；亮腦啡肽；-內(nèi)啡肽；強(qiáng)啡肽A1-13 The Effects of Spleen and Stomach Regulating Prescriptions on Opioid Peptide Concentration in PTZ Kindled RatsQian Huinan(錢會(huì)南),Wang Hongtu(王洪),Qi Zhijia(齊治家),et al.(Beijing University of Traditional Chinese Medicine, Bei

3、jing 100029)ABSTRACT: Radioimmunologic method was used to evaluate the influence of th e complex prescription of regulating the spleen and stomach on the pentylenetetr azole (PTZ) kindled rats and changes of the opioid peptides concentration in th e brain. In the hippocampus of the PTZ kindled rats,

4、 the leu cine-enkephal in (L-ENK) and -endorphin (-EP) were increased and dynorphin A1-13 (DYN A1-13) decreased. After treated with the complex prescription, the L-ENK a nd-EP were markedly decreased, while DYNA1-13 increased. It indic ates that the epileptic attack and the antiepileptic effect of t

5、he complex prescription may relate with the changes of the L-ENK、-Ep and DYNA1-13 in the brain.KEY WORDS: Spleen and Stomach Regulating Presoription; Epil epsy; Leucine-enkephalin; -endorphin; Dynorphin; PTZ Kindled Rat 癲癇是神經(jīng)系統(tǒng)的常見病、多發(fā)病，然而其確切的發(fā)病機(jī)理至今尚未完全闡明，目前對(duì)該病也缺少理想的根治手段。有關(guān)研究資料表明，神經(jīng)肽作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的重要遞質(zhì)或調(diào)質(zhì)

6、，在癲癇發(fā)病中起著重要作用，其中的阿片肽等肽類物質(zhì)扮演著十分重要的角色，但尚未見到PTZ點(diǎn)燃大鼠模型腦內(nèi)亮腦啡肽(L-ENK)、-內(nèi)啡肽(-EP)、強(qiáng)啡肽A1-13(DYNA1-13)含量變化的有關(guān)報(bào)道。為探討癲癇發(fā)病機(jī)制和中藥調(diào)理脾胃復(fù)方的治療作用，我們觀察了PTZ點(diǎn)燃大鼠癲癇模型部分腦區(qū)L-ENK、-EP、DYNA1-13含量的變化。1材料與方法1.1材料戊四唑(PTZ)Sigma公司產(chǎn)品，用前以生理鹽水新鮮配制成溶液。調(diào)理脾胃復(fù)方(草果、知母、厚樸、半夏、茯苓、黃芩、甘草等)，購于北京中醫(yī)藥大學(xué)門診部，按乙醇提取法提取濃縮，生藥含量為2g/mL，置冰箱待用。抗癇靈(Antipilepsi

7、rine,AES)，購于北京醫(yī)科大學(xué)藥廠，用0.5%羥丙甲基纖維素，0.1%吐溫80和雙蒸水配制成混懸口服液。L-ENK、-EP、DYNA1-13藥盒均由上海第二軍醫(yī)大學(xué)提供。1.2方法SD雄性大鼠，實(shí)驗(yàn)開始時(shí)體重(150±10)g，購自首都醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。造模組用PTZ亞驚厥劑量，32mg/kg，每日1次，腹腔注射，持續(xù)28d，停藥1周，再用相同劑量的PTZ測(cè)試，凡顯示連續(xù)5次2級(jí)以上驚厥的大鼠為達(dá)到點(diǎn)燃標(biāo)準(zhǔn)。大鼠驚厥發(fā)作評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：0級(jí)，沒有行為上的發(fā)作；級(jí)，節(jié)律性點(diǎn)頭或頭部顫搐；級(jí)，陣攣性咀嚼；級(jí)，頭部顫搐加前肢陣攣性抽搐；級(jí)，袋鼠姿勢(shì)(上身直立)；級(jí)，跌倒；級(jí)，強(qiáng)直性驚厥

8、。正常對(duì)照組給予相同劑量的生理鹽水。正常對(duì)照組大鼠10只，胃飼雙蒸水2mL/(kgd)；PTZ點(diǎn)燃大鼠分為3組，其中模型對(duì)照組10只，胃飼雙蒸水2mL/(kgd)；調(diào)理脾胃治療組(中藥組)，胃飼調(diào)理脾胃復(fù)方5g/(kgd)；AES治療組(西藥組)，胃飼抗癇靈0.5g/(kgd)；共維持28d。實(shí)驗(yàn)第63天，模型組PTZ點(diǎn)燃測(cè)試1h后，全部動(dòng)物斷頭活殺，迅速取出全腦，沸生理鹽水煮10min，將腦正中矢狀切開，分離出海馬、皮層，稱重后加1mL1mol/LHCl制成勻漿，室溫放置100min。取上清，置-70冰箱保存。測(cè)定采用放免法。嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。2結(jié)果2.1大鼠海馬內(nèi)L-ENK、-EP、

9、DYNA1-13測(cè)定結(jié)果見表1。表1大鼠海馬L-ENK、-EP、DYNA1-13含量變化(ng/g；±s；n=10)組別L-ENK-EPDYNA1-13模型組18.53±4.8723.47±5.032.68±0.68正常組9.45±2.19*10.82±2.57*6.10±0.95*西藥組9.38±2.08*14.05±2.18*5.02±1.29*中藥組10.20±2.12*12.37±1.80*4.89±1.32*注：與模型組比較，*0.05*P0.01；與正常

10、組比較P0.05 2.2大鼠大腦皮層內(nèi)L-ENK、-EP、DYNA1-13測(cè)定結(jié)果見表2。表2大鼠大腦皮層L-ENK、-EP、DYNA1-13含量變化(ng/g;±s；n=10)組別L-ENK-EPDYNA1-13模型組19.11±2.843.13±0.353.44±0.66正常組8.46±1.90*2.75±0.343.50±0.68西藥組9.40±1.72*2.94±0.293.59±0.74中藥組10.09±1.94*3.09±0.263.65±0.57注：與

11、模型組比較*P0.01 3討論給予動(dòng)物腦內(nèi)注射L-ENK、-EP可引起動(dòng)物癲癇樣活動(dòng)，并產(chǎn)生持續(xù)的癲癇樣放電，還可導(dǎo)致動(dòng)物點(diǎn)燃發(fā)作效應(yīng)1，2。腦室內(nèi)注射小劑量-EP能產(chǎn)生“邊緣性癲癇發(fā)作”，-EP還能降低PTZ誘導(dǎo)驚厥發(fā)作閾值，增強(qiáng)PTZ導(dǎo)致癲癇發(fā)作的敏感性3。因而有人提出ENK、-EP與癲癇發(fā)作有密切關(guān)系，屬內(nèi)源性致癇物質(zhì)。而DYN則與上述二者的作用不同。DYN注入動(dòng)物腦內(nèi)可提高PTZ及六氟雙乙基乙醚等致驚劑的驚厥閾值，對(duì)癲癇點(diǎn)燃性發(fā)作產(chǎn)生強(qiáng)烈的抑制作用，并升高海馬的后放電閾值，認(rèn)為DYN可能調(diào)節(jié)點(diǎn)燃發(fā)作的敏感性，為內(nèi)源性抗癇物質(zhì)4，5。王氏等報(bào)道杏仁核點(diǎn)燃、青霉素致癇等癲癇模型海馬內(nèi)ENK

12、含量顯著升高，而DYN則明顯下降6，7。沈氏等亦觀察到，聲源性驚厥易感大鼠海馬、大腦皮層內(nèi)ENK、-EP含量明顯增加8。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與上述報(bào)道基本相符。目前中醫(yī)對(duì)癲癇的治療多側(cè)重于熄風(fēng)定癇、豁痰開竊、鎮(zhèn)驚安神、育陰潛陽、活血化瘀等方面9，較少重視脾胃的作用。王洪教授根據(jù)內(nèi)經(jīng)強(qiáng)調(diào)脾胃為五臟樞軸的理論，結(jié)合多年臨床經(jīng)驗(yàn)，從調(diào)理脾胃入手，以草果知母湯為基礎(chǔ)方化裁組成調(diào)理脾胃方，治療癲癇等神志異常疾患，取得了較好療效。通過調(diào)理脾胃，使氣機(jī)調(diào)暢，不僅有利于化除痰濁，使之不再擾亂神志，又可使精微物質(zhì)化生正常，營血充足，而保持神志活動(dòng)正常；更為重要的是，由于脾胃氣機(jī)調(diào)暢，通過其“轉(zhuǎn)樞”作用，使其他臟腑氣機(jī)都能

13、得到調(diào)整，從而達(dá)到治療癲癇等多種神志異常疾患的目的。本室以往的研究表明10，11，該復(fù)方能有效對(duì)抗聽源性癲癇發(fā)作，PTZ閾值大發(fā)作及點(diǎn)燃和極量電休克驚厥發(fā)作，未見明顯毒副反應(yīng)。并對(duì)生長抑素mRNA的表達(dá)有影響。本實(shí)驗(yàn)觀察到PTZ點(diǎn)燃大鼠海馬內(nèi)L-ENK、-EP含量明顯增加，DYNA1-13含量顯著減少；大腦皮層內(nèi)L-ENK含量亦明顯升高，調(diào)理脾胃復(fù)方治療后，上述變化被拮抗或翻轉(zhuǎn)。我們認(rèn)為，癲癇發(fā)作及調(diào)理脾胃復(fù)方抗癇機(jī)制可能與腦內(nèi)L-ENK、-EP、DYNA1-13的變化有關(guān)。作者簡介：錢會(huì)南，女，42歲，醫(yī)學(xué)博士作者單位：北京中醫(yī)藥大學(xué)北京100029參考文獻(xiàn)1Cain DP and Corc

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