金龍膠囊對行肝動脈栓塞化療的肝癌患者血清白細胞介素2和可溶性白細胞介素2受體水平的影響

1、金龍膠囊對行肝動脈栓塞化療的肝癌患者血清白細胞介素2和可溶性白細胞介素2受體水平的影響         【摘要】  觀察并探討金龍膠囊對行肝動脈栓塞化療（transarterial chemoembolization, TACE）的肝癌患者血清細胞因子白細胞介素2（interleukin2, IL2）及可溶性白細胞介素2受體（soluble interleukin2 receptor, sIL2R）表達的影響。方法：48例肝癌患者隨機分為兩組：金龍膠囊聯(lián)合TACE組（金龍膠囊組）和單純TACE組（對照組）

2、，每組24人。金龍膠囊組患者在第1次行TACE后口服金龍膠囊2個月（4粒/次，3次/d），對照組患者單純行TACE治療，兩組患者在間隔5560 d后行第2次TACE。第1次TACE治療前和第2次TACE治療的第1、7、15天分別檢測血清細胞因子IL2及sIL2R表達水平。結(jié)果：兩組患者IL2及sIL2R在第1次TACE治療前表達水平相當(dāng)（P0.05），IL2水平低于正常成人，sIL2R水平則高于正常成人。第2次TACE治療的第1、7、15天，金龍膠囊組IL2表達水平較同期對照組明顯升高（P0.05），sIL2R表達水平則較對照組明顯降低（P0.05）。結(jié)論：TACE輔助金龍膠囊口服可以改善肝癌

3、患者血清IL2及sIL2R的表達異常，提高患者機體的免疫水平，起到較好的輔助治療作用。 【關(guān)鍵詞】  肝癌 介入放射學(xué) 白細胞介素2 金龍膠囊 隨機對照試驗   Objective: To observe and discuss the dynamic changes of interleukin2 (IL2) and soluble interleukin2 receptor (sIL2R) and their significance in the patients with primary liver cancer after transarterial c

4、hemoembolization (TACE) therapy combined with Jinglong Capsule.   Methods: A total of 48 patients with primary liver cancer, who failed to be treated by major surgery, were randomly divided into two groups: Jinlong Capsule group (TACE therapy plus Jinlong Capsule) and control group (TACE t

5、herapy alone). There were 24 cases in each group. The levels of peripheral blood IL2 and slL2R were measured before the first TACE and 1, 7 and 15 days after the second TACE respectively by using doubleantibody sandwich enzymelinked immunosorbent assay. The data from Jinlong Capsule group were compa

6、red with those from the control group.   Results: The level of sIL2R in Jinlong Capsule group was significantly lower than that in the control group (P0.05), while the level of IL2 was significantly higher than that in the control group (P0.05).   Conclusion: Jinlong Capsule can

7、significantly improve the lymphocyte function of the patients with primary liver cancer after TACE. The levels of IL2 and sIL2R can be considered as the valuable parameters for evaluating the effects on primary liver cancer, and Jinlong Capsule is helpful for the patients with primary liver cancer.&

8、#160;  Keywords: liver cancer; radiography, interventional; interleukin2; Jinlong Capsule; randomized controlled trial   細胞因子及其受體表達水平是判斷機體免疫機能強弱的重要指標(biāo)，在臨床上對一些疾病的診斷以及療效和治療預(yù)后的判斷都有比較重要的參考價值。金龍膠囊是以鮮活藥用動物為原料，運用低溫冷凍及現(xiàn)代生化分離提取工藝制備而成的現(xiàn)代中藥，具有抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)雙重作用。通過檢測部分行肝動脈栓塞化療（transarterial chemoemboliz

9、ation, TACE）聯(lián)合口服金龍膠囊的中晚期肝癌患者外周血細胞因子白細胞介素2（interleukin2, IL2）和血清可溶性白細胞介素2受體（soluble interleukin2 receptor, sIL2R）的動態(tài)變化，評價金龍膠囊對TACE治療后患者機體免疫功能的影響。   1  資料與方法   1.1  病人一般情況  2005年10月2006年10月在上海長海醫(yī)院首次就診的原發(fā)性肝癌患者48例（預(yù)期壽命大于3個月者），采用簡單隨機分組的方法分為金龍膠囊聯(lián)合TACE組（金龍膠囊組）和單純TACE組（對照組

10、），每組24例。金龍膠囊組：男性19例，女性5例；年齡3581歲，平均（50.2±8.3）歲；肝功能Child分級A級6例，B級15例，C級3例；影像學(xué)分型結(jié)節(jié)型5例，腫塊型16例，彌漫型3例。對照組：男性20例，女性4例；年齡3079歲，平均（51.4±8.9）歲；肝功能Child分級A級7例，B級15例，C級2例；影像學(xué)分型結(jié)節(jié)型6例，塊狀型15例，彌漫型3例。   1.2  治療方法  TACE采用Seldlinger穿刺技術(shù)，經(jīng)股動脈插管至腹腔動脈，行腹腔干造影，了解血管解剖和腫瘤供血等情況后，再進行超選擇血管灌注化療及栓塞。

11、所用化療藥物以表阿霉素、卡鉑、羥基喜樹堿、5氟尿嘧啶為主，采用二聯(lián)或三聯(lián)給藥，栓塞材料為碘化油，具體用量根據(jù)腫瘤大小及血管情況而定。金龍膠囊組在第1次TACE治療后開始口服金龍膠囊（由鮮金錢白花蛇、鮮蝰蛇和鮮蛤蚧等組成），金龍膠囊由北京建生藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號為050806，批準文號為（98）衛(wèi)藥準字Z070號。用法：4粒/次，3次/d，持續(xù)2個月；對照組TACE治療后不服用金龍膠囊或其他免疫調(diào)節(jié)藥物。兩組患者在第1次TACE治療后間隔5560 d行第2次介入治療。所有患者在第1次TACE治療前及第2次TACE治療后第1、7、15天（時間分組分別稱為治療前、第1天、第7天和第15天）檢測

12、血清IL2和sIL2R的表達水平。   1.3  細胞因子檢測  患者在規(guī)定時間空腹取靜脈血5 ml，血清IL2和sIL2R水平檢測采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定法（enzymelinked immunosorbent assay, ELISA），將標(biāo)準品倍比稀釋，分別在450 nm處測光密度（optical density, OD）值，繪制標(biāo)準曲線；測定各標(biāo)本OD450值，從中求出每個標(biāo)本中的相關(guān)細胞因子濃度。IL2和sIL2R ELISA試劑盒購自深圳晶美生物工程有限公司，酶標(biāo)儀為荷蘭產(chǎn)Organon Tcknika 230S型。 

13、0; 1.4  統(tǒng)計學(xué)方法  實驗數(shù)據(jù)以x±s表示，組間比較用SPSS 11.0軟件進行計量資料t檢驗，檢驗水準=0.05。   2  結(jié)  果   治療前，兩組患者外周血IL2和sIL2R水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05），其中IL2水平明顯低于正常人標(biāo)準，同期11例正常人IL2水平為（970.16±76.52）ng/L，而sIL2R水平則明顯高于正常人標(biāo)準，同期正常人水平為（251.66±89.34）ng/L。第2次TACE后第1、7、15天金龍膠囊組IL2表達水平均較對照組

14、明顯升高（P0.05），而sIL2R水平則較對照組明顯降低（P0.05）。對照組患者第2次TACE后第7天IL2水平較第1天下降，同期的sIL2R水平則上升；第15天IL2水平較第7天有所上升，同期的sIL2R水平則下降。見表1和表2。表1  兩組患者不同時間血清IL2水平表2  兩組患者不同時間血清sIL2R水平   3  討  論   腫瘤免疫學(xué)證實機體的免疫狀況與惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有密切聯(lián)系，當(dāng)機體免疫機能低下或受抑制時，腫瘤發(fā)生率高。腫瘤發(fā)生后可通過其產(chǎn)生的免疫抑制因子進一步抑制機體的防御機能，致使機體內(nèi)

15、環(huán)境免疫機制呈現(xiàn)紊亂狀態(tài)，表現(xiàn)為某些細胞因子低表達，而另外一些細胞因子高表達1。   目前研究已經(jīng)證實T細胞介導(dǎo)的細胞免疫在機體抗腫瘤免疫中起主導(dǎo)作用。成熟T細胞按表型不同分為CD4 T細胞和CD8 T細胞2個亞群。過去人們主要強調(diào)CD8 T細胞在腫瘤免疫反應(yīng)中的作用，近年來，隨著研究的深入，已逐漸認識到CD4 T細胞在抗腫瘤過程中的重要作用。CD4 T細胞主要為Th（輔助）細胞，根據(jù)其分泌細胞因子的不同，可把CD4T細胞分為Th0、Th1和Th2等3個亞群，Th1和Th2均由Th0細胞發(fā)育而來2。   IL2是免疫系統(tǒng)的重要因子，由CD4 T細胞中的T

16、h1亞群細胞分泌，在特異性免疫調(diào)節(jié)中處于中心統(tǒng)籌地位。IL2具有顯著的免疫增強作用，能夠激活T細胞，促進T細胞生長、分化，促進B細胞增殖、分化和合成抗體，誘導(dǎo)其他細胞因子產(chǎn)生和受體表達，刺激自然殺傷細胞（natural killer, NK）增殖等3。IL2不僅可增強NK及淋巴因子激活殺傷細胞等非特異的免疫反應(yīng)，而且可增強主要組織相容性抗原復(fù)合物限制性的特異細胞毒性T淋巴細胞反應(yīng)4。IL2本身具有抗癌作用，還可能通過誘生其他細胞因子（如腫瘤壞死因子和干擾素等）而產(chǎn)生抗癌效應(yīng)；IL2可活化血管內(nèi)皮細胞，促進T細胞表面黏附分子的表達，從而有助于T細胞遷移到腫瘤局部，更有效地誘導(dǎo)抗腫瘤免疫及介導(dǎo)腫瘤

17、殺傷。IL2能抑制多種肉瘤和腺癌的肝、肺轉(zhuǎn)移等，通過外源性導(dǎo)入IL2或刺激機體提高本身IL2的表達將有助于抑制腫瘤的生長5，6。            細胞因子都是通過與靶細胞表面高親和力的特異性受體結(jié)合后才能發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)。IL2受體有2種：表達在細胞膜表面的膜結(jié)合型白細胞介素2受體（membrane interleukin2 receptor, mIL2R）和游離于血清中的sIL2R。slL2R由IL2誘導(dǎo)產(chǎn)生，它作為一種低親和力受體可與mIL2R競爭結(jié)合IL2，通過中和活化T細胞周圍的I

18、L2和抑制已活化的T細胞克隆擴增，從而抑制機體的免疫反應(yīng)7。因此，一般認為血清sIL2R可間接反映機體細胞免疫功能狀態(tài)。同時，sIL2R還可作為一種轉(zhuǎn)運蛋白與IL2結(jié)合，將其轉(zhuǎn)運到遠離IL2產(chǎn)生的部位，延長IL2的半衰期，促使這些部位有足夠活化和增殖的效應(yīng)細胞。這一作用理論上有助于腫瘤等疾病的恢復(fù)，但sIL2R與mIL2R競爭結(jié)合IL2則明顯降低了IL2的生物學(xué)活性，加重了機體免疫功能紊亂。研究表明，slL2R在正常人血清中處于較低水平，但在惡性腫瘤患者血清中的表達水平則明顯升高，該指標(biāo)對于病情發(fā)展及機體免疫狀態(tài)評價具有重要的參考價值8，9。   肝癌是我國常見的惡性腫瘤，

19、由于早期缺乏典型癥狀，臨床確診的患者大多已屬于中晚期，手術(shù)切除率低。TACE是目前公認的肝癌非手術(shù)治療中療效好、使用廣泛的方法之一。但TACE并不能使腫瘤組織徹底滅活，并且TACE也可引起肝功能損害，導(dǎo)致患者免疫功能受損。因此，與其他腫瘤一樣，如何在治療過程中進一步改善其療效，減少肝功能及免疫功能損害等并發(fā)癥是目前臨床需要重視的問題10。肝癌在中醫(yī)學(xué)中屬“肝積、臌脹、黃疸”的范疇。其病機主要為肝氣郁滯和肝熱血瘀，中醫(yī)治療當(dāng)清熱解毒、活血化瘀、軟堅散結(jié)。利用中藥或中成藥輔助TACE抑制腫瘤生長，提高機體免疫力是臨床值得研究的一個重要領(lǐng)域。   金龍膠囊以鮮金錢白花蛇、鮮蝰蛇和

20、鮮蛤蚧等新鮮動物藥為主要成分，經(jīng)低溫及現(xiàn)代生化提取分離技術(shù)工藝制備，將低溫、快速、高效三者結(jié)合起來，具有破瘀散結(jié)、解郁通絡(luò)之功。現(xiàn)代藥理研究證實該藥保留了動物藥的各種生物活性，特別是多種氨基酸、小分子多肽類物質(zhì)、酶、核苷酸與多種微量元素，其有效成分中98以上的分子量在10 kD以下。這此小分子物質(zhì)易于被人體吸收、代謝，能夠激活淋巴細胞，同時產(chǎn)生多種效應(yīng)因子，能夠抑制腫瘤細胞，進而激發(fā)、增強、調(diào)節(jié)人體免疫功能，顯著增強人體對疾病的防御能力。有學(xué)者研究表明，金龍膠囊可以通過影響外周血T細胞亞群比例進行免疫調(diào)節(jié)11。   本組資料顯示，肝癌患者與其他多種惡性腫瘤患者一樣，血清IL

21、2表達明顯降低，而slL2R則呈現(xiàn)高表達12，13。TACE輔助口服金龍膠囊能有效調(diào)整機體免疫功能，使IL2表達水平增加，slL2R表達水平降低。對照組患者在第2次TACE后第7天IL2水平較第1天下降，同期的sIL2R則上升，說明短期內(nèi)TACE治療對患者機體免疫功能有一定影響；第15天IL2水平較第7天上升，同期的sIL2R則下降。其原因可能有兩方面：其一是隨著時間推移，TACE的副作用逐漸減緩，使患者機體免疫功能逐步恢復(fù)；其二是TACE治療導(dǎo)致腫瘤壞死，由肝腫瘤負荷誘發(fā)的免疫紊亂得到一定的糾正，削弱了免疫紊亂根源，因此細胞因子的表達趨于好轉(zhuǎn)。而結(jié)合口服金龍膠囊則能加快對機體免疫紊亂的糾正，

22、改善患者的免疫狀況，提高治療效果。   金龍膠囊是臨床治療肝癌的常用輔助藥物，對提高原發(fā)性肝癌患者的療效、生存率和生活質(zhì)量有一定幫助。本研究結(jié)果提示對接受TACE治療的肝癌患者而言，同時口服金龍膠囊能對患者免疫機能進行有效調(diào)節(jié)?！緟⒖嘉墨I】  1 ElShanawani FM, AbdelHadi AA, Abu Zikri NB, et al. Clinical significance of aflatoxin, mutant P53 gene and sIL2 receptor in liver cirrhosis and hepatocellular ca

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