L-精氨酸對大鼠胰腺移植缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制(1)

1、    L-精氨酸對大鼠胰腺移植缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制(1)    】 目的 探討L-精氨酸 (L-Arginine，L-Arg)對大鼠胰腺移植缺血再灌注(I/R)損傷的影響及其機(jī)制。方法 SD大鼠作為供、受體行胰腺移植術(shù)，給予不同方式處理：假手術(shù)組(Sham)：只行開腹術(shù)；對照組(Control)：只行胰腺移植術(shù)，不行預(yù)處理；缺血預(yù)處理組(IPC)：在供胰切取前阻斷血供10min，然后再灌注10min；L-精氨酸組(L-Arg)：行胰腺移植術(shù)，再灌注前先經(jīng)下腔靜脈注射L-Arg 10mg/kg體重；L-

2、硝基精氨酸甲酯組(L-NAME)：供胰切取時(shí)阻斷血供10min，再灌注10min；然后行移植術(shù)，在再灌注前，先經(jīng)下腔靜脈緩慢注射L-NAME 10mg/kg體重。各組手術(shù)完成后，于再灌注6h檢測血清淀粉酶、腫瘤壞死因子-(TNF-)和一氧化氮(NO)水平，胰腺細(xì)胞凋亡指數(shù)、胰腺細(xì)胞bcl-2蛋白表達(dá)情況和胰腺組織病理改變。結(jié)果 L-Arg和IPC都降低TNF-水平(P<0.01)和細(xì)胞凋亡水平(P<0.01)，NO水平升高(P<0.01)。而L-NAME可阻斷該保護(hù)效應(yīng)。IPC和L-Arg均能激活bcl-2蛋白的表達(dá)。結(jié)論 L-Arg可以模擬IPC對大鼠胰腺移植I/R損傷的保

3、護(hù)作用，其機(jī)制與合成NO，激活bcl-2基因的表達(dá)有關(guān)。        【關(guān)鍵詞】 缺血；再灌注損傷；胰腺移植；一氧化氮                【Abstract】 Objective To study the protective effect of L-Arginine on ischemia reperfusion (I/R) injury a

4、ssociated with rat pancreas transplantation and to define a possible mechanism.Methods On the model of pancreas transplantation， male SD rats were randomly assigned to five groups (20 rats in each group)： Sham group(S)： laparotomy only； Control group(C)： pancreas transplantation only； IPC group： don

5、or pancreas underwent ischemic preconditioning (IPC) procedure (10-min ischemia and 10-min reperfusion) before harvest and transplant；L-Arginine group： L-Arg (10mg/kg) was injected into recipient animal via inferior vena cava before transplant； L-NAME group： donor pancreas underwent (IPC) procedure

6、(10-min ischemia and 10-min reperfusion) before harvest and L-NAME (10mg/kg) was injected into recipient animal via inferior vena cava before transplant. Serum amylase， tumor necrosis factor-(TNF-) and nitric oxide (NO) levels， apoptosis index of pancreas cells， bcl-2 protein and pancreatic patholog

7、ical changes were determined 6 h after the operation was completed.Results The significantly decreased values of TNF- and pancreas cells apoptosis levels but significantly increased NO content showed that L-arginine preconditioning can simulates the protective effects of IPC against I/R injury assoc

8、iated with pancreas transplantation， L-NAME can attenuate these protective effects. Both the IPC and L-arginine can decrease the apoptosis of pancreas cells by increasing bcl-2 gene expression.Conclusion L-arginine can simulate the protective effects of IPC against I/R injury associated with pancrea

9、s transplantation by producing NO and stimulating bcl-2 gene expression.        【Key words】 ischemia； reperfusion injury； pancreas transplantation； nitric oxide        缺血預(yù)處理(IPC)能有效預(yù)防組織器官的缺血再灌注(I/R)損傷，但其應(yīng)用并不方便。預(yù)處理研究的重進(jìn)展之

10、一，是從缺血預(yù)處理發(fā)展到藥物預(yù)處理，即用藥物代替缺血刺激，產(chǎn)生預(yù)處理樣保護(hù)效應(yīng)。        本實(shí)驗(yàn)在大鼠全胰十二指腸移植模型基礎(chǔ)上，觀察一氧化氮(NO)的前體物質(zhì)L-精氨酸(L-Arginine，L-Arg)對I/R損傷的影響，并探討其可能機(jī)制。    1 材料與方法    1.1 動(dòng)物分組和操作 雄性SD大鼠，體重250300g，由四川大學(xué)華西醫(yī)學(xué)中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。將大鼠隨機(jī)分為5組(n=20，供受體各10只)：假手術(shù)組(Sh

11、am組)：只行開腹術(shù)；對照組(Control組)：只行胰腺移植術(shù)，不行預(yù)處理；缺血預(yù)處理組(IPC組)：在供胰切取前作缺血預(yù)處理(阻斷血供10min，然后再灌注10min)；L-精氨酸組(L-Arg組)：行胰腺移植術(shù)，在供胰再灌注前，先經(jīng)下腔靜脈注射L-Arg (Sigma公司)10mg/kg體重；L-硝基精氨酸甲酯組(L-NAME組)：供胰切取前作缺血預(yù)處理(阻斷血供10 min，再灌注10 min)，然后行移植術(shù)，在供胰再灌注前，先經(jīng)下腔靜脈緩慢注射L-NAME (Sigma公司) 10mg/kg體重。 大鼠全胰十二指腸移植模型參照Lee等的方法1。大鼠于再灌注6h時(shí)，開腹取靜脈血及胰腺組

12、織送檢。        1.2 觀察指標(biāo)及檢測方法 (1)血清淀粉酶測定：由四川大學(xué)華西醫(yī)院檢驗(yàn)科日立2000型全身自動(dòng)生化分析儀測定。(2)血NO水平，按一氧化氮合酶酶法試劑盒 (晶美生物工程有限公司)說明測定。(3)血TNF-水平，按大鼠TNF- ELISA試劑盒(晶美生物工程有限公司)說明測定。(4)胰腺bcl-2蛋白表達(dá)水平，按bcl-2免疫組化染色試劑盒(博士德生物工程有限公司)說明測定，結(jié)果判斷：以細(xì)胞核膜、胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為bcl-2基因蛋白表達(dá)陽性。根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度與陽性對照片()的比較分為強(qiáng)陽性

13、()，中等度陽性()，弱陽性()和陰性()；在同一切片中陽性細(xì)胞總數(shù)30%判為陽性。如強(qiáng)陽性或（和）中等度陽性細(xì)胞總數(shù)>30%判為過表達(dá)。(5)胰腺細(xì)胞凋亡指數(shù)，由四川大學(xué)華西醫(yī)院腫瘤中心流式細(xì)胞儀檢測。 (6)胰腺病理，標(biāo)本HE染色，送四川大學(xué)華西醫(yī)院病理科。        1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用方差分析和q檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有顯著性標(biāo)準(zhǔn)。      &#

14、160; 2 結(jié)果    2.1 血清淀粉酶 各移植組水平明顯高于Sham組（S組，P<0.01）；IPC組、L-Arg組水平略低于Control組（C組）和L-NAME組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），見表1。            作者：陳 浩1，李壽柏2，程韻楓3，胡偉明4，田伯樂4，張肇達(dá)【摘】目的探討L-精氨酸 (L-Arginine，L-Arg)對大鼠胰    &#

15、160;    本篇論文是由3COME文檔頻道的網(wǎng)友為您在網(wǎng)絡(luò)上收集整理餅投稿至本站的，論文版權(quán)屬原作者，請不用于商業(yè)用途或者抄襲，僅供參考學(xué)習(xí)之用，否者后果自負(fù)，如果此文侵犯您的合法權(quán)益，請聯(lián)系我們。表1 各組血清淀粉酶水平 （x±s，ku/L）注：與S組比較，*P<0.01    2.2 血NO水平 C組和L-NAME組明顯低于S組（P<0.01）；L-Arg組明顯高于S組（P<0.01）；IPC組和L-Arg組明顯高于C組（P<0.01）；L-Arg組又高于IPC組（P<0.05

16、），見表2。    表2 各組血NO濃度 （x±s，mol/L）注：與S組比較，*P<0.01；與C組比較，#P<0.01；與IPC組比較，P<0.05    2.3 血TNF-水平 各移植組水平均高于S組（P<0.01）；IPC組和L-Arg組明顯低于C組（P<0.01）；L-NAME組高于IPC組（P<0.05），見表3。表3 各組血TNF-水平（x±s，g/L）注：與S組比較，*P<0.01；與C組比較，#P<0.01；與IPC組比較，P&l

17、t;0.05    2.4 bcl-2蛋白表達(dá) bcl-2蛋白表達(dá)在IPC組和L-Arg組明顯，C組和L-NAME組不明顯（P<0.01），見表4。表4 各組bcl-2蛋白表達(dá)情況 例（%）注：與S組比較，*P<0.01；與C組比較，#P<0.01    2.5 胰腺細(xì)胞凋亡指數(shù) 各移植組細(xì)胞凋亡水平明顯高于S組（P<0.01）；IPC組和L-Arg組水平明顯低于C組（P<0.01）；L-NAME組水平高于IPC組（P<0.05），見表5。表5 各組胰腺細(xì)胞凋亡水平 （x

18、7;s，%）注：與S組比較，*P<0.01；與C組比較，#P<0.01；與IPC組比較，P<0.05    2.6 病理學(xué)檢查結(jié)果 S組胰腺小葉腺泡組織分布均勻，間質(zhì)無水腫、充血、無炎性細(xì)胞浸潤；C組和L-NAME組胰腺充血明顯，水腫中度，浸潤的炎性細(xì)胞明顯增多；IPC組和L-Arg處理組充血水腫及炎性細(xì)胞浸潤程度有所改善。        3 討論        胰腺移植術(shù)后由于

19、胰腺的I/R損傷，胰腺炎的發(fā)生率為10%30%，并導(dǎo)致局部和全身并發(fā)癥，嚴(yán)重者引起移植物早期或晚期無功能甚至死亡2。本研究結(jié)果表明，在再灌注早期使用L-Arg，可以明顯減輕供胰I/R損傷，其保護(hù)效果和IPC沒有明顯差異，表現(xiàn)為血清淀粉酶、TNF-水平、細(xì)胞凋亡指數(shù)及病理檢查較對照組改善。但使用NOS抑制劑L-NAME抑制內(nèi)源性NO的合成后，IPC基本上失去了保護(hù)作用。說明L-Arg對胰腺的保護(hù)作用是通過NO生成而實(shí)現(xiàn)的。        通過細(xì)胞凋亡，可以防止因細(xì)胞壞死隨之而來的炎癥反應(yīng)。然而，胰腺細(xì)胞凋亡的增加對再

20、灌注后供腺功能的恢復(fù)顯然是重的障礙。細(xì)胞凋亡受基因調(diào)控，bcl-2基因是抑制凋亡的主基因3。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)bcl-2在IPC組和L-Arg組表達(dá)明顯，相應(yīng)地胰腺細(xì)胞凋亡程度較對照組為輕；而在L-NAME組表達(dá)不明顯，同時(shí)L-NAME組胰腺細(xì)胞凋亡程度與對照組差異也無顯著性。說明IPC和L-Arg通過刺激bcl-2基因的表達(dá)，從而減輕了細(xì)胞凋亡程度。        綜上所述，外源性L-Arg可以改善大鼠胰腺移植時(shí)供胰的I/R損傷，其可能機(jī)制是通過提高NO水平，刺激bcl-2基因表達(dá)，抑制TNF-的合成和胰腺細(xì)胞的凋亡，從而產(chǎn)生IPC樣保護(hù)效應(yīng)，但對其進(jìn)一步