膳食補(bǔ)充黑米皮對冠心病患者血漿中氧化應(yīng)激、炎癥和脂質(zhì)水平的影

1、膳食補(bǔ)充黑米皮對冠心病患者血漿中氧化應(yīng)激、炎癥和脂質(zhì)水平的影響    作者：王慶， 韓平華，張名位，聶如瓊 袁沃亮， 胡艷， 凌文華 【摘要】  【目的】 給予冠心病患者日常膳食中補(bǔ)充黑米米皮，評價(jià)其是否可以增強(qiáng)患者體內(nèi)的抗氧化能力并降低其炎癥及血脂水平?！痉椒ā?在中山大學(xué)附屬第二醫(yī)院心血管內(nèi)科選取60例年齡為4575歲的冠心病患者，采用隨機(jī)對照原則將患者分入2組, 30例在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上每日膳食額外補(bǔ)充10 g黑米米皮為干預(yù)組, 余30例在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上每日膳食額外補(bǔ)充10 g白米米皮為對照組。此外，分別從干預(yù)組及對照組中選取3名志愿者

2、，在受試者進(jìn)食前和進(jìn)食后0.5、1、1.5、2、4 h采肘靜脈血10 mL，通過HPLC法檢測患者血漿中的花色苷水平。【結(jié)果】 經(jīng)6個(gè)月的干預(yù)試驗(yàn)后，干預(yù)組患者血漿總抗氧化能力升高了(1.3 ± 3.0)kU/L，而對照組則降低了(0.6 ± 1.7)kU/L，兩組間患者總抗氧化能力水平的變化值具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P< 0.05)；干預(yù)組患者治療后血漿可溶性血管細(xì)胞粘附因子、可溶性CD40配體和高敏-C反應(yīng)蛋白分別從（1.4 ± 0.8）g/L、（8.4 ± 4.1）mg/L 和（3.8 ± 1.8）mg/L 降至（1.0 ± 0.

3、5）g/L、（5.7 ± 2.4）mg/L 和（2.6 ± 1.7）mg/L，與對照組相比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P< 0.05)；而兩組患者間的血脂、超氧化物歧化酶活性水平的治療效果無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。此外，只有在服用了黑米米皮患者血漿中能檢測到花色苷（矢車菊素-3- 葡萄糖苷），其在血漿中的最高濃度為（20.2 ± 3.0）mg/L出現(xiàn)在1.5 h，而服用白米米皮的患者血漿中在所有的時(shí)間段都未檢測到任何的花色苷產(chǎn)物?！窘Y(jié)論】膳食補(bǔ)充黑米皮可以作為藥物治療的一種輔助和補(bǔ)充從而增強(qiáng)冠心病患者血漿中的抗氧化能力并改善部分與心血管疾病相關(guān)的危險(xiǎn)因素，黑米皮對于冠心病患者的

4、保護(hù)作用可能與其富含具有抗氧化和抗炎特性的花色苷類物質(zhì)有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】  黑米皮; 花色苷; 冠心病; 抗氧化; 炎癥      動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis, As)的發(fā)病機(jī)理十分復(fù)雜，但氧化應(yīng)激、炎癥及血脂水平的升高已被大多數(shù)學(xué)者證實(shí)為As形成的主要危險(xiǎn)因素，而且斑塊的形成與飲食因素、生活習(xí)慣密切相關(guān), 其中飲食習(xí)慣和飲食結(jié)構(gòu)的改善對于降低As發(fā)生具有重要意義。黑米是稻米中的珍品，因花色苷在果皮和種皮內(nèi)沉積而成。黑米中蛋白質(zhì)含量相當(dāng)豐富，必需氨基酸種類齊全，含有多種微量元素和維生素，此外還含有大量的植物化學(xué)物質(zhì)（phyto

5、chemicals），以花色苷類物質(zhì)為主，包括矢車菊素-3-葡萄糖苷（cyanidin 3-glucoside, Cy-3-g）和芍藥素-3-葡萄糖苷(peonidin 3-glucoside, Pn-3-g)。現(xiàn)有的國內(nèi)外研究報(bào)道1-4發(fā)現(xiàn),無論體外實(shí)驗(yàn)還是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均顯示黑米具有較強(qiáng)的抗氧化、抗炎及改善血脂的作用,其活性成分卻主要集中在米皮層,我們推測這些作用與黑米中的膳食纖維、維生素和礦物質(zhì)等因素?zé)o關(guān),可能是其米皮層的花色苷類化學(xué)物發(fā)揮作用5，6，但膳食補(bǔ)充富含花色苷的黑米皮是否能對人群AS相關(guān)危險(xiǎn)因素產(chǎn)生影響則尚未見報(bào)道。因此，本實(shí)驗(yàn)旨在觀察膳食補(bǔ)充黑米皮后，冠心病患者血漿中抗氧化、炎癥

6、、脂質(zhì)及花色苷水平的變化。     1   材料與方法     1.1  臨床資料     選取2004年3月至2004年12月期間中山大學(xué)附屬第二醫(yī)院心血管?？崎T診及病房的60例冠心病患者為研究對象, 均符合WHO診斷標(biāo)準(zhǔn)，部分經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影證實(shí), 不包括研究開始前3個(gè)月內(nèi)有心肌梗死史或確診的不穩(wěn)定型心絞痛史，進(jìn)行過外科手術(shù)的患者；有腎衰、嚴(yán)重肝臟疾病以及癌癥的患者；有長期服用抗氧化劑（如維生素片）史的患者。     1.2  方法

7、    1.2.1  干預(yù)方法  本研究采用隨機(jī)、單盲、安慰劑對照的方法。60例患者按1 1的比例隨機(jī)（隨機(jī)數(shù)字表）分成干預(yù)組和對照組，每組30人。干預(yù)組患者在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上每日膳食額外補(bǔ)充黑米皮產(chǎn)品, 10 g黑米皮加開水300 mL溶解,每日早餐后服用, 6個(gè)月為1療程。對照組患者在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上每日膳食額外補(bǔ)充10 g白米皮作為安慰劑。     1.2.2   血漿中生化指標(biāo)的檢測方法   黑米皮干預(yù)組及對照組患者于治療前及療程結(jié)束后清晨空腹各抽血1次，采用EDTA

8、抗凝劑抗凝，3 000 r/min 離心后取血漿，測定患者血漿中總抗氧化能力(total antioxidant capacity, TAC)，超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性水平,可溶性血管細(xì)胞粘附因子(soluble vascular cell adhesion molecule-1, sVCAM-1), 可溶性CD40配體(soluble CD40 ligand, sCD40L), 高敏-C反應(yīng)蛋白（high sensitive- C reactive protein,hs-CRP）及血脂包括總膽固醇（total cholesterol, TC）、

9、甘油三脂（triglyceride, TG）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol， LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol,HDL-C）。血漿中TAC采用三價(jià)鐵還原法測定，血漿中SOD活性采用黃嘌呤氧化酶法檢測，試劑盒購自南京建成生物研究所。 sVCAM-1，sCD40L采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測，試劑盒購自比利時(shí)Biosource公司和奧地利Bender MedSystems公司。hs-CRP采用免疫比濁法檢測，TG采用比色法檢測,TC和HDL-C采用酶法檢測

10、, LDL-C采用直接法檢測，日立全自動(dòng)生化分析儀測定。     1.2.3   血漿中花色苷水平的檢測   在病人中選取了6名志愿者，分為黑米皮服用組（2男1女，49 ± 6 歲）和白米皮服用組（2男1女，48 ± 4 歲）。受試者在實(shí)驗(yàn)前2 d和實(shí)驗(yàn)當(dāng)天清晨避免進(jìn)食富含花色苷的食物，實(shí)驗(yàn)前2周避免服用抗炎藥物、抗氧化劑和含中藥成分的補(bǔ)充劑。在空腹禁食（1214 h）后，分別將10 g的黑米米皮（約含231 mg花色苷）和10 g白米米皮融于300 mL開水中服下。受試者在進(jìn)食前和進(jìn)食后0.5、1、1.

11、5、2、4 h采肘靜脈血10 mL（EDTA-K2抗凝），血液樣品 4 ，3 000 r/min下離心10 min用于分離血漿；血漿標(biāo)本用容量1/40體積的6 mmol/L HCl酸化后，均置于80 冰箱保存待用。血漿中的花色苷利用SPEC18過濾筒（Supelclean ENVI-18，6 mL，0.5 g容量），通過固相萃取的方法濃縮提取。這種過濾筒先用含有10 mL/L鹽酸的甲醇10 mL沖洗后，在加入樣品前，用10 mL的10 mmol/L草酸浸泡。用注射器取4 mL血漿裝入過濾筒中；過濾筒中的樣品分別用10 mmol/L草酸，10 mL的二氯甲烷，10 mL的苯緩慢沖洗處理（1滴/s

12、），分別除去樣品中的水融性物質(zhì)，極性脂肪和中性脂肪。最后，將過濾筒中的花色苷用5 mL鹽酸甲醇10 mL/L緩慢沖出（1滴/s）。鹽酸甲醇溶液用N2吹干后，再重新用200 L的10 mL/L鹽酸甲醇重懸定容，取其中100 L重懸液用于高效液相色譜法(high performance liquid chromatography,HPLC)檢測。流動(dòng)相選擇：40 mL/L的磷酸/乙腈（體積比8.8 1.2, pH=2.0）；流速為0.8 mL/min；柱溫：30 ；檢測波長：520 nm。Cy-3-g和Pn-3-g標(biāo)準(zhǔn)品購自挪威polyphenol AS 公司,外標(biāo)法定量。   

13、;  1.2.4   統(tǒng)計(jì)學(xué)方法   連續(xù)變量用 ±表示。計(jì)數(shù)資料兩組比較用 2 檢驗(yàn)，其他計(jì)量資料兩組比較用成組 t 檢驗(yàn)，而非正態(tài)分布的兩組患者治療前后血漿中抗氧化能力、炎性因子及脂質(zhì)水平變化值的比較用Mann-Whiney U秩和檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)取0.05。統(tǒng)計(jì)分析用SPSS 11.5版本軟件。     2   結(jié)   果     2.1   兩組患者基本臨床資料的比較     黑米

14、皮干預(yù)組30例,其中男19例, 女11例, 年齡平均為 64（S = 9)歲, 身體質(zhì)量指數(shù)(Body mass index, BMI)為 (24.0 ± 3.6) kg/m2,其中合并陳舊性腦梗死6例, 陳舊性心肌梗死5例, 高血壓病15例,高脂血癥16例,糖尿病4例; 24例需服用阿司匹林，16例需服用他汀類藥物，15例需服用血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑,6例需服用-受體阻滯劑，7例需服用鈣離子拮抗劑。對照組30 例, 其中男17例, 女13例， 年齡平均為64（S = 11) 歲，BMI為(23.2 ± 2.8) kg/m2 其中合并陳舊性腦梗死5例, 陳舊性心肌梗死3例,

15、 高血壓病14例,高脂血癥18例, 糖尿病5例。22例需服用阿司匹林，18例需服用他汀類藥物，12例需服用血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑,8例需服用-受體阻滯劑，8例需服用鈣離子拮抗劑。兩組患者的性別、年齡、合并癥，用藥情況均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P >0.05)。在6個(gè)月的追蹤期內(nèi)，每個(gè)月要求患者回訪一次，發(fā)放下一階段受試物和回收剩余補(bǔ)充劑，并通過家庭訪問及電話訪問的方式了解受試物的服用情況。根據(jù)患者每次返還的補(bǔ)充劑數(shù)量顯示黑米皮和白米皮服用率分別為(90.9 ± 2.0)%和(91.4 ± 1.8)%。兩組病人在試驗(yàn)過程中均未發(fā)生不良反應(yīng)。   &#

16、160;2.2   兩組患者治療前后血漿中抗氧化能力、炎性因子及脂質(zhì)水平的測定結(jié)果     經(jīng)6個(gè)月的干預(yù)試驗(yàn)后，干預(yù)組患者血漿TAC水平較干預(yù)前有所升高，而對照組則比干預(yù)前略有降低，兩組間干預(yù)后的變化值具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P< 0.05)；血漿中游離炎性因子的檢測結(jié)果表明服用黑米皮能明顯的降低患者血漿中sVCAM-1，sCD40L和hs-CRP水平，與對照組相比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P< 0.05)；然而經(jīng)過6個(gè)月的試驗(yàn)干預(yù)后，兩組患者間的各項(xiàng)血脂水平，SOD活性的治療效果無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（表1）。     2

17、.3   血漿中花色苷含量的測定結(jié)果     在未服用含花色苷的黑米皮前，受試者血漿樣品中未檢測到花色苷產(chǎn)物。而在服用了黑米皮0，0.5，1.0，1.5和2.0 h后，受試者血漿中Cy-3-g的濃度分別為（10.0 ± 1.6）mg/L，（13.5 ± 3.2）mg/L，（20.2 ± 3.0）mg/L及（5.7 ± 1.4）mg/L，4 h后受試者血漿中Cy-3-g的濃度已低于HPLC法最低檢測限，但所有時(shí)間段內(nèi)的血漿樣品均未檢測到Pn-3-g。白米皮服用組的受試者血漿樣品則在所有的時(shí)間段均未檢測到任何

18、的花色苷產(chǎn)物。     3   討   論     3.1   黑米皮花色苷在患者體內(nèi)的代謝情況     我們之前的研究發(fā)現(xiàn)黑米皮中的花色苷以Cy-3-g和Pn- 3-g為主，分別占總花色苷含量的81和19左右，這兩種花色苷類物質(zhì)具有多種生理功能，包括抗氧化、抗炎以及調(diào)節(jié)血脂和免疫功能，能有效的防治心血管疾病等慢性疾病，但黑米皮花色苷在冠心病患者體內(nèi)代謝的研究則尚未見報(bào)道。很長一段時(shí)間人們都認(rèn)為花色苷類物質(zhì)必須在腸道微生物作用下生成水解產(chǎn)物后才能

19、進(jìn)入體內(nèi)，而現(xiàn)有的研究7表明，花色苷在小腸部位能以原型被吸收而進(jìn)入血液循環(huán)。本研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，患者口服黑米皮后，花色苷能以糖苷原型吸收并出現(xiàn)在血液中，但表現(xiàn)為低吸收、低代謝的特點(diǎn)，這與其他植物中花色苷類物質(zhì)的代謝研究結(jié)果基本一致8。     3.2   膳食補(bǔ)充黑米皮對患者抗氧化能力的影響     人體內(nèi)存在多種由酶系和非酶系物質(zhì)組成的抗氧化體系，在阻止氧自由基的損傷中起著重要作用。TAC是對機(jī)體總抗氧化能力大小的檢測。本研究顯示，黑米皮干預(yù)組患者治療后血漿中TAC水平顯著高于對照組，但SOD活性的兩組差異不大

20、, 表明黑米皮可增強(qiáng)冠心病患者體內(nèi)的抗氧化能力，而且主要表現(xiàn)為增加了血漿內(nèi)非酶系抗氧化物質(zhì)的含量，我們推測這種抗氧化作用可能是由于黑米皮中的花色苷物質(zhì)以原型的形態(tài)被人體吸收后直接發(fā)揮其抗氧化作用，或者黑米皮膳食補(bǔ)充后改善的是機(jī)體組織內(nèi)抗氧化酶的活性而非血漿中游離的抗氧化酶的活性。     3.3   補(bǔ)充黑米皮對患者心血管危險(xiǎn)因素的影響     慢性心腦血管病的主要發(fā)病機(jī)理和病理基礎(chǔ)是As的形成，而現(xiàn)有研究多支持As是血管內(nèi)皮損傷后的一種緩慢而復(fù)雜的炎癥性增生性疾病9。循環(huán)血清中炎癥標(biāo)志物水平能間接反映As斑塊的活

21、動(dòng)程度，因此，檢測sVCAM-1、sCD40L和hs-CRP水平的高低對于冠心病患者可能具有重要的臨床意義 10-12。本次研究顯示，經(jīng)6個(gè)月干預(yù)治療后，黑米皮組患者的sVCAM-1、sCD40L和hs-CRP較治療前有明顯的改善，而對照組患者的 sVCAM-1、sCD40L和hs-CRP水平無明顯的變化。有研究表明13，體內(nèi)VCAM-1、CD40L和hs-CRP含量的增高主要是由體內(nèi)活性氧自由基生成過多造成的，因此，黑米皮抗炎作用可能主要來自黑米皮中富含的具有抗氧化特性的花色苷類物質(zhì)。     此外，血脂紊亂尤其是LDL膽固醇升高也與As發(fā)生密切相關(guān)。但在本次試

22、驗(yàn)中，我們并沒有觀察到膳食補(bǔ)充黑米皮能有效的降低CHD患者的各種血脂水平，這與我們之前的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果相悖，這種現(xiàn)象可能與參與本次試驗(yàn)部分患者長期服用他汀類藥物而且采取低脂飲食導(dǎo)致其血脂水平在參與試驗(yàn)時(shí)已處于相對正常的狀況從而掩蓋了富含花色苷的黑米皮的降脂作用14-15。然而也可能膳食補(bǔ)充此劑量的黑米皮尚未能起到降低人群血脂水平的效果。     綜上所述，膳食補(bǔ)充黑米皮可以作為藥物治療的一種輔助和補(bǔ)充而增強(qiáng)冠心病患者血漿中的抗氧化能力并改善部分與心血管疾病相關(guān)的危險(xiǎn)因素，黑米皮對于冠心病患者的保護(hù)作用可能與其富含具有抗氧化和抗炎特性的花色苷類物質(zhì)有關(guān)。 【參考文獻(xiàn)】

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