培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗證

1、.硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗證方案文件編碼：項目姓名簽名日期起草審核審核批準生效日期年份.硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗證方案目錄1、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗證計劃2、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗證小組名單3、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗證方案4、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗證培訓記錄5、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗證附屬記錄6、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗證報告7、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗證合格證書.硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗證計劃根據我公司認證領導小組的要求及驗證委員會的安排， 對硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基

2、配制和滅菌方法進行驗證，具體安排如下：一、年月日 年月日 ，制定驗證方案，由硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗證小組組長負責起草。二、年月日 年月日 ，驗證方案討論、修改、審批和培訓。三、年月日 年月日 ，驗證工作實施。四、年月日 年月日 ，根據驗證情況與記錄，書寫驗證報告。五、年月日 年月日 ，驗證報告審核批準，合格證發(fā)放。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗證小組名單.組長：成員：.一、 目的通過驗證驗證所采用的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法，適合于我公司硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的制備，為質量控制試驗提供優(yōu)質培養(yǎng)基。并培養(yǎng)基配制和滅菌的操作方法，為培養(yǎng)基配制和滅菌人員提供正確的操作方法，

3、使培養(yǎng)基配制和滅菌標準化、程序化。二、 適用范圍本方案適用于本公司硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的配制和滅菌方法的驗證。三、 內容1. 概述培養(yǎng)基是微生物試驗的基礎，直接影響微生物試驗結果。適宜的培養(yǎng)基制備方法、貯藏條件和質量控制試驗是提供優(yōu)質培養(yǎng)基的保證。使用商品化脫水合成培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基時，應嚴格按照培養(yǎng)基廠商提供的使用說明配制，如質量 /體積、 PH、制備條件、滅菌條件和操作步驟等。培養(yǎng)基若采用不適當的加熱和滅菌條件，有可能引起顏色變化、透明度降低、 PH 的改變。因此，培養(yǎng)基應采用驗證的滅菌程序滅菌，培養(yǎng)基滅菌方法和條件，應通過適用性檢查試驗進行驗證。此外，對高壓滅菌器的蒸汽循環(huán)系統(tǒng)也要加以驗證

4、，以保證在一定的裝載方式下的正常熱分布。溫度緩慢上升的高壓滅菌器可能導致培養(yǎng)基的過熱，過度滅菌可能會破壞絕大多數的細菌和真菌培養(yǎng)基促生長的質量。滅菌器中的培養(yǎng)基的容積和裝載方式也將影響加熱的速度。因此，應根據滅菌培養(yǎng)基的特性，進行全面的滅菌程序驗證。根據培養(yǎng)基的特性，按制定的方法進行配制和滅菌，根據驗證結果判斷是否符合驗證標準。若符合，按驗證的方法和條件進行培養(yǎng)基的配制和滅菌，若不符合，重新制定方案，再進行驗證，直至驗證結果符合設立的驗證標準。2. 驗證項目及認可標準驗證內容驗證項目驗證標準配制滅菌前的 pH7.2-7.4滅菌溫度121滅菌時間15 分鐘滅菌滅菌效果（ F0 值）12滅菌后 p

5、H 值6.9-7.3滅菌后外觀性狀符合規(guī)定適用性檢查靈敏度檢查符合規(guī)定無菌性檢查符合規(guī)定.有效期驗證保存三周連續(xù)驗證3. 驗證依據外觀性狀靈敏度檢查無菌性檢查3 次配制的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基。符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定3.1.SN/T1538.1-2005 培養(yǎng)基制定指南3.2.藥品生產驗證指南（2003 版）（國家食品藥品監(jiān)督管理局）3.3.藥品生產質量管理指南（2010 版）3.4.中華人民共和國藥典（2010 年版二部）3.5. 中國藥品檢驗標準操作規(guī)程（2010 年版）4. 驗證方法與內容4.1.實驗準備器具：電磁爐（最大功率 2000W）、大燒杯（ 2000ml）、不銹鋼鍋、玻璃棒、2

6、5×250ml試管、硅膠塞、細繩、牛皮紙、分析天平、藥匙、量筒（ 100ml、1000ml）等。設備名稱生化培養(yǎng)箱電熱恒溫培養(yǎng)箱自動臺式滅菌器電子天平數字酸度計生物安全柜超凈工作臺生產廠家型號校驗情況培養(yǎng)基及試劑名稱純化水硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基氫氧化鈉稀鹽酸生產廠家批號.嗜熱脂肪芽胞菌（ F0 12）驗證用菌株來源于貴州省藥品檢驗所驗證菌株菌株代數培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時間（小時）大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉菌4.2.驗證內容執(zhí)行標準a. 配制容器及配套器具的清洗嚴格按照玻璃器皿清洗操作規(guī)程執(zhí)行。b. 培養(yǎng)基的配制嚴格按照培養(yǎng)基管理規(guī)程執(zhí)

7、行。c. 自動臺式滅菌器嚴格按照 TMQ.R-3870 型臺式滅菌器使用維護保養(yǎng)操作規(guī)程執(zhí)行 .d. 取同一批硫乙醇酸鹽流體干粉培養(yǎng)基配制三批進行以下驗證。配制滅菌過程a. 稱量取硫乙醇酸鹽流體干粉培養(yǎng)基29.25 克,加純化水 1000ml,加熱煮沸使其完全溶解。每次按照此處方量配制8547ml。b. 滅菌前的pH 值測定取已配制好的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基100ml，放冷至25調節(jié)PH 值至7.2-7.4 范圍內。以此比例來調節(jié)剩下的培養(yǎng)基的pH值。c. 分裝將已調節(jié)好PH值的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基分裝至25×250ml試管中，分裝的管數為 190 200 管范圍，用牛皮紙按 40 管

8、/捆的方式包扎結實。其中一管只裝約20ml，以備滅菌后最終 pH 值測定。d. 滅菌器中的培養(yǎng)基的數量及裝載方式（滿載）將分裝好的 5 捆（ 40 管 /捆）培養(yǎng)基試管置于滅菌器中，按下圖A 、B、C、D、E 5 點放置。ABC滅菌器柜門.DE指示菌的放置：將指示劑嗜熱脂肪芽孢菌（菌濃度：1.69 ×106cfu/支） 5 支各放入5 捆培養(yǎng)基中間的其中一支試管， 同時將已編號的5 支校正好的留點溫度計插入6 支待滅菌培養(yǎng)基試管內，開始滅菌。將已裝載好的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基在 121條件下滅菌 15 分鐘。滅菌結束后記錄各留點溫度計點溫度。 同時取出 5 支已滅菌嗜熱脂肪芽孢菌， 直

9、接置 56 60培養(yǎng) 2448 小時，另取一支未經滅菌的嗜熱脂肪芽孢菌指示劑一起培養(yǎng)，作為陽性對照。根據顏色判斷滅菌效果，培養(yǎng)后全部保持紫色滅菌合格。若由紫色變?yōu)辄S色為不合格。對照管應由紫色變?yōu)辄S色為該指示劑有效。e. 滅菌后的 pH 值的測定 取 20ml 管已滅菌的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基， 放冷至 25 測定 pH 值，應在 6.9-7.3 范圍內。f. 外觀性狀滅菌后培養(yǎng)基應對其外觀性狀仔細檢查，如發(fā)現(xiàn)破裂、水分浸入、色澤異常、棉塞被培養(yǎng)基沾染等、均應挑出棄去。貯存中培養(yǎng)基發(fā)生顏色變化、 渾濁；固體培養(yǎng)基表面產生裂縫或漣漪等異?，F(xiàn)象，不符合使用規(guī)定時，應停止使用，重新進行配制和滅菌程序驗證

10、。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的適用性檢查無菌檢查用的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基等應符合培養(yǎng)基的無菌性檢查及靈敏度檢查的要求。本檢查可在供試品的無菌檢查前或與供試品的無菌檢查同時進行。a. 無菌性檢查每批培養(yǎng)基隨機取5 支（瓶），培養(yǎng)14 天，應無菌生長。b. 靈敏度檢查菌液制備接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，接種生孢梭菌的的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中， 30 35培養(yǎng) 18 24 小時；上述培養(yǎng)物用 0.9%無菌氯化鈉溶液制成每 1ml 含菌數小于 100cfu（菌落形成單位） 的菌懸液。菌液制備后若在室溫下放置，應在2 小時內使用，

11、若保存在28，可在 24 小時內使用。.培養(yǎng)基接種取每管裝量為12ml的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基9 支，分別接種小于100cfu 的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌各2 支，另1 支不接種作為空白對照，培養(yǎng)三天，逐日觀察結果。結果判斷空白對照管應無菌生長，若加菌的培養(yǎng)基管均生長良好，判該培養(yǎng)基的靈敏度檢查符合規(guī)定。5. 組織實施5.1.驗證機構的組成5.2.公司驗證委員會，負責所有驗證工作的領導和組織、審批驗證方案和驗證報告、發(fā)放驗證證書。5.3. 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗證工作小組，負責該驗證項目的驗證方案起草、實施、組織與協(xié)調實施，負責驗證樣品檢測，完成各項記錄

12、，根據檢驗和驗證結果進行評定、完成驗證報告。部門部門職責責任人工作劃分質量部方案起草、實施、書寫報告操作實施質量部取樣、檢驗、出報告操作實施驗證方案審定、批準、實施、發(fā)放方案審核委員會驗證合格證方案批準四、 附件及相關表格文件.硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗證報告文件編碼：項目姓名簽名日期起草審核審核批準生效日期年份.一、 驗證概述培養(yǎng)基是微生物試驗的基礎， 直接影響微生物試驗結果。 適宜的培養(yǎng)基制備方法、貯藏條件和質量控制試驗是提供優(yōu)質培養(yǎng)基的保證。中華人民共和國藥典 2010 年版二部規(guī)定：在實驗室中，若采用已驗證的配置和滅菌程序制備培養(yǎng)基且過程受控， 那么同一批脫水培養(yǎng)基的適用性檢

13、查試驗可只進行一次。本公司采用的培養(yǎng)基均是北京三藥科技開發(fā)公司生產的市售脫水培養(yǎng)基。為規(guī)范生測實驗人員在配制培養(yǎng)基時標準化、程序化并符合中華人民共和國藥典 2010 年版二部規(guī)定，特對培養(yǎng)基的配制程序進行驗證。1. 驗證組織與實施1.1. 驗證小組成員及職責分工部門部門職責責任人工作劃分質量部方案起草、實施、書寫報告操作實施質量部取樣、檢驗、出報告操作實施驗證方案審定、批準、實施、發(fā)放方案審核委員會驗證合格證方案批準1.2.本驗證由質量部負責并由相關人員根據硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗證方案所規(guī)定的方法與步驟實施。2. 實施時間為： 年月日 年月日。二、 各項目驗證結論1. 滅菌前后

14、pH 值日期：配制批號滅菌前 pH 值年月滅菌后 pH 值日結果判定2. 外觀性狀日期年 月日年 月日配制批號滅菌后保存三周后結果判定.3.留點溫度計溫度記錄日期：年月日配制批號滅菌后溫度結果判定ABCDEABCDEABCDE4.指示劑培養(yǎng)結果日期：年月日配制批號滅菌后指示劑顏色結果判定ABCDEABCDEABCDE陽性對照5. 滅菌后培養(yǎng)基無菌性檢查5.1.配制批號：日期：年月日天數第第第第第第第第第第第第第第結果1234567891011121314編號判定天天天天天天天天天天天天天天5.2.配制批號：日期：年月日天數第第第第第第第第第第第第第第結果1234567891011121314編

15、號判定天天天天天天天天天天天天天天5.3.配制批號：日期：年月日天數第第第第第第第第第第第第第第結果1234567891011121314編號判定天天天天天天天天天天天天天天.6. 滅菌后培養(yǎng)基靈敏度檢查6.1.菌液計數結果日期：指示菌名稱金黃色葡萄球菌 CMCC(B) 26 003 銅綠假單胞菌 CMCC(B) 10 104 生孢梭菌 CMCC(B) 64 941枯草芽孢桿菌 CMCC(B) 63 501 6.2. 培養(yǎng)基靈敏度檢查結果配制批號檢查項目陰性對照管金黃色葡萄球菌管銅綠假單胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢桿菌管6.3. 培養(yǎng)基靈敏度檢查結果配制批號檢查項目陰性對照管金黃色葡萄球菌管銅綠假

16、單胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢桿菌管6.4. 培養(yǎng)基靈敏度檢查結果配制批號檢查項目陰性對照管金黃色葡萄球菌管年月日菌液濃度（ cfu/ml ）標準濃度平板 1平均菌落平板 2數 100日期：年月日第一天第二天第三天結果判定日期：年月日第一天第二天第三天結果判定日期：年月日第一天第二天第三天結果判定.銅綠假單胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢桿菌管7. 保存三周后培養(yǎng)基無菌性檢查7.1.培養(yǎng)基無菌性檢查結果配制批號：天數第第第第第第第第第第12345678910編號天天天天天天天天天天7.2.培養(yǎng)基無菌性檢查結果配制批號：天數第第第第第第第第第第12345678910編號天天天天天天天天天天7.3.培養(yǎng)基無菌

17、性檢查結果配制批號：天數第第第第第第第第第第12345678910編號天天天天天天天天天天日期：年月日第第第第結果11121314判定天天天天日期：年月日第第第第結果11121314判定天天天天日期：年月日第第第第結果11121314判定天天天天8. 保存三周后培養(yǎng)基靈敏度檢查8.1. 菌液計數結果日期：年月日指示菌名稱菌液濃度（ cfu/ml ）標準濃度平板 1平板 2平均菌落數.金黃色葡萄球菌 CMCC(B) 26 003銅綠假單胞菌 CMCC(B) 10 104 100生孢梭菌 CMCC(B) 64 941枯草芽孢桿菌 CMCC(B) 63 5018.2.保存三周后培養(yǎng)基靈敏度檢查結果配制批號檢查項目第一天陰性對照管金黃色葡萄球菌管銅綠假單胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢桿菌管8.3.保存三周后培養(yǎng)基靈敏度檢查結果配制批號檢查項目第一天陰性對照管金黃色葡萄球菌管銅綠假單胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢桿菌管8.4.保存三周后培養(yǎng)基靈敏度檢查結果配制批號檢查項目 第一天陰性對照管金黃色葡萄球菌管銅綠假單胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢桿菌管日期：年月日第二天第三天結果判定日期：年月日第二天第三天結果判定日期：年月日第二天第三天結果判定三、 建議、結果分析和驗證總結1. 建議1.1.加強生測室檢驗人員的操作技能培訓，使培養(yǎng)基配制和滅菌過程標準化，程序化。1.