中藥、天然藥物長期毒性研究技術指導原則

1、指導原則編號:中藥、天然藥物長期毒性研究技術指導原則 二 OO 五年三月目 錄一、概述 ··········································

2、3;·················································

3、3;·················································

4、3;····1二、基本原則 ············································&#

5、183;·················································&#

6、183;·········································2(一實驗管理 ·······

7、··················································

8、··················································

9、·····················2(二具體問題具體分析 ···························

10、··················································

11、······························2(三整體性 ···················

12、;··················································

13、;··················································

14、;···············2(四試驗設計 ·································

15、83;·················································

16、83;·············································2 三、基本內容 ···

17、··················································

18、··················································

19、··································3(一受試物 ···············

20、;··················································

21、;··················································

22、;···················3(二試驗動物 ·····························

23、83;·················································

24、83;·················································3(三

25、給藥途徑 ·················································&

26、#183;·················································&

27、#183;····························3(四給藥頻率 ····················

28、;··················································

29、;··················································

30、;········4(五給藥期限 ········································

31、83;·················································

32、83;·····································4(六給藥劑量 ···········&

33、#183;·················································&

34、#183;·················································&

35、#183;················5(七觀察指標 ································

36、;··················································

37、;··············································6(八觀察指標的時間和次數 ·

38、83;·················································

39、83;············································8(九結果及分析 ····

40、··················································

41、··················································

42、···················8(十綜合評價 ·····························

43、3;·················································

44、3;················································9 (十一其他考慮

45、··················································

46、··················································

47、·····················10四、不同情況的中藥、天然藥物長期毒性試驗的要求 ························

48、3;··················10五、參考文獻 ······························&

49、#183;·················································&

50、#183;·················································&

51、#183;···12六、附錄 ·············································

52、··················································

53、·················································13(一長期

54、毒性試驗的給藥期限 ················································&#

55、183;········································13(二長期毒性試驗中一般需檢測的指標 ······

56、··················································

57、············13(三毒性藥材 ····································

58、83;·················································

59、83;·······································16 七、著者 ·········&

60、#183;·················································&

61、#183;·················································&

62、#183;·································16中藥、天然藥物長期毒性研究技術指導原則一、概述長期毒性試驗是重復給藥的毒性試驗的總稱,描述動物重復接受受試 物后的毒性特征,它是非臨床安全性評價的重要內容。中華人民共和國衛(wèi)生部于 1994年

63、頒發(fā)的中藥新藥研究指南和國家 藥品監(jiān)督管理局 1999年頒發(fā)的中藥新藥藥理毒理研究的技術要求 ,對 于統一、規(guī)范中藥長期毒性試驗,推動我國中藥的研究和開發(fā)起到了積極 的作用。但隨著新藥研究手段的不斷改進,對中藥、天然藥物認識的進一 步深入,這些要求越來越表現出它的局限性。長期毒性試驗的主要目的應包括以下五個方面:預測受試物可能引 起的臨床不良反應,包括不良反應的性質、程度、劑量-反應和時間-反應關 系、可逆性等;推測受試物重復給藥的臨床毒性靶器官或靶組織;預 測臨床試驗的起始劑量和重復用藥的安全劑量范圍;提示臨床試驗中需 重點監(jiān)測的指標;為臨床試驗中的解毒或解救措施提供參考信息。 中藥在我國已

64、有幾千年的應用歷史,有豐富的臨床應用經驗,相對化 學藥而言多數中藥具有毒性較低的特點。但是,中藥的低毒和無毒是相對 的。當前,各種新技術、新工藝不斷應用于中藥新藥的開發(fā),而且從中藥、 天然藥物中提取的有效成分、有效部位及其制劑日益增多,已不完全等同 于傳統意義上的中藥,因此對其非臨床安全性評價應給予足夠的重視。長 期毒性試驗周期長,耗資高,工作量大,若因試驗設計不合理,或所進行 的試驗未充分揭示中藥的毒性特征,則會造成人力、物力、財力的浪費,也會影響新藥的研究速度。充分認識長期毒性試驗的重要性,合理、科學 地進行長期毒性試驗設計,對試驗結果進行科學的分析,是新藥非臨床安 全性評價的基本要求。本

65、指導原則是根據中藥、天然藥物的特點,結合國際上藥物安全性評 價的要求和我國藥物安全性評價研究現狀而制訂的。本指導原則適用于中藥、天然藥物的長期毒性試驗研究。二、基本原則(一實驗管理根據中華人民共和國藥品管理法 ,長期毒性試驗必須執(zhí)行“藥物非 臨床研究質量管理規(guī)范” 。(二具體問題具體分析中藥、天然藥物的情況復雜,本文所提及的內容不可能涵蓋中藥、天 然藥物長期毒性試驗的全部實際情況,在進行中藥、天然藥物長期毒性研 究時,應遵循“具體問題具體分析”的原則。(三整體性藥物的開發(fā)是一個連續(xù)的、漸進的系統工程,長期毒性試驗是藥物開 發(fā)的一個有機組成部分。長期毒性試驗不能與藥效學、藥代動力學和其他 毒理學

66、研究割裂,試驗設計應充分考慮其他藥理毒理研究的試驗設計和研 究結果。長期毒性試驗的結果應該力求與其他藥理毒理研究結果互為印證、 說明和補充。(四 試驗設計試驗設計應符合隨機、對照、重復的原則。三、基本內容(一受試物長期毒性試驗的受試物應能充分代表臨床試驗受試物和上市藥品,因 此受試物應采用制備工藝穩(wěn)定、符合臨床試用質量標準規(guī)定的樣品,一般 用中試樣品,并注明受試物的名稱、來源、批號、含量(或規(guī)格 、保存條 件及配制方法等。如不采用中試樣品,應有充分的理由。如果由于給藥容 量或給藥方法限制,可采用原料藥進行試驗。試驗中所用溶媒和/或輔料應 標明批號、規(guī)格及生產廠家。(二試驗動物長期毒性試驗一般需

67、采用兩種動物進行,一種為嚙齒類,常用大鼠; 另一種為非嚙齒類,常用 Beagle 犬或猴。所用動物應符合國家有關藥物非 臨床安全性研究的要求。長期毒性試驗一般選擇健康、體重均一的動物,雌性應未孕。必要時, 也可選用疾病模型動物進行試驗。原則上,動物應雌雄各半。當臨床擬用于單性別時,可采用相應性別 的動物。應根據研究期限的長短和受試物的使用人群范圍確定動物的年齡。一 般情況下,大鼠為 69周齡;Beagle 犬為 612月齡。每組動物的數量應能夠滿足試驗結果的分析和評價的需要。一般大鼠 可為雌、雄各 1030只,犬或者猴可為雌、雄各 36只。(三給藥途徑原則上應與臨床擬用藥途徑相同。如選擇其他的

68、給藥途徑,應說明理由。(四給藥頻率原則上應每天給藥, 且每天給藥時間相同。 試驗周期長 (3個月或以上 者,也可采取每周給藥 6天。特殊類型的受試物由于其毒性特點和臨床給 藥方案等原因,應根據具體藥物的特點設計給藥頻率。(五給藥期限長期毒性試驗給藥期限的長短,通常與擬定的臨床療程長短、臨床適 應癥、用藥人群相關,應充分考慮預期臨床的實際療程。臨床單次用藥的藥物,給藥期限為 2周的長期毒性試驗通?？芍С制?進行臨床試驗和生產。給藥期限為 1個月的長期毒性試驗通?？芍С峙R床療程不超過 2周的 藥物進行臨床試驗。臨床療程超過 2周的藥物,可以在臨床前一次性進行支持藥物進入 III 期臨床試驗的長期毒

69、性試驗。如長期毒性試驗擬定給藥期限在三個月以上, 可先對三個月中期試驗報告(應有一般狀況觀察、血液學指標、血液生化 學指標、體溫、眼科、尿液、心電圖、系統尸解、臟器系數、組織病理學 等檢查 進行評價, 判斷是否可進行臨床研究。 但在進行 III 期臨床試驗前, 必須完成全程長期毒性試驗研究資料。臨床療程超過 2周的藥物,也可以根據具體情況,以不同給藥期限的 長期毒性試驗來分別支持藥物進入 I 期、II 期或 III 期臨床試驗。通過給藥 期限較短的毒性研究獲得的信息,可以為給藥期限較長的毒性研究設計提 供給藥劑量、給藥頻率、檢測指標等方面的參考;另一方面,臨床試驗中 獲得的信息有助于給藥期限較

70、長的動物毒性研究方案的設計,有利于降低藥物開發(fā)的風險。一般藥物的長期毒性試驗給藥期限,可參考附錄(一 。以不同給藥期限的長期毒性試驗來分別支持藥物進入 I 期、II 期或 III 期臨床試驗時,不同給藥期限的長期毒性試驗的內容不應簡化。無論采用 何種模式,長期毒性試驗的內容應完整、規(guī)范,對結果的分析評價應科學、 合理。當受試物預期會長期使用,或用于反復發(fā)作性疾病等而需經常反復給 藥時,應進行最長試驗期限的長期毒性試驗。當功能主治有若干項的,應 按照臨床最長療程的功能主治來確定長期毒性試驗的給藥期限。如臨床給 藥需采用多個療程,療程之間間隔時間不足以使受試物可能對機體組織器 官造成的損害恢復,則

71、需按多個療程的時間之和作為參照的臨床療程;如 療程間隔時間基本可判斷足以使受試物可能對機體組織器官造成的損害恢 復,則可按單個療程的時間作為參照的臨床療程。(六給藥劑量一般情況下,至少應設 3個劑量組和溶媒或賦形劑對照組,必要時還 需設立空白對照組和/或陽性對照組。低劑量組原則上應高于動物藥效學試 驗的等效劑量或預期的臨床治療劑量的等效劑量。高劑量組原則上應使動 物產生明顯的毒性反應,甚至可引起少量動物死亡(對于毒性較小的中藥, 可盡量采用最大給藥量 。在高、低劑量之間至少應再設一個中劑量組。 以上僅是劑量設計的一般原則,應根據實際情況進行合理的劑量設計, 如出現未預期的毒性反應或不出現毒性反

72、應時,可在設計更長時間的長期 毒性試驗時適當調整劑量。若受試物在飲食或飲水中給予時,應能充分保證受試物的均一性、穩(wěn) 定性和定量攝入,提供相關的檢測報告,并應根據動物生長和體重的變化 情況而調整在飲食或水中的劑量。局部給藥時,應盡可能保證給藥劑量的 準確性及與局部充分接觸的時間。(七觀察指標原則上,除常規(guī)觀察指標外,還應根據受試物的特點、在其他試驗中 已觀察到的某些改變,或其他的相關信息(如處方中組成成分有關毒性的 文獻 ,增加相應的觀測指標。以下僅列出常規(guī)需觀察的指標。1、一般狀況觀察在試驗期間,應觀察動物外觀體征、行為活動、腺體分泌、呼吸、糞 便、攝食量、體重、給藥局部反應。2、血液學指標一

73、般血液學檢測指標參見附錄(二1,至少應觀察紅細胞計數、血紅 蛋白、白細胞計數及其分類、血小板、網織紅細胞計數、凝血酶原時間等。 當受試物可能對造血系統有影響時,應進一步進行骨髓的檢查。3、血液生化學指標一般血液生化學檢測指標參見附錄(二2。4、體溫、眼科檢查、尿液檢查、心電圖檢查非嚙齒類動物還應進行體溫、眼科檢查、尿液檢查、心電圖檢查等。 尿液檢查指標參見附錄(二3。5、系統尸解和組織病理學檢查5. 1系統尸解應對所有動物進行尸解,尸解應全面細致,為組織病理學檢查提供參 考。具體臟器、組織參見附錄(二4。5.2臟器系數應對臟器進行稱重,并計算臟器系數。具體臟器、組織參見附錄(二4。 5.3組織

74、病理學檢查當所用動物為非嚙齒類動物時,因動物數較少,應對所有劑量組、所 有動物的器官和組織進行組織病理學檢查。當所用動物為嚙齒類動物時, 應對高劑量組和對照組的器官和組織進行組織病理學檢查,如果高劑量組 出現組織病理學變化時,更低劑量組也應進行組織病理學檢查以確定劑量-反應關系。若在尸檢時發(fā)現器官和組織有肉眼可見的病理變化時,應對此 臟器或組織進行詳細的組織病理學檢查。應注意對臟器和組織的標本取材 保存。高劑量組發(fā)現有異常病變時,應對保存的更低劑量組的相應臟器、 組織標本進行檢查。必要時還應增加其他器官組織的檢查。如發(fā)現有異常 變化,應附有相應的組織病理學照片。組織病理學檢查報告應經檢查者簽

75、名和病理檢查單位蓋章。有效成分或有效部位制成的制劑所需檢查的臟器和組織參考附錄(二4。 中藥、天然藥物復方制劑,成分復雜,靶點多,效應廣泛,理論上應 盡可能多地進行組織病理學的檢查,以尋找可能的毒性作用靶器官、靶組 織。但是,由于中藥復方制劑有中醫(yī)藥理論的指導,對其毒性反應有一定 的臨床認識,天然藥物復方制劑的組分也可能有一定的臨床認識,如有合 理的理由說明所申報的中藥、天然藥物復方制劑有一定的安全性,所檢查 的臟器和組織可減少為:心、肝、脾、肺、腎、腦、胃、小腸、大腸、垂體、脊髓、骨髓、淋巴結、膀胱、睪丸、附睪、子宮、卵巢、胸腺、腎上 腺及給藥局部組織等。此外,根據所含中藥的性、味、功效、主

76、治等不同 情況,可能需增加相應的組織病理學檢查;根據受試物特性和初步試驗結 果,也可能需要進行更進一步的組織病理學檢查。(八觀察指標的時間和次數應根據試驗期限的長短和受試物的特點而確定試驗期間觀察指標的時 間和次數,原則上應盡早、及時發(fā)現出現的毒性反應。試驗前,嚙齒類動物至少應進行適應性觀察 5天,非嚙齒類至少應馴 養(yǎng)觀察 12周,應對試驗動物進行外觀體征、行為活動、攝食量和體重檢 查,非嚙齒類動物還至少應進行 2次體溫、心電圖、有關血液學和血液生 化學指標的檢測。此外,試驗動物相關指標的歷史數據在長期毒性試驗中 也具有重要的參考意義。試驗期間,一般狀況和征狀的觀察,應每天觀察一次,飼料消耗和

77、體 重應每周記錄一次。大鼠體重應雌雄分開進行計算。試驗結束時應進行一 次全面的檢測。當給藥期限較長時,應根據受試物的特點選擇合適的時間 進行中期階段性的檢測。長期毒性試驗應在給藥結束時留存部分動物進行恢復期觀察,以了解 毒性反應的可逆程度和可能出現的延遲性毒性反應。應根據受試物的代謝 動力學特點、靶器官或靶組織的毒性反應和恢復情況確定恢復期的長短。 恢復期觀察期間除不給受試物外,其他觀察內容與給藥期間相同。 在試驗期間,對瀕死或死亡動物應及時檢查并分析原因。(九結果及分析試驗報告應全面客觀反映整個試驗過程收集的原始資料和信息,應詳 細描述毒性的主要表現、大體解剖檢查和/或病理組織學檢查結果等,

78、并說 明數據處理的統計學方法,如用計算機處理數據,應說明所用軟件。結果 應以清楚、準確的方式來表示。長期毒性試驗的最終目的在于預測人體可能出現的毒性反應。只有通 過對研究結果的科學分析和評價才能夠清楚描述動物的毒性反應,并推測 其與人體的相關性,因此長期毒性試驗結果的分析和評價是長期毒性試驗 的必要組成部分。分析長期毒性試驗結果的目的是判斷動物是否發(fā)生毒性 反應,描述毒性反應的性質和程度(包括毒性起始時間、程度、持續(xù)時間 以及可逆性等和靶器官,確定安全范圍,并探討可能的毒性作用機制。 應重視對動物中毒或死亡原因的分析,注意觀察毒性反應出現的時間 和恢復的時間及動物的死亡時間。應對所獲取的數據進

79、行全面和科學的分 析,對在正常范圍以外的各實測值應在試驗結果中詳細列出,對異常數據 予以合理的分析。在分析長期毒性試驗結果時,應正確理解均值數據和單 個數據的意義,綜合考慮數據的統計學意義和生物學意義。正確利用統計 學假設檢驗的結果有助于確定試驗結果的生物學意義,但具有統計學意義 并不一定代表具有生物學意義。在判斷生物學意義時應考慮與該實驗室的 歷史數據相比較。根據長期毒性試驗結果,分析討論需在臨床、質量可控性研究中注意 的問題。長期毒性試驗結果還應結合其他相關安全性試驗及藥/毒代動力學 的結果進行分析。(十綜合評價1.應結合其他安全性試驗的毒性反應情況,判斷毒性反應是否存在種 屬差異,是否需

80、進行進一步的研究。2.應結合非臨床藥效學試驗結果和擬臨床適應癥,判斷有效性與毒性 反應的關系,判斷藥物對正常動物和模型動物的生理生化指標的改變是否 相同或相似,并注意提示臨床研究應注意的問題。對受試物引起的嚴重毒性反應,應盡可能查找產生毒性的原因,根據 相關文獻資料或試驗資料,推測可能的毒性成分,提出是否需對處方工藝 及處方中的某些藥材或某些成分進行特別控制等。3.結合臨床主治(適應癥 ,權衡利弊,考慮其開發(fā)前景。(十一其他考慮某些其他安全性試驗項目,如一般藥理學研究中的心血管系統等指標 的觀察、注射給藥局部刺激性的觀察、免疫毒理研究、有依賴傾向受試物 的依賴性觀察、毒代動力學研究等均可結合長期毒性試驗同時進行。在所 進行的試驗中,盡量獲取更多的和所需要的信息。鼓勵創(chuàng)新藥進行毒代動 力