忍冬藤菇的成份測定與藥理研究

1、忍冬藤菇的成份測定與藥理研究張 謙（臨沂市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，山東 臨沂 276012）摘要 目的：主要研究忍冬藤菇的有效成份和藥理作用。方法：通過形態(tài)學(xué)鑒定、藥理成份分析、藥理和毒理實驗等方面進行研究。結(jié)果：從該菌中測得微量元素23種，氨基酸16種和大量多糖，硅元素含童豐富。實驗證實本菌有抗病毒、抗炎作用，對Hela細胞有毒性，對S180瘤細胞有抑制作用，毒性低，LD50>200g/kg，未發(fā)現(xiàn)副作用。結(jié)論：忍冬藤菇具有抗炎、抗病毒、抗腫瘤以及免疫調(diào)節(jié)作用。關(guān)鍵詞 忍冬藤菇；化學(xué)成份；藥理學(xué)忍冬藤菇是生長在忍冬根部的一種子實體，屬環(huán)棱褐孔菌，當?shù)厮追Q“銀花蛾子”。民間常作驗方治療急性上呼吸道感

2、染、扁桃體炎等疾病。迄今未見對該菌進行有效成份和藥理的研究。我們自1994年1月-1996年6月對忍冬藤菇的一般性狀、藥理成份及作用機制、毒理試驗等方面進行初步研究，現(xiàn)將有關(guān)研究報告如下。1 一般性狀研究1.1 命名該菌經(jīng)鑒定，屬多孔菌科，定名為環(huán)棱褐孔菌xanthochrous nilgheriensis（Mont)Teng，屬真菌門，擔子菌亞門，層擔子菌綱，多孔菌目，多孔菌科，褐孔菌屬。1.2 形態(tài)菌體外觀呈半圓形，菌蓋硬而韌，赤醬色或淺栗色，有同心環(huán)狀棱紋及微細絨毛，大小約1.5-4×3-4×3-7cm。邊緣薄，稍鈍，深肉桂色。菌肉深咖啡色，厚2-2.5mm。菌管與菌

3、肉同色，菌管長l-2mm，管口淺肝褐色，圓形，每毫米7-8個。孢子呈廣橢圓形，近球形，淺棕褐色，直徑近3µm。1.3 生態(tài)習(xí)性及分布該菌主要寄生于忍冬根莖部和雪柳及闊葉樹的腐木上，復(fù)瓦狀疊生，國內(nèi)主要分布于山東省沂蒙山區(qū)、遼寧省、廣東省、海南省等地。2 有效成份分析2.1 材料來源 檢測所用環(huán)棱褐孔菌系當?shù)厝潭坎杉膬?yōu)質(zhì)真菌子實體。2.2 檢測方法2.2.1 徽量元素檢測方法 微量元素檢測采用美國PEZ-500型塞曼原子吸收分光光度計、日本島津AA-610，AA-640型原子分光光度計、北京產(chǎn)XDY-l型雙道原子熒光光度計、日本理光3080E型X熒光光譜儀和微型核反應(yīng)堆-中子活化

4、分析儀。以X熒光與中子活化采用固體樣品直接分析和原子吸收分析樣品處理，并利用干法和濕法兩種方法檢測。(1)干法：首先取樣品置于鹽酸處理過的鉑坩鍋中，放入馬福爐內(nèi)，緩慢升溫，在有充分氧氣的情況下至550，保溫兩小時，取出冷卻后加入10ml HF，lml HNO3，加熱蒸至白煙冒盡，補加lml HNO3，加熱水溶可溶性鹽類，定量50ml待測。分別采用火焰法、石墨爐法、冷原子法、氫化物法測定各元素。2.2.2 氨基酸測定方法 氨基酸測試應(yīng)用日本產(chǎn)835-50型氨基酸分析儀，取樣品后以常規(guī)國標G-T/4965-94食物中氨基酸的測定方法進行分析測定。2.2.3 多糖和其它物質(zhì)的測定方法 多糖分析采用P

5、E-7800紅外光譜儀測定，分別測定藥材的乙醚提取物、丁酮提取物、水提取物等。多糖提取采用Sevage法(見附圖)。2.3 測定結(jié)果2.3.1 微量元素測定結(jié)果 見表1。表1 微量元素測定結(jié)果µg/g元素含量元素含量元素含量Si18000Zn74Pb12.82Ca3800Mn173Sn<1Fe7900Li4.55As1.0Mg5700Sr98Se0.13K6800Co1.45Hg0.15Na4400Ni3.71I1.79P1900Cd0.27Br0.87Cu34Cr7.752.3.2 氨基酸含量 見表2。表2 氨基酸含量分析結(jié)果(g/kg)氨基酸含量氨基酸含量門冬氨酸9.74蛋

6、氨酸23.92蘇氨酸5.73異亮氨酸9.23絲氨酸5.55亮氨酸6.23谷氨酸9.99酪氨酸3.93脯氨酸4.48苯丙氨酸4.19甘氨酸4.72賴氨酸4.44丙氨酸5.95組氨酸2.11纈氨酸4.65精氨酸3.762.3.3 預(yù)測紅外光譜結(jié)果解析顯示 水提取物主要含有多糖、糖蛋白、氨基酸等，多糖得率1.13%；乙醚提取物主要含有萜類化合物(Liebermannburehard反應(yīng)陽性)、生物堿(Dragendorff試劑反應(yīng)陽性)；丁酮提取物主要含有甙類、多糖。3 藥理研究與毒性試驗3.1 抑制病毒試驗3.1.1 實驗用病毒株 流感病毒(國家代表株)A3/京防/32/92；B/滬防/3/91；

7、呼吸道合胞病毒、腺病毒標準株。3.1.2 實驗方法 采用固定藥液稀釋病毒法。抑制流感病毒：采用雞胚囊體內(nèi)法，根據(jù)羊水血凝情況判斷抑制效果。抑制合胞病毒、腺病毒：分別接種于敏感細胞，根據(jù)細胞病變情況判定抑制效果。3.1.3 結(jié)果 抗病毒試驗顯示忍冬藤菇水提液對甲、乙兩型流感病毒均有輕抑制效果。藥物毒性試驗顯示72h內(nèi)雞胚可生存，對Hela細胞有毒性。3.2 抗炎作用及急性毒性研究3.2.1 材料 藥品 忍冬藤菇水提液(lg生藥/ml)；儀器 722光柵分光光度計、電子天平、游標卡尺。動物 昆明種小白鼠，兼用，體重18-22g(山醫(yī)大實驗動物中心提供)。3.2.2 方法對小鼠毛細血管通透性的影響。

8、小鼠隨機分為5組，忍冬藤菇水提液20ml、l0ml、5ml/kg、地塞米松0.15mg/kg及等容量生理鹽水組。連續(xù)灌胃給藥3d，末次給藥lh，各鼠iv伊文氏藍溶液0.lml/kg，15min后，在各鼠腹部脫毛區(qū)涂二甲苯0.02ml/只，再15min后，將小鼠脫頸處死，剝開腹部皮膚，測藍染面積的長短徑，求出平均值為直徑，計算藍染面積。并將藍染部位剪下，剪碎后置4ml丙酮生理鹽水混合液(7：3)浸泡20h，測浸泡液的吸光度值(=620nm)，詳細結(jié)果見表3。表3 忍冬藤菇水提液對小鼠毛細血管通透性的影響(±S)藥物劑量(g/kg)動物數(shù)藍柒面積（mm2）吸光度N.S-12213.1&#

9、177;33.80.146±0.055忍冬藤菇20(ml/kg)10175.9±35.5*0.097±0.031*10(ml/kg)12205.4±37.60.108±0.0445(ml/kg)10181.5±44.00.105±0.052地塞米松0.15(mg/kg)11170.0±30.87*0.097±0.047*與N.S組對比，*P<0.05，*P<0.001急性毒性試驗。取體重2g的昆明種小白鼠20只，各半，禁食8h后每鼠灌藥給予忍冬藤菇水提液100ml/kg，24h連續(xù)灌藥2次，觀

10、察7d內(nèi)各鼠的變化。3.2.3 結(jié)果 對小鼠毛細血管通透性影響試驗結(jié)果顯示，與生理鹽水組相比，忍冬藤菇20ml/kg組和地塞米松組縮小二甲苯致小鼠腹部炎癥的藍染面積明顯，P值分別小于0.05和0.01，且吸光度值明顯降低，p值均<0.05。急性毒性試驗結(jié)果顯示小鼠體重增加，未發(fā)現(xiàn)動物死亡及行為活動的改變，表明該藥毒性很低。LD50>200g/kg，相當于人藥用量(1g/kg)的200倍以上。3.3 抑瘤試驗3.3.1 材料和方法 動物：昆明種小鼠50只，體重18-22g(由山東省動物中心提供)。小鼠S180瘤種。忍冬藤菇水提液(1g/ml，相當于生藥量)；呋喃氟脲嘧啶(FT-20)

11、作為陽性對照物。方法 抽取S180瘤種腹水+生理鹽水稀釋成每毫升含瘤細胞2.5×107，無菌條件下注入小鼠右腋皮下0.2ml瘤液，次日將50只小白鼠分為4組。陰性對照組20只，給5%淀粉液，每鼠0.8ml。其余各組為10只。陽性對照組給FT-20混懸于5%淀粉液中，每鼠0.8ml(相當于2.8mg)。試驗組于接種瘤細胞后次日給藥，兩組劑量分別為0.8ml、0.4ml。給藥途徑為灌胃，每日一次，連續(xù)11天。停藥后次日處死小鼠，解剖瘤組織，稱瘤重，計算抑瘤率，用t檢驗評價療效。3.3.2 結(jié)果 抑瘤結(jié)果見表4。結(jié)果顯示忍冬藤菇水提液對S180瘤細胞有一定抑制作用，抑瘤率49.3%，低劑量

12、組為40.7%，與陰性對照組相比有顯著性差異。表4 忍冬藤菇水提液對5180瘤細胞的抑制效果組別劑量(ml/只)動物數(shù)平均體重(g)治療天數(shù)瘤重(±S)抑瘤率(%)P值開始結(jié)束開始結(jié)束陰性對照0.8201820.521.8111.40±0.68陽性對照2.8mg101020.525.0110.87±0.3237.8<0.01治療組0.8101020.522.5110.69±0.7549.3<0.05治療組0.4101020.522.2110.83±0.4840.7<0.054 討論4.1 藥物成份分析顯示，忍冬藤菇含有氨基酸16種，有8種為人體必需氨基酸，有較高營養(yǎng)價值。測得微量元素23種，其中Si含量豐富，達18000µg/g，有較高的藥用開發(fā)和保健品開發(fā)價值。本品含多糖豐富，Sevage法多糖得率為1.13%，可能是其抗病毒和發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用的藥理基礎(chǔ)。4.2 藥理試驗證實，本品有抗病毒、抗炎作用，對甲、乙兩型流感病毒有抑制效果，對Hela細胞有毒性。其水提液具有縮小二甲苯致小鼠腹部皮膚炎癥的藍染面積，降低浸泡液的吸光度值，可降低毛細血管的通透性。4.3 抑瘤試驗結(jié)果顯示，本品水提液對S18