薄層色譜及柱色譜ppt課件

1、LOGO薄層色譜及柱色譜指點(diǎn)教師：徐曉林OGO一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握色譜法的根本原理及其運(yùn)用。2、掌握薄層色譜及柱色譜的操作技藝。LOGO二、色譜法根本原理1.色譜法又稱為層析法，是分別，純化和鑒定有機(jī)化合物的重要方法之一。 2.色譜法的根本原理是利用混合物各組分在兩相間流動(dòng)相和固定相的吸附或分配溶解性能的差別。即當(dāng)混合物隨流動(dòng)相流經(jīng)固定相時(shí)，由于固定相對(duì)各組分的吸附或溶解性能的不同，經(jīng)過兩相間反復(fù)多次的吸附或分配，使吸附較弱或溶解度較小的組分在固定相中挪動(dòng)較快，從而使各組分得到分別。3.色譜法的運(yùn)用主要包括以下幾個(gè)方面：1分別混合物2精致提純化合物3鑒定化合物4跟蹤反

2、響進(jìn)程4.兩相中，相對(duì)固定不動(dòng)的一相稱為固定相，挪動(dòng)的一相稱為流動(dòng)相。LOGO三、色譜法的分類1薄層色譜：將固定相均勻涂布在外表光滑的平板上，構(gòu)成薄層來進(jìn)展物質(zhì)分別及分析的方法。 按其操作不同，可分為薄層色譜、柱色譜、紙色譜、氣相色譜和高效液相色譜。 2柱色譜：將固定相裝在色譜柱中，使樣品沿著色譜柱挪動(dòng)，經(jīng)過各組分隨流動(dòng)相流動(dòng)而得到分別的方法。3紙色譜：用濾紙等作為液體的載體，將樣品點(diǎn)在紙上隨后展開而到達(dá)分別鑒定的方法。4氣相色譜：是以氣體為流動(dòng)相的色譜法。LOGO三、色譜法的分類1吸附色譜：利用吸附劑對(duì)不同組分吸附才干的不同加以分別的方法。2分配色譜：利用不同組分在流動(dòng)相和固定相中的分配系數(shù)

3、不同而進(jìn)展分別的方法。3離子交換色譜：利用離子交換劑與各組分之間的離子親和 力不同而進(jìn)展層析分別的方法。 按其作用原理不同，可分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜和凝膠浸透色譜。5高效液相色譜：是利用液態(tài)的流動(dòng)相在高壓驅(qū)動(dòng)下流經(jīng)填充著固定相的色譜柱時(shí)，加載的樣品得以分別，并利用各組分不同的物理性質(zhì)加以檢測(cè)。4凝膠浸透色譜：利用不同組分之間分子大小不同，在經(jīng)過凝膠介質(zhì)時(shí)所遭到的阻滯作用的差別而進(jìn)展分別的方法。LOGO四、薄層色譜1.薄層板的制備：1固定相的選擇：吸附色譜： 氧化鋁、硅膠 H不含黏合劑分配色譜的支持劑：硅藻土、纖維素 F含熒光物質(zhì) G含煅石膏2CaSO4H2O黏合劑) ？HF254

4、 GF254 薄層板的制備點(diǎn)樣點(diǎn)樣展開展開顯色，計(jì)算、分析顯色，計(jì)算、分析LOGO四、薄層色譜2制板： 干法和濕法取3g硅膠G與6-7mL0.5%-1%的羧甲基纖維素鈉的水溶液在燒杯中調(diào)成糊狀物平鋪平鋪或浸漬或浸漬室溫晾干后，室溫晾干后，放入烘箱內(nèi)加熱活化放入烘箱內(nèi)加熱活化通常用六中染料確定活性通常用六中染料確定活性LOGO四、薄層色譜2.點(diǎn)樣2通常將樣品溶于低沸點(diǎn)溶劑丙酮，甲醇、乙醚等，根據(jù)運(yùn)用的固定相配成0.5%-5%的溶液，用內(nèi)徑小于1mm管口平整的毛細(xì)管，在起始線上小心點(diǎn)樣，斑點(diǎn)直徑普通不超越2-3mm。1點(diǎn)樣前，先在薄層板上據(jù)底端1cm處，用尺子、鉛筆輕畫一橫線作為起始線.3同一塊板

5、可點(diǎn)幾個(gè)樣品點(diǎn)，但是間距應(yīng)為1-1.5cm。點(diǎn)樣要輕，不可刺破薄層！毛細(xì)管在薄層上的停留時(shí)間不能太長(zhǎng)，以防樣點(diǎn)過大，呵斥拖尾、分散等景象，影響分別效果。4點(diǎn)樣終了，必需待樣品點(diǎn)枯燥后，方可進(jìn)展展開。LOGO四、薄層色譜3.展開2展開操作：a.先在密閉的展開槽內(nèi)倒入少量配好的展開劑，高度不能超越1cm。待其蒸氣飽和，以到達(dá)平衡。約5minb.將點(diǎn)樣后的薄層板放入展槽中，先不要接觸展開劑，讓薄層板吸附蒸氣以達(dá)飽和。約3minc.將點(diǎn)樣的一端放入展開劑中，墊高薄層板，一直使薄層板浸入展開劑為0.5cm，展開劑高度絕對(duì)不能浸過起始線！d.待溶劑前沿離頂端1cm左右，就應(yīng)取出薄層板，待展開劑揮干后，察看

6、分析。絕對(duì)不能使展開劑漫過薄層板的頂端！1展開劑的選擇：根據(jù)樣品的極性、溶解度和吸附劑的活性等要素思索。LOGO四、薄層色譜4.顯色、計(jì)算及分析1假設(shè)樣品本身是有色的，可以直接察看到分別的過程及結(jié)果。 假設(shè)無色，那么可經(jīng)過以下幾種方法顯色：碘熏、紫外光燈、噴顯色劑。2計(jì)算比移值Rf：LOGO四、薄層色譜3良好的分別，Rf值應(yīng)在0.15-0.75之間，否那么應(yīng)改換展開劑重做。通常樣品的極性越大，Rf值越小。4在一定的操作條件下，即色譜條件一定，比移值Rf只與組分性質(zhì)有關(guān)，因此可用來鑒定化合物。定性但是Rf值除了決議于物質(zhì)的構(gòu)造外，還與吸附劑的含水量、薄層厚度，展開劑純度、溫度等外界要素有關(guān)，因此

7、薄層色譜幾乎不用于定性，常用來分析樣品中的組分。LOGO五、柱色譜柱色譜：是將吸附劑固定相裝入一根帶有下旋塞或無下旋塞的玻璃管中，將樣品溶于溶劑，隨洗脫劑流動(dòng)相沿著色譜柱，進(jìn)展分別的方法。裝柱展開及洗脫LOGO1.裝柱：是柱色譜最關(guān)鍵的操作，裝柱的好壞直接影響分別效果。1裝柱前，應(yīng)先將玻璃柱洗凈，枯燥，垂直固定在鐵架臺(tái)上。在柱底鋪一小塊脫脂棉，再鋪約0.5cm厚的石英砂，然后進(jìn)展裝柱。有濕法和干法兩種裝柱方法。五、柱色譜2濕法裝柱：將固定相如硅膠用洗脫劑調(diào)成糊狀，在柱內(nèi)先參與約3/4柱高的洗脫劑，再將糊狀物邊震蕩邊倒入柱中，同時(shí)，翻開下旋塞，用一干凈枯燥的燒杯接納洗脫劑。待糊狀物全部裝完后，用

8、接納到的洗脫劑轉(zhuǎn)移殘留的固定相，并將柱壁上的固定相淋洗下去。裝柱過程中，應(yīng)不斷輕敲色譜柱，以使固定相填充均勻、無氣泡！整個(gè)裝柱過程中，柱內(nèi)洗脫劑的高度一直不能低于固定相最上端，否那么柱內(nèi)會(huì)出現(xiàn)裂痕和氣泡！LOGO五、柱色譜2.展開及洗脫：將樣品溶解在最少量的洗脫劑中。滴加前，翻開下旋塞，使洗脫劑流出，恰好下降到固定相外表時(shí)，封鎖旋塞，開場(chǎng)將樣品迅速全部滴加于柱頂端后，用一事先戳孔的圓形濾紙蓋住樣品外表，以防加洗脫劑時(shí)攪動(dòng)柱頂外表。樣品加完后，翻開下旋塞，再立刻參與洗脫劑進(jìn)展洗脫。色譜帶的展開過程就是樣品的分別過程，可按顏色段搜集各組分。3干法裝柱：在色譜柱頂端放一干凈枯燥的漏斗，將枯燥的吸附劑固定相倒入漏斗中，使其成為細(xì)流延續(xù)不斷地裝入柱中。要悄然敲打柱身，使其填充均勻后，翻開旋塞，從頂端參與洗脫劑沖柱，以排除氣泡，并保管一定液面。LOGO五、柱色譜1.洗脫劑應(yīng)延續(xù)平穩(wěn)地參與，不能中斷。洗脫過程中的本卷須知：2.洗脫劑流出速度應(yīng)控制在每分鐘5-10滴。下移速度太快，分別效果不好，太慢，會(huì)呵斥色譜分散或成分破壞，影響分別效果。LOGO思索