常規(guī)病理切片的制備(講稿)

1、常規(guī)病理切片的制備（講稿）親愛(ài)的各位領(lǐng)導(dǎo)，各位老師，大家好。能站在這個(gè)講臺(tái)上，對(duì)我來(lái)說(shuō)本身就已經(jīng)是一份莫大的榮譽(yù)，但我知道，這個(gè)講臺(tái)肯定不是屬于我的。我在這里也只能是班門(mén)弄斧了。還真誠(chéng)的希望各位不要見(jiàn)笑。如果有什么不對(duì)的地方，希望各位領(lǐng)導(dǎo)和老師能夠提醒我，幫助我。因?yàn)槲沂欠值搅瞬±砜疲F(xiàn)在階段的主要工作是病理技術(shù)。那么我今天就簡(jiǎn)要的介紹一下在我們科室常規(guī)病理切片的制備過(guò)程。這里我們以常規(guī)手術(shù)標(biāo)本為例：一收取標(biāo)本。在手術(shù)室收取標(biāo)本，并仔細(xì)核對(duì)標(biāo)本的各項(xiàng)信息。如有誤，應(yīng)立即聯(lián)系相應(yīng)科室及醫(yī)師。如仍然有誤，則可拒收該標(biāo)本。二固定。第二步和第一步并沒(méi)有明顯的時(shí)間上的先后順序。其實(shí)，準(zhǔn)確的說(shuō)固定必須在收

2、取標(biāo)本之前就已經(jīng)進(jìn)行。因?yàn)榛铙w的器官或組織在離體的那個(gè)時(shí)候就應(yīng)該固定。因?yàn)槠鞴倩蚪M織離體后，在自然狀態(tài)下會(huì)立刻開(kāi)始腐敗和自溶。而組織或器官經(jīng)固定液固定之后能防止細(xì)菌的腐蝕和組織的自溶。細(xì)菌無(wú)處不存在，它們隨時(shí)都可污染腐蝕未經(jīng)處理的組織。固定液可以固定任何蛋白質(zhì)，凡有生命的東西，都由蛋白質(zhì)組成，蛋白質(zhì)被固定，生命就停止，細(xì)菌也就失去了活力。另者，在日常生活中，人們?？膳龅竭@樣的問(wèn)題，一塊肉不經(jīng)處理放了幾天后就會(huì)變質(zhì)，這是為什么呢？除了細(xì)菌參與外，其本身也是很重要的。因?yàn)榻M織離體后，供應(yīng)這此組織的血液隨之消失，細(xì)胞缺氧，細(xì)胞內(nèi)溶酶體膜的結(jié)構(gòu)受到破壞，破壞后釋放出溶酶體酶，組織在溶酶體酶的作用下開(kāi)始

3、自溶。日常生活中常碰到的肉變質(zhì)，就是細(xì)菌污染加組織自溶的結(jié)果。這也就是為什么離體器官或組織必須在手術(shù)室剛切下來(lái)的時(shí)候就固定的原因。在我們科室最常用的固定液是4%中性甲醛溶液（10%中性福爾馬林溶液）。三水洗及常規(guī)取材。水洗是指針對(duì)已經(jīng)固定充分的組織及器官用流水沖洗。洗去待檢標(biāo)本表面的雜質(zhì)及其它可能影響診斷的物質(zhì)。取材，主要是對(duì)送檢標(biāo)本進(jìn)行肉眼檢查并記錄同時(shí)從標(biāo)本中切取有病變或懷疑有病變的部位。而對(duì)于微小標(biāo)本，如通過(guò)胃鏡或纖支鏡等取出的標(biāo)本我們一般對(duì)標(biāo)本進(jìn)行全取檢查。以避免漏診。四脫水，透明和浸蠟。在現(xiàn)在的常規(guī)病理切片的制備過(guò)程中，脫水，透明和浸蠟都是由脫水機(jī)自動(dòng)完成的。在這里我們也對(duì)其程序和原

4、理統(tǒng)一的介紹。脫水，是指組織經(jīng)過(guò)一系列經(jīng)典的處理過(guò)程，是使原本親水性的組織最終可以用疏水性的介質(zhì)進(jìn)行包埋，比如石蠟，火棉膠和絕大多數(shù)樹(shù)酯。脫水的關(guān)鍵就是將樣品置于脫水試劑中足夠長(zhǎng)的時(shí)間，使細(xì)胞中游離的水分子被除去，但是脫水時(shí)間也不宜過(guò)長(zhǎng)，否則結(jié)合水分子也會(huì)被除去 ，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)的變化，使樣品的皺縮變脆。而脫水時(shí)間過(guò)短致使水分還殘留在樣品中，就會(huì)導(dǎo)致包埋介質(zhì)無(wú)法很好滲透入樣品。我們科室脫水的程序一共有五步，分別為：酒精酒精酒精無(wú)水乙醇無(wú)水乙醇脫水劑的濃度必須由低到高。因?yàn)槿绻_(kāi)始就是高濃度的脫水劑的話，會(huì)使組織細(xì)胞在開(kāi)始的時(shí)候就脫水過(guò)分的猛列，細(xì)胞不能承受而導(dǎo)致其結(jié)構(gòu)的破壞。這是一個(gè)循序漸進(jìn)的

5、過(guò)程。透明，目前在我們科室用的最普遍透明劑是二甲苯。它是一種芳香烴類化合物，它能夠快速替換在脫水過(guò)程中組織中殘留的乙醇。在正確的脫水步驟后，芳香烴能夠改變樣品的折射率并使組織變透明。作用時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致組織變硬，尤其一些纖維、肌肉中樞神經(jīng)系統(tǒng)或軟骨組織更容易變硬。如果發(fā)現(xiàn)組織在完成處理后變得太硬或發(fā)脆，可以嘗試減少透明的時(shí)間。透明程序?yàn)椋憾妆蕉妆蕉妆浇?，因?yàn)槊撍蠹?xì)胞會(huì)有所塌陷，浸蠟的目的也就是使石蠟浸入細(xì)胞內(nèi)，重新?lián)纹鸺?xì)胞和細(xì)胞器并保持其正常形態(tài)。在脫水機(jī)中使用石蠟，溫度一般設(shè)定在熔點(diǎn)以上2°C4°C，一般浸蠟所用的蠟的為軟蠟，熔點(diǎn)為攝氏度左右。浸蠟程序?yàn)椋菏炇?/p>

6、石蠟五包埋，包埋是將正確定位的組織包裹在一種介質(zhì)中（此處以石蠟為例）然后固化。如今包埋機(jī)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用，機(jī)器最大的優(yōu)點(diǎn)就是能夠在每個(gè)步驟上都達(dá)到確的溫控 。包埋的具體過(guò)程為：先將熔化的石蠟傾入包埋模具中，再用加熱的彎曲鈍頭鑷子輕輕夾取已經(jīng)過(guò)浸蠟的組織塊，使組織塊的最大面或被特別指定的組織面向下埋入熔蠟中，應(yīng)將組織塊平整地置放于包埋模具底面的中央處。包埋于同一蠟塊內(nèi)的多塊細(xì)小組織應(yīng)彼此靠近并處于同一水平面上；腔壁、皮膚和黏膜組織必須垂直包埋（立埋）。包埋所用的蠟一般為硬蠟，其熔點(diǎn)為60攝氏度左右。包埋機(jī)的溫度也設(shè)置在石蠟熔點(diǎn)以上2°C4°C。六冷凍凝固，包埋好的組織石蠟塊放于

7、冷凍臺(tái)上，待石蠟?zāi)蹋缓缶涂梢郧衅?。七切片、攤片、烤片，將凝固的石蠟塊從模具中取出并按順序擺放于冷凍臺(tái)上，待切片。我們科室的切片用的是手動(dòng)切片機(jī)。切片的過(guò)程并不復(fù)雜，需要的只是一個(gè)熟練過(guò)程和必要的理論知識(shí)。大致的步驟為開(kāi)始是修片，使待切的組織面完全暴露，再切成3m厚度的組織片。切片的厚薄是開(kāi)始設(shè)置好之后由機(jī)器控制的。然后是攤片，分兩步，一是將切下來(lái)的組織片放入30%酒精溶液中進(jìn)行第一次攤片，再用玻片取出后放入45攝氏度左右的水中進(jìn)行第二次攤片。攤片是利用溶液和溫水的張力，使切下來(lái)的組織片變得平整無(wú)皺褶，便于診斷。攤片完成之后，用玻片取出組織片使其附著于玻片上。然后就是將玻片放入烤片箱中烤片

8、。時(shí)間為30分鐘?？酒哪康囊皇鞘刮挥诮M織細(xì)胞外的石蠟熔化達(dá)到初步脫蠟的目的，二是使組織更牢的粘附于玻片上，使其在染色過(guò)程中不會(huì)脫落。八染色，我們科室的常規(guī)病理切片都是用的蘇木精伊紅（HE）染色，它也是目前應(yīng)用最為廣泛的組織病理學(xué)常規(guī)染色技術(shù)。染色的具體程序?yàn)椋?二甲苯 5-10min二甲苯 5-10min二甲苯 5-10min無(wú)水乙醇 1-3min無(wú)水乙醇 1-3min酒精 1-3min流水洗蘇木素 10min流水洗1鹽酸酒精 1-3流水洗伊紅 1-3流水洗簡(jiǎn)單原理為：前面我們已經(jīng)說(shuō)過(guò)通過(guò)烤片，可以脫去細(xì)胞外的蠟。而二甲苯的作用就是脫去細(xì)胞內(nèi)的蠟，方便染色。而后面乙醇的作用就是脫去在前面三步中進(jìn)入細(xì)胞的二甲苯。乙醇的濃度由高到低的原因是用乙醇脫去二甲苯之后需要水洗，所以乙醇的濃度也就由高到低，使其可以循序漸進(jìn)，不至于損害細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu)。接下來(lái)就是蘇木素染色。蘇木素染色的原理是：蘇木素染液為堿性，細(xì)胞核內(nèi)的染色體和胞漿中的核糖體為酸性，屬酸堿結(jié)合染色。結(jié)合之后細(xì)胞核被蘇木素染成藍(lán)色。在蘇木素中染色10min后，需要水洗，屬于常規(guī)操作，主要是洗去