高效液相色譜的基礎(chǔ)知識(shí)ppt課件

1、高效液相色譜的根底知識(shí) 1高效液相色譜法的特點(diǎn)高效液相色譜法的特點(diǎn)2高效液相色譜法儀器任務(wù)原理高效液相色譜法儀器任務(wù)原理3高效液相色譜儀的維護(hù)高效液相色譜儀的維護(hù)4高效液相色譜法儀的本卷須知高效液相色譜法儀的本卷須知5高效液相色譜的分析運(yùn)用高效液相色譜的分析運(yùn)用高效液相色譜法的特點(diǎn)高效液相色譜法的特點(diǎn) 高效液相色譜法HPLC是20世紀(jì)60年代末70年代初開(kāi)展起來(lái)的一種新型分別分析技術(shù)，隨著不斷改良與開(kāi)展，目前已成為運(yùn)用極為廣泛的化學(xué)分別分析的重要手段。它是在經(jīng)典液相色譜根底上，引入了氣相色譜的實(shí)際，在技術(shù)上采用了高壓泵、高效固定相和高靈敏度檢測(cè)器，因此具備速度快、效率高、靈敏度高、操作自動(dòng)化的

2、特點(diǎn)。為了更好地了解高效液相色譜法優(yōu)越性，現(xiàn)從兩方面進(jìn)展比較：高效液相色譜法的特點(diǎn)高效液相色譜法的特點(diǎn) 1高效液相色譜法與經(jīng)典液相色譜法 高效液相色譜法比起經(jīng)典液相色譜法的最大優(yōu)點(diǎn)在于高速、高效、高靈敏度、高自動(dòng)化。高速是指在分析速度上比經(jīng)典液相色譜法快數(shù)百倍。由于經(jīng)典色譜是重力加料，流出速度極慢；而高效液相色譜配備了高壓輸液設(shè)備，流速最高可達(dá) 103cmmin-1.例如對(duì)氨基酸分別，用經(jīng)典色譜法，需用20多小時(shí)才干分別出20種氨基酸；而用高效液相色譜法，只需lh之內(nèi)即可完成。高效液相色譜法的特點(diǎn)高效液相色譜法的特點(diǎn)2高效液相色譜法與氣相色譜法 l氣相色譜法分析對(duì)象只限于分析氣體和沸點(diǎn)較低的化

3、合物，它們僅占有機(jī)物總數(shù)的20。對(duì)于占有機(jī)物總數(shù)近80的那些高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、摩爾質(zhì)量大的物質(zhì)，目前主要采用高效液相色譜法進(jìn)展分別和分析。 (2)氣相色譜采用流動(dòng)相是惰性氣體，它對(duì)組分沒(méi)有親和力，即不產(chǎn)生相互作用力，僅起運(yùn)載作用。而高效液相色譜法中流動(dòng)相可選用不同極性的液體，選擇余地大，它對(duì)組分可產(chǎn)生一定親和力，并參與固定相對(duì)組分作用的猛烈競(jìng)爭(zhēng)。因此，流動(dòng)相對(duì)分別起很大作用，相當(dāng)于添加了一個(gè)控制和改良分別條件的參數(shù)，這為選擇最正確分別條件提供了極大方便。 (3)氣相色譜普通都在較高溫度下進(jìn)展的，而高效液相色譜法那么經(jīng)常可在室溫條件下任務(wù)。高效液相色譜法的特點(diǎn)高效液相色譜法的特點(diǎn) 分析速度快通

4、常分析一個(gè)樣品在1530 min，有些樣品甚至在5 min內(nèi)即可完成。 選擇性高可選擇固定相和流動(dòng)相以到達(dá)最正確分別效果，可分析同類(lèi)型的有機(jī)化合物及其同分異構(gòu)體，還可以分析在性質(zhì)上極為類(lèi)似的旋光異構(gòu)體。 靈敏度高紫外檢測(cè)器可達(dá)0.01ng，熒光和電化學(xué)檢測(cè)器可達(dá)0.1pg。 柱子可反復(fù)運(yùn)用用一根色譜柱可分別不同的化合物。 樣品量少，容易回收樣品經(jīng)過(guò)色譜柱后不被破壞，可以搜集單一組分或做制備。高效液相色譜法的特點(diǎn)高效液相色譜法的特點(diǎn) 超高效液相色譜(UPLC) 是區(qū)別于HPLC的液相色譜新領(lǐng)域 基于小顆粒填料和LC原理的一種創(chuàng)新技術(shù) 實(shí)現(xiàn)超高分別度、靈敏度、分析速度1高效液相色譜法的特點(diǎn)高效液相

5、色譜法的特點(diǎn)2高效液相色譜法儀器任務(wù)原理高效液相色譜法儀器任務(wù)原理3高效液相色譜儀的維護(hù)高效液相色譜儀的維護(hù)4高效液相色譜法儀的本卷須知高效液相色譜法儀的本卷須知5高效液相色譜的分析運(yùn)用高效液相色譜的分析運(yùn)用高效液相色譜儀任務(wù)原理高效液相色譜儀任務(wù)原理 高壓輸液系統(tǒng) 進(jìn)樣系統(tǒng) 分別系統(tǒng) 檢測(cè)系統(tǒng)高效液相色譜儀任務(wù)原理高效液相色譜儀任務(wù)原理 其任務(wù)過(guò)程如下：首先高壓泵將貯液器中流動(dòng)相溶劑經(jīng)過(guò)進(jìn)樣器送入色譜柱，然后從控制器的出口流出。當(dāng)注入欲分別的樣品時(shí)，流經(jīng)進(jìn)樣器貯液器的流動(dòng)相將樣品同時(shí)帶入色譜柱進(jìn)展分別，然后依先后順序進(jìn)入檢測(cè)器，記錄儀將檢測(cè)器送出的信號(hào)記錄下來(lái)，由此得到液相色譜圖。高效液相色

6、譜儀任務(wù)原理高效液相色譜儀任務(wù)原理 1 1高壓輸液系統(tǒng)高壓輸液系統(tǒng) 由于高效液相色譜所用固定相顆粒極細(xì)，因此對(duì)流動(dòng)相由于高效液相色譜所用固定相顆粒極細(xì)，因此對(duì)流動(dòng)相阻力很大，為使流動(dòng)相較快流動(dòng)，必需配備有高壓輸液系阻力很大，為使流動(dòng)相較快流動(dòng)，必需配備有高壓輸液系統(tǒng)。它是高效液相色譜儀最重要的部件，普通由儲(chǔ)液罐、統(tǒng)。它是高效液相色譜儀最重要的部件，普通由儲(chǔ)液罐、高壓輸液泵、過(guò)濾器、壓力脈動(dòng)阻力器等組成，其中高壓高壓輸液泵、過(guò)濾器、壓力脈動(dòng)阻力器等組成，其中高壓輸液泵是中心部件。對(duì)于一個(gè)好的高壓輸液泵應(yīng)符合密封輸液泵是中心部件。對(duì)于一個(gè)好的高壓輸液泵應(yīng)符合密封性好，輸出流量恒定，壓力平穩(wěn)，可調(diào)范

7、圍寬，便于迅速性好，輸出流量恒定，壓力平穩(wěn)，可調(diào)范圍寬，便于迅速改換溶劑及耐腐蝕等要求。常用的輸液泵分為恒流泵和恒改換溶劑及耐腐蝕等要求。常用的輸液泵分為恒流泵和恒壓泵兩種。恒流泵特點(diǎn)是在一定操作條件下，輸出流量堅(jiān)壓泵兩種。恒流泵特點(diǎn)是在一定操作條件下，輸出流量堅(jiān)持恒定而與色譜柱引起阻力變化無(wú)關(guān)；恒壓泵是指能堅(jiān)持持恒定而與色譜柱引起阻力變化無(wú)關(guān)；恒壓泵是指能堅(jiān)持輸出壓力恒定，但其流量那么隨色譜系統(tǒng)阻力而變化，故輸出壓力恒定，但其流量那么隨色譜系統(tǒng)阻力而變化，故保管時(shí)間的注重性差，它們各有優(yōu)缺陷。目前恒流泵正逐保管時(shí)間的注重性差，它們各有優(yōu)缺陷。目前恒流泵正逐漸取代恒壓泵。恒流泵又稱(chēng)機(jī)械泵，它又

8、分機(jī)械注射泵和漸取代恒壓泵。恒流泵又稱(chēng)機(jī)械泵，它又分機(jī)械注射泵和機(jī)械往復(fù)泵兩種，運(yùn)用最多的是機(jī)械往復(fù)泵。機(jī)械往復(fù)泵兩種，運(yùn)用最多的是機(jī)械往復(fù)泵。高效液相色譜儀任務(wù)原理高效液相色譜儀任務(wù)原理 2進(jìn)樣安裝 高效液相色譜儀任務(wù)原理高效液相色譜儀任務(wù)原理3 3 分別系統(tǒng)分別系統(tǒng)色譜柱色譜柱 色譜柱是液相色譜的心臟部件，它包括柱管與固定相兩部色譜柱是液相色譜的心臟部件，它包括柱管與固定相兩部分。柱管資料有玻璃、不銹鋼、鋁、銅及內(nèi)襯光滑的聚合分。柱管資料有玻璃、不銹鋼、鋁、銅及內(nèi)襯光滑的聚合資料的其他金屬。玻璃管耐壓有限，故金屬管用得較多。資料的其他金屬。玻璃管耐壓有限，故金屬管用得較多。普通色譜柱長(zhǎng)普通

9、色譜柱長(zhǎng)5 530cm30cm，內(nèi)徑為，內(nèi)徑為4 45mm5mm，凝膠色譜柱內(nèi)，凝膠色譜柱內(nèi)徑徑3 312mm12mm，制備往內(nèi)徑較大，可達(dá)，制備往內(nèi)徑較大，可達(dá)25mm 25mm 以上。普通以上。普通在分別前備有一個(gè)前置柱，前置柱內(nèi)填充物和分別柱完全在分別前備有一個(gè)前置柱，前置柱內(nèi)填充物和分別柱完全一樣，這樣可使淋洗溶劑由于經(jīng)過(guò)前置柱為其中的固定相一樣，這樣可使淋洗溶劑由于經(jīng)過(guò)前置柱為其中的固定相飽和，使它在流過(guò)分別柱時(shí)不再洗脫其中固定相，保證分飽和，使它在流過(guò)分別柱時(shí)不再洗脫其中固定相，保證分別技的性能不受影響。別技的性能不受影響。 柱子裝填得好壞對(duì)柱效影響很大。對(duì)于細(xì)粒度的填料柱子裝填得

10、好壞對(duì)柱效影響很大。對(duì)于細(xì)粒度的填料20m20m普通采用勻漿填充法裝柱，先將填料調(diào)成勻普通采用勻漿填充法裝柱，先將填料調(diào)成勻漿，然后在高壓泵作用下，快速將其壓入裝有洗脫液的色漿，然后在高壓泵作用下，快速將其壓入裝有洗脫液的色譜柱內(nèi)，經(jīng)沖洗后，即可備用。譜柱內(nèi)，經(jīng)沖洗后，即可備用。 高效液相色譜儀任務(wù)原理高效液相色譜儀任務(wù)原理4 4檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)系統(tǒng) 目前有兩種根本類(lèi)型的檢測(cè)器目前有兩種根本類(lèi)型的檢測(cè)器: : 一類(lèi)是溶質(zhì)性檢測(cè)器，它僅對(duì)被分別組分的物理或一類(lèi)是溶質(zhì)性檢測(cè)器，它僅對(duì)被分別組分的物理或化學(xué)特性有呼應(yīng)，屬于這類(lèi)檢測(cè)器的有紫外、熒化學(xué)特性有呼應(yīng)，屬于這類(lèi)檢測(cè)器的有紫外、熒光、電化學(xué)檢測(cè)器等

11、。光、電化學(xué)檢測(cè)器等。 另一類(lèi)是總體檢測(cè)器，它對(duì)試樣和洗脫液總的物理另一類(lèi)是總體檢測(cè)器，它對(duì)試樣和洗脫液總的物理或化學(xué)性質(zhì)有呼應(yīng)，屬于這類(lèi)檢測(cè)器的有示差折或化學(xué)性質(zhì)有呼應(yīng)，屬于這類(lèi)檢測(cè)器的有示差折光，蒸發(fā)光散射，電導(dǎo)檢測(cè)器等。光，蒸發(fā)光散射，電導(dǎo)檢測(cè)器等。高效液相色譜儀任務(wù)原理高效液相色譜儀任務(wù)原理1 1紫外檢測(cè)器紫外檢測(cè)器 任務(wù)原理：任務(wù)原理： 基于基于Lambert-BeerLambert-Beer定律，即被測(cè)組定律，即被測(cè)組分對(duì)紫外光或可見(jiàn)光具有吸收，且分對(duì)紫外光或可見(jiàn)光具有吸收，且吸收強(qiáng)度與組分濃度成正比。吸收強(qiáng)度與組分濃度成正比。 通用型檢測(cè)器約有通用型檢測(cè)器約有8080的分析樣品的

12、分析樣品具有紫外吸收具有紫外吸收, ,可以運(yùn)用這種檢測(cè)可以運(yùn)用這種檢測(cè)器檢器檢 測(cè)。測(cè)。高效液相色譜儀任務(wù)原理高效液相色譜儀任務(wù)原理1紫外檢測(cè)器 優(yōu)點(diǎn):a: 靈敏度高b: 線性范圍廣 C: 對(duì)溫度和流速不敏感，適于進(jìn)展梯度洗脫限制:a: 沒(méi)有紫外吸收的物質(zhì)不能檢測(cè)b: 應(yīng)盡能夠選擇在檢測(cè)波長(zhǎng)下沒(méi)有背景吸收的流動(dòng)相 (限制了一些截止波長(zhǎng)在200300nm之間的良好溶劑的運(yùn)用 ) 高效液相色譜儀任務(wù)原理高效液相色譜儀任務(wù)原理1紫外檢測(cè)器 2熒光檢測(cè)器 原理: 物質(zhì)的分子或原子經(jīng)光照射后，有些電子被激發(fā)至較高的能 級(jí)，這些電子從高能級(jí) 躍至低能級(jí)時(shí)，物質(zhì)會(huì)發(fā)出比入射光 波長(zhǎng)較 長(zhǎng)的光，這種光稱(chēng)為熒光

13、。熒光檢測(cè)器就是在樣品的激發(fā)波優(yōu)點(diǎn)檢測(cè)發(fā)射光的強(qiáng)弱.熒光檢測(cè)器是一種選擇性檢測(cè)器 不到20%的物質(zhì)運(yùn)用這種檢測(cè)手段,許多藥物采用這種檢測(cè)方法. 高效液相色譜儀任務(wù)原理高效液相色譜儀任務(wù)原理1紫外檢測(cè)器 2熒光檢測(cè)器 優(yōu)點(diǎn): a: 靈敏度非常高(靈敏度在目前常用的HPLC檢測(cè)器中最高 )，比紫外檢測(cè)器高23個(gè)數(shù)量級(jí)，適宜于痕量分析 b: 可以用于梯度洗脫 c: 對(duì)儀器的穩(wěn)定性如溫度和壓力的穩(wěn)定性依賴(lài)較小 d: 選擇性好，優(yōu)于紫外缺陷: a:適用范圍有一定的局限性 只適用于有熒光基團(tuán)衍生化之后有熒光基團(tuán)的化合物 b: 定量分析時(shí)線性范圍較窄 它適宜于 稠環(huán)芳烴、氨基酸、胺類(lèi)、維生素、蛋 白質(zhì)等熒光

14、物質(zhì)的測(cè)定 高效液相色譜儀任務(wù)原理高效液相色譜儀任務(wù)原理1紫外檢測(cè)器 2熒光檢測(cè)器 3二極管陣列檢測(cè)器原理: 光電二極管陣列或CCD陣列，硅靶攝像管等作為檢測(cè)元件的UV-VIS檢測(cè)器。它可構(gòu)成多通道并行任務(wù)，同時(shí)檢測(cè)由光柵分光，再入射到陣列式接受器上的全部波長(zhǎng)的信號(hào)，然后，對(duì)二極管陣列快速掃描采集數(shù)據(jù)，得到的是時(shí)間、光強(qiáng)度和波長(zhǎng)的三維譜圖。 高效液相色譜儀任務(wù)原理高效液相色譜儀任務(wù)原理1紫外檢測(cè)器 2熒光檢測(cè)器 3二極管陣列檢測(cè)器 高效液相色譜儀任務(wù)原理高效液相色譜儀任務(wù)原理1紫外檢測(cè)器 2熒光檢測(cè)器 3二極管陣列檢測(cè)器與普通UV-VIS檢測(cè)器不同之處: a: 普通UV-VIS檢測(cè)器是先用單色

15、器分光，只讓特定波長(zhǎng)的光進(jìn)入流動(dòng)池。 而二極管陣列UV-VIS檢測(cè)器是先讓一切波長(zhǎng)的光都經(jīng)過(guò)流動(dòng)池，然后經(jīng)過(guò)一系列分光技術(shù)，使一切波長(zhǎng)的光在接受器上被檢測(cè). b:普通UV-VIS檢測(cè)器只能得到二維的譜圖,而DAD可以得到三維圖譜. 高效液相色譜儀任務(wù)原理高效液相色譜儀任務(wù)原理1紫外檢測(cè)器紫外檢測(cè)器 2熒光檢測(cè)器熒光檢測(cè)器 3二極管陣列檢測(cè)器二極管陣列檢測(cè)器運(yùn)用運(yùn)用a: 色譜峰純度檢查色譜峰純度檢查b: 色譜峰鑒定色譜峰鑒定三維色譜能提供更多全面的信息。三維色譜能提供更多全面的信息。 高效液相色譜儀任務(wù)原理高效液相色譜儀任務(wù)原理1紫外檢測(cè)器 2熒光檢測(cè)器 3二極管陣列檢測(cè)器4示差折光率檢測(cè)器 是

16、一種通用型檢測(cè)器，只需被測(cè)組分與洗脫液的折光指數(shù)有差別就可運(yùn)用。生命科學(xué)中常遇到各類(lèi)糖類(lèi)化合物，沒(méi)有紫外吸收，普通常用示差折光檢測(cè)器。它的通用性比UVD廣，但靈敏度要低，對(duì)溫度變化敏感，并與梯度洗脫不相容，因此限制了它的運(yùn)用。 高效液相色譜儀任務(wù)原理高效液相色譜儀任務(wù)原理1紫外檢測(cè)器 2熒光檢測(cè)器 3二極管陣列檢測(cè)器4示差折光率檢測(cè)器5電導(dǎo)檢測(cè)器 電化學(xué)檢測(cè)器ECD ECD是根據(jù)物質(zhì)的電復(fù)原性和電氧化性來(lái)進(jìn)展檢測(cè)的，運(yùn)用于對(duì)紫外光沒(méi)有吸收或不能發(fā)出熒光，但具有電活性的物質(zhì)測(cè)定。假設(shè)結(jié)合衍生技術(shù)，也可運(yùn)用于非電活性物質(zhì)的檢測(cè)。安培檢測(cè)器和電導(dǎo)檢測(cè)器在生化、醫(yī)學(xué)、食品和環(huán)境分析中獲得廣泛的運(yùn)用。

17、1高效液相色譜法的特點(diǎn)高效液相色譜法的特點(diǎn)2高效液相色譜法儀器任務(wù)原理高效液相色譜法儀器任務(wù)原理3高效液相色譜儀的維護(hù)高效液相色譜儀的維護(hù)4高效液相色譜法儀的本卷須知高效液相色譜法儀的本卷須知5高效液相色譜的分析運(yùn)用高效液相色譜的分析運(yùn)用高效液相色譜儀的維護(hù)高效液相色譜儀的維護(hù) 泵的運(yùn)用和維護(hù)泵的運(yùn)用和維護(hù)防止任何固體微粒進(jìn)入泵體，由于塵埃或其它任何雜質(zhì)微粒防止任何固體微粒進(jìn)入泵體，由于塵?；蚱渌魏坞s質(zhì)微粒都會(huì)磨損柱塞、密封環(huán)、缸體和單向閥，因此應(yīng)預(yù)先除去都會(huì)磨損柱塞、密封環(huán)、缸體和單向閥，因此應(yīng)預(yù)先除去流動(dòng)相中的任何固體微粒。流動(dòng)相最好在玻璃容器內(nèi)蒸餾，流動(dòng)相中的任何固體微粒。流動(dòng)相最好在

18、玻璃容器內(nèi)蒸餾，而常用的方法是濾過(guò)，可采用而常用的方法是濾過(guò)，可采用MilliporeMillipore濾膜濾膜0.2m0.2m或或0.45m0.45m等濾器。泵的入口都應(yīng)銜接砂濾棒或片。等濾器。泵的入口都應(yīng)銜接砂濾棒或片。輸液泵的濾器應(yīng)經(jīng)常清洗或改換。輸液泵的濾器應(yīng)經(jīng)常清洗或改換。流動(dòng)相不應(yīng)含有任何腐蝕性物質(zhì)，含有緩沖液的流動(dòng)相不應(yīng)流動(dòng)相不應(yīng)含有任何腐蝕性物質(zhì)，含有緩沖液的流動(dòng)相不應(yīng)保管在泵內(nèi)，尤其是在停泵過(guò)夜或更長(zhǎng)時(shí)間的情況下。假保管在泵內(nèi)，尤其是在停泵過(guò)夜或更長(zhǎng)時(shí)間的情況下。假設(shè)將含緩沖液的流動(dòng)相留在泵內(nèi)，由于蒸發(fā)或走漏，甚至設(shè)將含緩沖液的流動(dòng)相留在泵內(nèi)，由于蒸發(fā)或走漏，甚至只是由于溶液

19、的靜置，就能夠析出鹽的微細(xì)晶體，這些晶只是由于溶液的靜置，就能夠析出鹽的微細(xì)晶體，這些晶體將和上述固體微粒一樣損壞密封環(huán)和柱塞等。因此，必體將和上述固體微粒一樣損壞密封環(huán)和柱塞等。因此，必需泵入純水將泵充分清洗后，再換成適宜于色譜柱保管和需泵入純水將泵充分清洗后，再換成適宜于色譜柱保管和有利于泵維護(hù)的溶劑對(duì)于反相鍵合硅膠固定相，可以是有利于泵維護(hù)的溶劑對(duì)于反相鍵合硅膠固定相，可以是甲醇或甲醇甲醇或甲醇- -水。水。泵任務(wù)時(shí)要留心防止溶劑瓶?jī)?nèi)的流動(dòng)相被用完，否那么空泵泵任務(wù)時(shí)要留心防止溶劑瓶?jī)?nèi)的流動(dòng)相被用完，否那么空泵運(yùn)轉(zhuǎn)也會(huì)磨損柱塞、缸體或密封環(huán)，最終產(chǎn)生漏液。運(yùn)轉(zhuǎn)也會(huì)磨損柱塞、缸體或密封環(huán)，

20、最終產(chǎn)生漏液。輸液泵的任務(wù)壓力決不要超越規(guī)定的最高壓力，否那么會(huì)使輸液泵的任務(wù)壓力決不要超越規(guī)定的最高壓力，否那么會(huì)使高壓密封環(huán)變形，產(chǎn)生漏液。高壓密封環(huán)變形，產(chǎn)生漏液。流動(dòng)相應(yīng)該先脫氣，以免在泵內(nèi)產(chǎn)生氣泡，影響流量的穩(wěn)定流動(dòng)相應(yīng)該先脫氣，以免在泵內(nèi)產(chǎn)生氣泡，影響流量的穩(wěn)定性，假設(shè)有大量氣泡，泵就無(wú)法正常任務(wù)性，假設(shè)有大量氣泡，泵就無(wú)法正常任務(wù) 高效液相色譜儀的本卷須知高效液相色譜儀的本卷須知柱的運(yùn)用和維護(hù)1、運(yùn)用前仔細(xì)閱讀色譜柱附帶的闡明書(shū)，留意適用范圍，如pH值范圍、不得注射強(qiáng)酸強(qiáng)堿的樣品，特別是堿性樣品。2、運(yùn)用符合要求的流動(dòng)相； 3、運(yùn)用維護(hù)柱； 4、如所用流動(dòng)相為含鹽流動(dòng)相，反相色譜

21、柱運(yùn)用后，先用水或低濃度甲醇水如5甲醇水溶液，再用甲醇沖洗。 5、長(zhǎng)時(shí)間不用儀器，應(yīng)該將柱子取下用堵頭封好保管，留意不能用純水保管柱子，而應(yīng)該用有機(jī)相(如甲醇等)，由于純水易長(zhǎng)霉。6、 不要高壓沖洗柱子； 7、 不要在高溫下長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)用硅膠鍵合相色譜柱； 運(yùn)用過(guò)程中留意輕拿輕放。高效液相色譜儀的維護(hù)高效液相色譜儀的維護(hù) 流動(dòng)相的脫氣 HPLC所用流動(dòng)相必需預(yù)先脫氣，否那么容易在系統(tǒng)內(nèi)逸出氣泡，影響泵的任務(wù)。氣泡還會(huì)影響柱的分別效率，影響檢測(cè)器的靈敏度、基線穩(wěn)定性，甚至使無(wú)法檢測(cè)。噪聲增大，基線不穩(wěn)，忽然跳動(dòng)。此外，溶解在流動(dòng)相中的氧還能夠與樣品、流動(dòng)相甚至固定相如烷基胺反響。溶解氣體還會(huì)引起溶劑

22、pH的變化，對(duì)分別或分析結(jié)果帶來(lái)誤差。高效液相色譜儀的維護(hù)高效液相色譜儀的維護(hù) 紫外燈的保養(yǎng)： 在分析前、柱平衡得差不多時(shí)，翻開(kāi)檢測(cè)器；在分析完成后，馬上封鎖檢測(cè)器。1高效液相色譜法的特點(diǎn)高效液相色譜法的特點(diǎn)2高效液相色譜法儀器任務(wù)原理高效液相色譜法儀器任務(wù)原理3高效液相色譜儀的維護(hù)高效液相色譜儀的維護(hù)4高效液相色譜法儀的本卷須知高效液相色譜法儀的本卷須知5高效液相色譜的分析運(yùn)用高效液相色譜的分析運(yùn)用高效液相色譜儀的本卷須知高效液相色譜儀的本卷須知一、流動(dòng)相一、流動(dòng)相1 1、流動(dòng)相應(yīng)選用色譜純?cè)噭?、高純水或、流?dòng)相應(yīng)選用色譜純?cè)噭?、高純水或雙蒸水，酸堿液及緩沖液需經(jīng)過(guò)濾后雙蒸水，酸堿液及緩沖液

23、需經(jīng)過(guò)濾后運(yùn)用，過(guò)濾時(shí)留意區(qū)分水系膜和油系運(yùn)用，過(guò)濾時(shí)留意區(qū)分水系膜和油系膜的運(yùn)用范圍；膜的運(yùn)用范圍； 2 2、水相流動(dòng)相需經(jīng)常改換普通不超越、水相流動(dòng)相需經(jīng)常改換普通不超越2 2天，防止長(zhǎng)菌蛻變天，防止長(zhǎng)菌蛻變. .高效液相色譜儀的本卷須知高效液相色譜儀的本卷須知二、樣品二、樣品1 1、采用過(guò)濾或離心方法處置樣品，確保樣品中不含、采用過(guò)濾或離心方法處置樣品，確保樣品中不含固體顆粒；固體顆粒； 2 2、用流動(dòng)相或比流動(dòng)相弱假設(shè)為反相柱，那么極、用流動(dòng)相或比流動(dòng)相弱假設(shè)為反相柱，那么極性比流動(dòng)相大；假設(shè)為正相柱，那么極性比流動(dòng)性比流動(dòng)相大；假設(shè)為正相柱，那么極性比流動(dòng)相小的溶劑制備樣品溶液，盡量用流動(dòng)相制備相小的溶劑制備樣品溶液，盡量用流動(dòng)相制備樣品液樣品液高效液相色譜儀的本卷須知高效液相色譜儀的本卷須知三、操作過(guò)程三、操作過(guò)程1 1、先以所用流動(dòng)相沖洗系一致定時(shí)間如所用流動(dòng)相為含、先以所用流動(dòng)相沖洗系一致定時(shí)間如所用流動(dòng)相為含鹽流動(dòng)相，必需先用水沖洗鹽流動(dòng)相，必需先用水沖洗2020分鐘以上再換上含鹽流動(dòng)分鐘以上再換上含鹽流動(dòng)相，正式進(jìn)樣分析前相，正式進(jìn)樣分析前30min 30min 左右開(kāi)啟左右開(kāi)啟D D燈或燈或WW燈，以延燈，以延伸燈的運(yùn)用壽命；伸燈的運(yùn)用壽命； 2 2、溶劑瓶中的沙芯過(guò)濾頭容易破碎，在改換流動(dòng)相時(shí)留意、溶劑瓶中的沙芯過(guò)濾頭容