中草藥多糖提取分離純化研究進(jìn)展

1、 綜述中草藥多糖提取分離純化研究進(jìn)展張錦雀,黃麗英3,蘇聰枚(福建醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院,福建福州350004摘要中草藥多糖的生物活性備受關(guān)注,目前常用的提取方法有:常規(guī)水提法、酸提取法、堿提取法、酶提取法、超濾、超聲波、微波、超臨界流體萃取;分離純化技術(shù)有:超濾法、沉淀法、柱層析及色譜法。本文綜述了多糖制備常用的提取與純化工藝與新技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展,分析了它們的原理及優(yōu)缺點(diǎn)并探討了發(fā)展前景。關(guān)鍵詞多糖;提取;分離;純化中圖分類號(hào):R28412文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):100124454(20081121760206基金項(xiàng)目:食品安全分析與檢測(cè)技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室資助項(xiàng)目(福州大學(xué)(FS06002作者簡(jiǎn)介

2、:張錦雀,女,碩士,主要研究方向:珍稀藥材金線蓮中活性成分的分離分析;Tel3通訊作者:黃麗英,女,博士,主要研究方向:天然藥物分離分析;Tel多聚糖(polysaccharide ,簡(jiǎn)稱多糖,常由一百個(gè)以上甚至幾千個(gè)單糖基通過(guò)糖苷鍵連接而成的,其性質(zhì)已大不同于單糖,如甜味和強(qiáng)的還原性已經(jīng)消失,廣泛存在于動(dòng)物細(xì)胞膜和植物、微生物的細(xì)胞壁中,是構(gòu)成生命的四大基本物質(zhì)之一,與生命功能的維持密切相關(guān)。近年來(lái),大量研究表明多糖除了有增強(qiáng)免疫功能、抗腫瘤作用、抗氧化、抗衰老、消化系統(tǒng)保護(hù)作用的生物學(xué)效應(yīng)外,還有抗菌、抗病毒、降血糖、降血脂、抗輻射、抗凝

3、血1等作用。Bendjed 2dou 等2發(fā)現(xiàn)從A nacyclus pyrethrum ,A lpiniagalanga和C itru llus colocynth is 中提取的多糖具有免疫活性作用,Koda ma 等3發(fā)現(xiàn)從Grifola frondosa 中提取的多糖具有抗腫瘤活性,多糖對(duì)這些疑難病癥的治療作用顯示了誘人的前景。隨著多糖的制備、結(jié)構(gòu)、合成、藥理學(xué)及臨床學(xué)研究的不斷深入,多糖藥物將具有更廣闊的前景。1多糖的提取多糖的生物活性倍受關(guān)注,但不少多糖的提取方法和工藝尚未成熟,基于效率、成本多方面的考慮,各種方法的開(kāi)發(fā)、比較、分析是研究工作的焦點(diǎn)之一。目前多糖提取方法主要有溶劑提

4、取法、酸提法、堿提法、酶解法、超濾法、超聲法、微波法、超臨界流體萃取法。首先要根據(jù)多糖的存在形式及提取部位不同,決定在提取之前是否做預(yù)處理:提取時(shí)需注意對(duì)一些含脂較高的根、莖、葉、花、果及種子類,在用水提取前,應(yīng)先加入甲醇或11的乙醇乙醚混合溶液或石油醚進(jìn)行脫脂,而對(duì)含色素較高的根、莖、葉、果實(shí)類,需進(jìn)行脫色處理4。111溶劑提取法溶劑提取法5是從植物中提取多糖的常用方法,它利用多糖不溶于乙醇的性質(zhì)在提取液中加乙醇、甲醇或丙酮使多糖從提取液中沉淀出來(lái),達(dá)到初步純化的目的。溶劑提取法一般遵循相似相溶原則,多糖是極性大分子化合物,應(yīng)選擇水、醇等極性強(qiáng)的溶劑。水提醇沉是現(xiàn)在提取多糖應(yīng)用最多的一種方法

5、,用水作溶劑來(lái)提取多糖時(shí),可以用熱水浸煮提取,也可以用冷水浸提。其工藝成本低,安全,適合工業(yè)化大生產(chǎn),是一種可取的提取方法。李宏燕等6利用水提醇沉提取大棗多糖,得出最佳水提醇沉工藝條件:水提液中加無(wú)水乙醇,使其最終體積分?jǐn)?shù)為70%,室溫靜置5小時(shí),多糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)和得率均較高。但由于水的極性大,容易把蛋白質(zhì)、苷類等溶于水的成分浸提出來(lái),從而使提取液存放時(shí)腐敗變質(zhì),為后續(xù)的分離帶來(lái)困難,且提取效率低和費(fèi)時(shí)7。近年來(lái),伴隨著現(xiàn)代工業(yè)工程技術(shù)的迅猛發(fā)展,一些現(xiàn)代高新技術(shù)不斷應(yīng)用于中草藥多糖的提取。112酸提取法雖然有報(bào)道說(shuō)應(yīng)避免在酸性條件下提取,以防引起糖苷鍵的斷裂8,但有些多糖適合用稀酸提取,如含葡

6、萄糖醛酸等酸性基團(tuán)的多糖,可用乙酸或鹽酸使溶液成酸性再加乙醇,使多糖沉淀析出,能得到更高的提取率。孟憲元等9對(duì)茜草水煮醇沉淀物以5%HCl 和H 2O 提取,發(fā)現(xiàn)組成粘度前者小于后者,由于H +的存在抑制了酸性雜質(zhì)的溶出,稀酸提取法產(chǎn)品純度相對(duì)較高,但在酸性條件下可能引起糖苷鍵斷裂,因此,只在一些特定的多糖提取中占有優(yōu)勢(shì),故目前報(bào)道的并不多,且在操作上要求嚴(yán)格,易對(duì)容器造成腐蝕,故除弱酸外,一般不宜采用。113堿提取法有些多糖在堿液中有更高的提取率,尤其是提取含有糖醛酸的多糖,堿提過(guò)程中防止多糖降解,常通以氮?dú)饣蚣尤肱饸浠c或硼氫化鉀。李平等10用堿提山茱萸多糖,用堿提取、鹽酸中和、減壓濃縮后

7、經(jīng)醇沉、洗滌、真空干燥,得褐色山茱萸粗多糖。多糖堿法提取雖然可提高多糖的收率,且可縮短提取時(shí)間,但提取液中含有其它雜質(zhì)如蛋白質(zhì),粘度過(guò)大,過(guò)濾困難,且有些多糖在堿性較強(qiáng)時(shí)會(huì)水解。114酶提取法酶是生物催化劑,能降低化學(xué)反應(yīng)的活化能,加速反應(yīng),在中草藥多糖的提取過(guò)程中,利用酶促反應(yīng),降低體系中的活化能,使反應(yīng)在較低能量水平上進(jìn)行,在比較溫和的條件中分解植物組織,加速多糖的釋放或提取。陳軍輝11等對(duì)比了回流提取法、微波提取法、超聲提取法、酶解2回流提取法4種方法提取西洋參多糖,得出采用酶解輔助提取西洋參多糖可以明顯提高多糖的提取率。在多糖的提取中,常用的提取酶有蛋白酶、纖維素酶、果膠酶。根據(jù)各種酶

8、在提取過(guò)程中的機(jī)理不同,以及被提取物內(nèi)部組成的差異,常用的提取方法有:單酶法和協(xié)同各種不同酶的作用的復(fù)合酶法。滕利榮等12分析比較了熱水法及復(fù)合酶法W(纖維酶W(果膠酶W(胰酶=221提取百合多糖的工藝及其生物學(xué)活性,發(fā)現(xiàn)復(fù)合酶法能顯著提高百合多糖的提取率,可達(dá)31103%,是熱水法的2185倍,且提取的多糖在體外抗氧化活性顯著高于熱水法提取的多糖。酶提法雜質(zhì)易于去除,縮短提取周期,條件溫和,目標(biāo)產(chǎn)物活性高,產(chǎn)物大多無(wú)毒,極大程度提高了多糖的提取率。但該技術(shù)同時(shí)存在著一定的局限性:酶的最佳溫度及最佳pH值往往在一個(gè)很小的范圍內(nèi),為使酶的活性提高到最大值,必須嚴(yán)格控制酶反應(yīng)時(shí)的溫度及pH值,溫度

9、、pH值等輕微改變和抑制劑(如Cu2+、A l3+、Hg2+等的存在,都可能使酶的活性大大降低,因此對(duì)實(shí)驗(yàn)設(shè)備有較高的要求;酶提取法用于工業(yè)化的中藥提取中還需綜合考慮酶濃度、底物濃度、抑制劑和激動(dòng)劑等對(duì)提取物有何影響13。115超濾法超濾是一種膜分離技術(shù),所采用的超濾膜能夠從水和其他液體中分離出很小的膠體和大分子。由于超濾膜具有不對(duì)稱微孔結(jié)構(gòu),且采用磨擦流道和湍流促進(jìn)結(jié)構(gòu),減少膜污染,使得在分離過(guò)程中大分子溶質(zhì)和微粒隨溶液切向流經(jīng)膜表面,而小分子物質(zhì)和溶劑則在壓力驅(qū)動(dòng)下穿過(guò)致密層上的微孔而進(jìn)入膜另一側(cè),因而超濾膜可以長(zhǎng)期連續(xù)使用并保持較恒定的產(chǎn)量和分離效果14。張雪婷等15對(duì)醇提法和超濾法提取

10、苜蓿多糖進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)超濾法可顯著提高多糖得率,且重復(fù)性好。超濾法分離多糖效率極高,操作簡(jiǎn)便,具有不損害活性、分離效率高、能耗低、設(shè)備簡(jiǎn)單、無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn),適用于分子量相對(duì)較大、且分布范圍較寬,溶液粘度大且不穩(wěn)定的多糖提取。但應(yīng)用前提條件是,必須知道所要分離的多糖的相對(duì)分子量大小,這樣才能有效地選取中空纖維超濾柱截留值的大小。中草藥是膠體、混懸和真溶液的混合體系,在超濾前,必須預(yù)處理以除去有機(jī)膠體、機(jī)械顆粒等雜質(zhì),以降低對(duì)膜的污染16。116超聲提取法超聲提取又稱超聲波萃取、超聲波輔助萃取,是一種物理破碎過(guò)程,其基本原理是利用超聲波輻射產(chǎn)生的空化作用、機(jī)械作用及熱學(xué)作用,其中最重要的是超聲波空化

11、作用,形成高溫和高壓的環(huán)境,增加物質(zhì)分子運(yùn)動(dòng)的頻率和速度、溶劑的穿透力,從而加速目標(biāo)成分進(jìn)入溶劑,提高提取率17。胡斌杰等18利用超聲波法與傳統(tǒng)熱水法提取靈芝多糖發(fā)現(xiàn),超聲波法較傳統(tǒng)熱水法提取時(shí)間縮短3/4,多糖提取率提高30%。徐艷等19比較超聲細(xì)胞粉碎、水煎煮和堿提法分別提取黃芪樣品,比較3種方法獲得的多糖純度,超聲細(xì)胞粉碎提取得到的黃芪多糖含量最高最純。超聲提取可極大地提高提取效率,節(jié)約溶劑,避免高溫對(duì)提取成分的影響,與常規(guī)提取法相比,具有提取時(shí)間短、產(chǎn)率高、無(wú)需加熱等優(yōu)點(diǎn)。值得注意的是超聲時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),否則提取量反而下降,原因可能是由于超聲處理時(shí)間過(guò)長(zhǎng),導(dǎo)致多糖結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,糖鏈斷裂,

12、使多糖提取含量下降20。117微波提取法微波提取法作為一種新型的萃取技術(shù),其原理是由于不同物質(zhì)的消耗不同,對(duì)微波能的吸收程度也不同,由此產(chǎn)生的熱量和傳遞給周圍環(huán)境的熱量也不同。在微波場(chǎng)中,高頻電磁波穿透萃取介質(zhì),由于溶劑及細(xì)胞液吸收微波能,細(xì)胞內(nèi)部溫度迅速升高,壓力增大,當(dāng)壓力超過(guò)細(xì)胞壁的承受能力時(shí),壓力增大使胞壁破裂,位于細(xì)胞內(nèi)部有效成分從細(xì)胞中釋放出來(lái),被溶劑溶解,再通過(guò)進(jìn)一步過(guò)濾和分離便獲得提取物21。顧承志等22運(yùn)用微波技術(shù)輔助測(cè)定紅景天莖中總黃酮和多糖的含量,反應(yīng)時(shí)間縮短了12倍,多糖含量為3157%,黃酮含量為2182%,反應(yīng)速度加快,收率提高。微波提取法具有選擇性高,萃取時(shí)間短,

13、穿透力強(qiáng),加熱效率高、質(zhì)量好、安全無(wú)污染等特點(diǎn),可供選擇的溶劑較多,同時(shí)減少了溶劑的用量。但其也有一定局限性,首先,只適用于對(duì)熱穩(wěn)定的產(chǎn)物,如寡糖、多糖、核酸、生物堿、黃酮、苷類等中藥成分,對(duì)于熱敏性物質(zhì),如蛋白質(zhì)、多肽、酶等,微波加熱容易導(dǎo)致它們變性失活;其次,要求被處理的物料具有良好的吸水性,否則產(chǎn)物難以迅速釋放出來(lái);最后,富含淀粉和/ 或樹膠的天然植物同樣也不適合使用微波干燥,原因是微波干燥很容易使它們變性或糊化,堵塞通道,不利于胞內(nèi)產(chǎn)物的釋放23。118超臨界流體萃取技術(shù)超臨界流體萃取技術(shù)是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種新的提取分離技術(shù),當(dāng)氣體超過(guò)一定的溫度壓力時(shí),便進(jìn)入臨界狀態(tài),此時(shí)的流體成為

14、超臨界流體(如二氧化碳、乙烯、氨、丙烷、水等,應(yīng)用較多的是二氧化碳。超臨界流體兼有氣液兩重性的特點(diǎn),它既具有氣體相當(dāng)高的滲透能力,又有與液體相近的密度和對(duì)物質(zhì)優(yōu)良的溶解能力24。這種溶解能力能夠隨著體系參數(shù)(溫度和壓力而發(fā)生變化,因而可以通過(guò)改變體系的溫度和壓力使被提取物的溶解度發(fā)生變化或用吸附的方法,達(dá)到分離提取的目的25。廖周坤等26采用超臨界CO2萃取法從藏藥雪靈芝中提出了多糖類成分,且多糖收率提高了1162倍。超臨界流體萃取技術(shù)作為一種獨(dú)特、高效、清潔的新型提取、分離手段,具有溶解能力強(qiáng),萃取效率高、保持有效成分的活性、選擇性好、無(wú)殘留溶劑、耗能低、安全無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn),適合于揮發(fā)性較強(qiáng)的

15、成分、熱敏性物質(zhì)和脂溶性成分的提取分離。其缺點(diǎn)是由于糖類的化合物分子量較大、羥基多、極性大,用純二氧化碳提取產(chǎn)率低,加入提攜劑或加大壓力方可提高產(chǎn)率,加上設(shè)備復(fù)雜,運(yùn)行成本高,提取范圍有限使得超臨界萃取應(yīng)用受到限制27。2多糖的除雜質(zhì)211蛋白質(zhì)的去除采用醇沉或其它溶劑沉淀得到的粗多糖中常含有較多的蛋白質(zhì),需要除蛋白。除蛋白的方法傳統(tǒng)上有Sevage法、三氯乙酸法、酶解法、三氟三氯乙烷法等。21111Sevage法:Sevage法是根據(jù)蛋白質(zhì)在氯仿等有機(jī)溶劑中變性的特點(diǎn),將氯仿按多糖水溶液的1/5體積加入,然后用1/5氯仿體積的正丁醇混合后劇烈振搖2030m in成乳化液,蛋白質(zhì)變性成膠狀,離

16、心后除去水層和溶劑層交界處的變性蛋白質(zhì)。此種方法溫和,在避免降解上有較好效果,但多糖得率不高,且氯仿對(duì)人體也有一定毒性,操作時(shí)應(yīng)注意28。利用蛋白酶可水解蛋白質(zhì)的特性,在多糖樣品溶液中加入一些蛋白質(zhì)水解酶如中性蛋白酶和糜蛋白酶,再用Sevage法效果更佳。劉曉紅等29對(duì)金櫻子多糖采用Sevage法、木瓜蛋白酶法、Sevage 法和木瓜蛋白酶法相結(jié)合進(jìn)行脫蛋白研究,發(fā)現(xiàn)兩者相結(jié)合的效果最佳。因此,有機(jī)溶劑與蛋白酶結(jié)合的除蛋白法效率高,可節(jié)省許多試劑和資金。21112三氯乙酸法:三氯乙酸(trichl or oacetic acid,TCA是一種有機(jī)酸,可以使多糖中的蛋白質(zhì)由于有機(jī)酸的作用而變性沉

17、淀,TCA法是在多糖水溶液中滴加3%等體積的三氯乙酸,混勻靜置過(guò)夜,離心除去膠狀沉淀,重復(fù)以上的操作即得無(wú)蛋白質(zhì)的多糖,且可與正丁醇(V/V=110聯(lián)合取得理想的脫蛋白效果30。李瑞等31分別用Sevage法和TCA法去除白花蛇舌草多糖中的蛋白質(zhì),結(jié)果示TCA法除蛋白效果較好,節(jié)約時(shí)間、節(jié)省試劑、多糖損失少,且能去除大量色素。何傳波等32比較Sevage法、T CA 法以及酶法與TCA結(jié)合法對(duì)巴戟天水溶性多糖的脫蛋白效果,結(jié)果顯示經(jīng)過(guò)018%(w/v木瓜蛋白酶處理后加入310%(v/vTCA結(jié)合法進(jìn)行脫蛋白,多糖損失率低,脫蛋白率高。王麗華等33研究姬松茸多糖脫蛋白方法時(shí)發(fā)現(xiàn):三氯乙酸濃度越大

18、,去蛋白質(zhì)效果越好,但當(dāng)三氯乙酸濃度超過(guò)10%時(shí),脫蛋白的效果變化不大,三氯乙酸濃度越大,對(duì)多糖的影響也越大,可能是三氯乙酸對(duì)多糖結(jié)構(gòu)具有破壞作用,使多糖降解,而且這種破壞作用隨著三氯乙酸濃度的增大而增強(qiáng)。21113三氟三氯乙烷法:將1份三氟三氯乙烷加入到1份多糖溶液中攪拌10m in,離心得到水層,再用上述溶劑處理2次即得無(wú)蛋白質(zhì)的多糖溶液,此法效率高,但溶劑沸點(diǎn)較低,易揮發(fā),不宜大量應(yīng)用30。212色素的去除在多糖提取過(guò)程中,由于氧化作用會(huì)有色素生成,色素的存在會(huì)影響多糖的色譜分析和性質(zhì)測(cè)定。常用的脫色方法有:吸附法(DE2 AE纖維素、硅藻土、活性炭等、氧化法(過(guò)氧化氫、離子交換法8。中

19、草藥來(lái)源的多糖,可能含有酚型化合物而顏色較深,這類色素大多呈負(fù)性離子,不能用活性炭吸附劑脫色,可用弱堿性樹脂DE AE2纖維素來(lái)吸附色素,DEAE2纖維柱是最常用的方法,不僅可以達(dá)到脫色的目的,而且可以進(jìn)行多糖的分離。若多糖與色素結(jié)合,易被DEAE纖維素吸附,不能被水洗脫,這類色素可用氧化法脫色,余華34在研究海帶多糖的最佳提取條件中發(fā)現(xiàn):H2O2氧化脫色較吸附脫色好,但溫度不宜過(guò)高,應(yīng)在低溫下進(jìn)行,否則其氧化性易引起多糖的降解。對(duì)于同時(shí)含有游離蛋白質(zhì)和色素的多糖,可通過(guò)生成金屬絡(luò)合物的方法以同時(shí)除去蛋白和色素,方法是加入菲林試劑、氯化銅、氫氧化鋇和醋酸鉛等與多糖生成不溶性絡(luò)合物,經(jīng)分離后用陰

20、離子交換樹脂分解絡(luò)合物得到多糖。王啟為等35在常溫條件下,運(yùn)用強(qiáng)酸性樹脂、強(qiáng)堿性樹脂和弱酸性樹脂組合離子交換法,得到的菊芋提取液透光率較活性炭吸附法高,達(dá)到良 好的脫色效果。3多糖的分離純化311超濾法采用中空纖維超濾膜,對(duì)多糖去蛋白質(zhì)后的提取液通過(guò)超濾去除小分子雜質(zhì)。Marnoch R等36應(yīng)用超濾法純化芥子蛋白。鈕明洋等37成功地應(yīng)用超濾法代替透析法去除海洋真菌多糖提取液中的單糖等小分子雜質(zhì)。張佳38用截流分子量為50000的管式陶瓷膜純化香菇多糖,在超濾溫度40,跨膜壓差0120MPa,流速415ms21的條件下超濾,蛋白質(zhì)去除率為8110%,多糖純度為8917%,收率為7716%。31

21、2沉淀法包括季銨鹽沉淀法和分解沉淀法。季銨鹽及其氫氧化物是一類乳化劑,可與酸性糖形成不溶性沉淀,常用于酸性多糖的分離。當(dāng)溶液的pH值增高或加入硼砂緩沖液使糖的酸度增高,也會(huì)與中性多糖形成沉淀。常用的季銨溴化物(cetyltri2 methyl a mmoniu m br om ide,CT AB及其氫氧化物(cetyl tri m ethyl a mmonium hydr oxi ode,CT A2OH和(certyl pyridiu m hydr oxide,CP2OH,其濃度一般為1%10%(W/V,它們可在酸性、中性、微堿性和堿性中分級(jí)沉淀分離出酸性多糖30。黃民權(quán)等39在提取分離出鐵皮

22、石斛多糖后,將粗多糖溶于熱水,濾去不溶物,濾液用CT AB絡(luò)合精制得精制品。陳海華等40采用CT AB絡(luò)合法分離得到酸性多糖(a2 cidic polysacchar ose,AF M和中性多糖(neutral poly2 sacchar ose,NF M粗制品。李宏燕等41經(jīng)正交試驗(yàn)優(yōu)選出大棗多糖純化工藝為:以體積比為11加入2%(W/V的CT AB35下保溫靜置4h。分解沉淀法是利用多糖在不同濃度的低級(jí)醇或丙酮中具有不同溶解度的性質(zhì)而實(shí)現(xiàn)分離,適合于各種溶解度相差較大的多糖的分離。常在pH7進(jìn)行,酸性多糖在pH24進(jìn)行分離。為了防止糖苷鍵的水解,操作宜迅速。王衛(wèi)國(guó)等42向香菇粗多糖溶液中分

23、別加入一定比例的甲醇,3000r pm離心15m in,分離得到L1、L2、L3三個(gè)組分。313柱層析法31311凝膠柱層析法:常用的凝膠有葡聚糖凝膠(Sephadex和瓊脂糖凝膠(Sephar ose,以不同濃度的鹽溶液和緩沖溶液作為洗脫劑,使各種多糖得以分離純化,但不適宜粘多糖的分離。陳海華等41將酸性多糖(AF M和中性多糖(NF M分別配制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為014%的溶液,利用離子交換柱層析和凝膠柱層析從亞麻籽膠中分離得到AF M21和NF M21純品。陳群等43應(yīng)用Sephadex G2200柱層析純化銀杏白果多糖,得到由D2甘露糖組成的均勻的多糖,分子量為:1186×105。高

24、義霞等44將經(jīng)脫蛋白、脫色后的沙蒿多糖用ultrahydr ogel T M500(718 mm×300mm層析分離純化,011mol/L磷酸緩沖液洗脫,在凝膠色譜中出現(xiàn)單一而對(duì)稱的峰,純化效果好、純度高。31312離子交換柱層析法:離子交換柱層析法常用的交換介質(zhì)有DEAE2纖維素、DEAE2葡萄糖凝膠(DEAE2Sephadex、DE AE2瓊脂糖凝膠(DEAE2Seph2 ar ose,此法適用于分離各種酸性、中性多糖和粘多糖,最常用的是DE AE2纖維素,它一方面可純化多糖,另一方面還可分離各種多糖。洗脫劑可用不同濃度的堿溶液、硼砂溶液、鹽溶液等。高麗君45將實(shí)驗(yàn)得到的白首烏可

25、溶性粗多糖用DE AE2纖維素柱層析,通過(guò)蒸餾水和NaCl溶液梯度洗脫,再通過(guò)透析、濃縮,冷凍干燥得3個(gè)白首烏多糖組分PRCB1、PRCB2、PRCB3,得率分別是3212%、918 %、1319%。孟憲元等9將茜草多糖B用活性炭脫色,水中透析,DEAE2纖維素柱層析,得到淺黃色粉末多糖B。趙宇等46將海蒿子多糖粗品溶于少量蒸餾水中,離心,上清液加入DEAE2Sephadex A2 25層析柱,NaCl溶液梯度洗脫,收集得到兩種均一性多糖。314色譜法色譜法是常用的純化多糖的方法,包括離子交換色譜和凝膠色譜,色譜法是利用填料對(duì)不同種類的糖吸附作用的差異,使混合物中各糖分達(dá)到彼此分離的方法。馬莉

26、等47將DEAE纖維素離子交換色譜柱分離得到的板藍(lán)根多糖粉末用Sephadex G75凝膠色譜柱分離純化,以磷酸緩沖溶液為洗脫流動(dòng)相,得到4種板藍(lán)根均一多糖:PS1、PS2、PS3、PS4。王樟等48用離子交換色譜和凝膠過(guò)濾色譜純化從百合根莖中分離到了水溶性非淀粉多糖。多糖廣泛參與細(xì)胞的各種生命活動(dòng)而產(chǎn)生多種生物學(xué)功能,是非常豐富的資源,多糖的提取分離純化方法在不斷更新,在選取方法時(shí),應(yīng)當(dāng)關(guān)注目標(biāo)多糖的性質(zhì)、特點(diǎn),綜合比較進(jìn)行實(shí)驗(yàn),才能選取最佳的方法和工藝。參考文獻(xiàn)1嚴(yán)金龍,呂志敏1植物多糖的提取分離和應(yīng)用市場(chǎng)1化工科技市場(chǎng),2004,27(11:4124412Bendjeddou D,Lal

27、aoui K,Satta D1I m munosti m ulating ac2tivity of the hot water2s oluble polysaccharide extracts ofA nacyclus pyrethrum,A lpinia galanga and C itrullus colo2cynthis1J Ethnophar macol,2003,88(223:15521601 3Koda ma N,Harada N1A polysaccharide extract fr om GrifolaF rondosa,induces Th21dom inant res po

28、nses in carcinoma2bearing BALB/c m ice1Jpn J Phar macol,2002,90(4: 357236014許燕燕1植物多糖的提取方法和工藝1福建水產(chǎn),2006,(3:3223615黎海彬,李琳,郭遠(yuǎn),等1藥用植物有效成分提取技術(shù)1現(xiàn)代化工,2002,22(5:5926216李宏燕,樊君1大棗多糖的水提醇沉工藝研究1寧夏工程技術(shù),2005,4(3:265226717趙宇,彭曉霞1多糖類化合物提取工藝研究1甘肅科技縱橫,2006,35(2:223222418張曉靜,劉會(huì)東1植物多糖提取分離及藥理作用的研究進(jìn)展1時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2003,14(8:4952

29、49619孟憲元,邢連宗1茜草多糖的提取與分析1北京中醫(yī),2005,24(1:35236110李平1堿提法茱萸多糖的理化性質(zhì)及抗氧化活性研究1中草藥,2003,34(11:9732976111陳軍輝,謝明勇,易秀琴,等1西洋參多糖提取新工藝研究1時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2006,16(10:9772979112滕利榮,孟慶繁,劉培源,等1酶法提取百合多糖及其體外抗氧化活性1吉林大學(xué)學(xué)報(bào),2003,41(4:5382 542113石奇1復(fù)合酶法提取大棗多糖的研究1西北大學(xué)碩士學(xué)位論文,2006114袁龍剛,何云,劉林麗1現(xiàn)代提取分離技術(shù)在食藥用菌多糖分離純化中的應(yīng)用1生物技術(shù)通報(bào),2006,(5:7627

30、9115張雪婷,裴亮1超濾法和醇提法在苜蓿多糖提取中的研究1農(nóng)村經(jīng)濟(jì)與科技,2001,18(1:11421151 16王厚廷,喬善義,楊明,等1超濾法提取六味地黃湯活性多糖的工藝研究1解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào),2001,17(2:69271117鄔方寧1超聲提取技術(shù)在現(xiàn)代中藥中的應(yīng)用1中草藥,2007,38(2:3152316118胡斌杰,陳金鋒,王宮南1超聲波法與傳統(tǒng)熱水法提取靈芝多糖的比較研究1食品工業(yè)科技,2007,28(2:1902192119徐艷,劉冠群1超聲細(xì)胞粉碎提取黃芪多糖1中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2007,14(3:44245120張昌軍,原方圓,邵紅兵1超聲波法在提取多糖類化合物中的應(yīng)用

31、研究1化工時(shí)刊,2007,21(2:542561 21聶金媛1幾種中草藥多糖中活性多糖的提取及分離分析1重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文,2004122顧承志,魯建江,王莉,等1微波提取紅景天莖中總黃酮和多糖及其含量測(cè)定1安徽醫(yī)藥,2004,8(4:2772 278123張代佳,劉傳斌,修志龍1微波技術(shù)在植物胞內(nèi)有效成分提取中的應(yīng)用1中草藥,2000,31(9:附526124金春英,林金清,李雯君1超臨界流體萃取技術(shù)在中藥提取中的應(yīng)用與發(fā)展趨勢(shì)1化學(xué)工程與裝備,2006,(5:40242,36125Charl otta Turner,Jerry W King,Lennart Mathiass on1Upe

32、rcritical fluid extracti on and chr omat ography f or fats oluble vitam in analysis1Journal of Chr omat ography A,2001,936:2152237126廖周坤,楊儒逵1超臨界C O2萃取藏藥雪靈芝中總皂苷及多糖的研究1中草藥,1998,29(9:60126021 27秦竹麗,江元汝1超臨界萃取技術(shù)在生物堿提取中的應(yīng)用進(jìn)展1化工時(shí)刊,2006,20(7:60263128韋巍1多糖的研究進(jìn)展1國(guó)外醫(yī)學(xué)藥學(xué)分冊(cè),2005,32(3:1792184129劉曉紅,肖凱軍1金櫻子粗多糖的脫蛋白

33、研究1食品科技,2007,32(1:1022104130姚新生,吳立軍,吳繼洲,等1天然藥物化學(xué)1第4版1北京:人民衛(wèi)生出版社,2006:102131李瑞,趙浩如,陳乃林1白花蛇舌草多糖除蛋白的方法研究1江蘇中醫(yī)藥,2003,24(10:56257132何傳波,陳玲,李琳,等1巴戟天多糖脫蛋白方法的研究1食品科技,2005,30(6:25227133王麗華,李元瑞,陳懿,等1姬松茸多糖脫蛋白方法的研究1食品科技,2003,28(1:18219,26134余華1海帶多糖最佳提取條件的研究1中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng),2006,(7:32235135王啟為,胡奇林,季陵1離子交換法脫除菊芋提取液中的色素1寧夏

34、工程技術(shù),2003,2(1:45246,491 36Marnoch R,D iesady LL1Pr oducti on of mustard p r otein i2s olates fr om oriental mustard seed(B rass2ica juncea L1Journal of the American O il Che m ists Society,2006,83(1:527137鈕明洋,姚文兵,姚金鳳,等1超濾法在海洋真菌多糖分離純化工藝中的應(yīng)用1中國(guó)生化藥物雜志,2004,25(3:1612162138張佳1香菇多糖提取與純化新工藝1北京化工大學(xué)碩士學(xué)位論文,20

35、07139黃民權(quán),黃布漢,蔡體育,等1鐵皮石斛多糖的提取分離和分析1中草藥,1994,25(3:1282129140陳海華,許時(shí)嬰,王璋1亞麻籽膠中酸性多糖和中性多糖的分離純化1食品與發(fā)酵工程,2004,30(1:962 100141李宏燕,樊君1大棗多糖的提取分離及純化研究1寧夏工程技術(shù),2006,5(2:1452147142王衛(wèi)國(guó),趙永亮,韓山寶,等1香菇多糖分離純化技術(shù)研究1中國(guó)食用菌,2002,21(2:30232143陳群,楊桂文,安利國(guó)1銀杏白果多糖的提取、純化和分析1中國(guó)藥學(xué)雜志,2002,37(5:3312332144高義霞,張繼,姚健,等1沙蒿多糖分離純化和理化分析1西北師范

36、大學(xué)學(xué)報(bào),2007,43(5:942971 Journal of Chinese M edicinal M aterials 31 卷第 11 期 2008 年 11 月 第 45 高麗君 1白首烏可溶性多糖提取工藝 、 分離純化及免 47 馬莉 ,唐健元 ,李祖?zhèn)?, 等 1板藍(lán)根多糖分離純化及其 1765 柏科植物是一種常綠喬木或灌木 , 葉交互對(duì)生 或輪生 ,稀螺旋排列 ,鱗形或刺形 ,異型或單型 ,雌雄 同株或異株 。該科植物對(duì)氣候和土壤有較強(qiáng)的適應(yīng) 葉、 枝均可入藥 ,具有重要的經(jīng)濟(jì)和藥用價(jià)值 , 如以 側(cè)柏葉入藥的方劑早在漢代張仲景金匱要略方 論 中就有記載 1 能力 ,是傳統(tǒng)的優(yōu)

37、良綠化樹種和用材樹種 ,其根 、 、 莖 中也有記載 ,如 晶珠本草 :“ 圓柏子開(kāi)閉 , 解熱 , 3 利肺肝膽病 ,關(guān)節(jié)炎 。刺柏葉清熱 , 治疔瘡 , 炭疽 。 ” 四部醫(yī)典 :“ 刺柏葉 , 解腎熱 , 治炭疽 。現(xiàn)代研 ” 究發(fā)現(xiàn)該科植物主要化學(xué)成分為揮發(fā)油 、 黃酮類化 鞣質(zhì) 、 樹脂 、 無(wú)機(jī)元素等 , 具有止血 、 鎮(zhèn)咳祛痰 、 擴(kuò)張 支氣管 、 抑菌 、 抗腫瘤 、 抗氧化等多種藥理作用 ?，F(xiàn) 將近年來(lái)柏科植物的研究情況綜述如下 。 1 植物分類及藥用植物學(xué)研究 合物 、 萜烯類和酚類化合物 、 有機(jī)酸 、 多糖 、 木脂素 、 22 屬 150 種 ,主要分布在東亞 、 北

38、美西南部 、 澳大利 亞及其周邊群島 。我國(guó)共有 9 屬 30 余種 ,南北均有 分布 4 46 趙宇 ,李俊卿 ,張立新 ,等 1海蒿子多糖 DE I DE II組分 、 摘要 柏科 (Cup ressaceae屬于裸子植物門松杉綱 ,具有止血 、 鎮(zhèn)咳祛痰 、 擴(kuò)張支氣管 、 抑菌 、 抗腫瘤 、 抗氧化等 廣泛的生物活性 ,在采用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)方法的基礎(chǔ)上 ,隨著對(duì)其活性成分及藥理作用研究的深入 ,柏科植物必將具 有更廣闊的應(yīng)用前景 ?，F(xiàn)將近年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)柏科的化學(xué)成分和藥理作用的研究進(jìn)行文獻(xiàn)綜述 ,以期為該科植 物資源的進(jìn)一步研究和開(kāi)發(fā)利用提供較為全面的依據(jù) 。 關(guān)鍵詞 柏科 ; 化學(xué)成分 ; 藥理作用 ; 研究進(jìn)展 柏科 ( Cup ressaceae 屬于裸子植物門松杉綱 ,約 疫功能研究 1山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 , 20041 (9 : 6 2 1 8 2 的分離純 化 及 單 糖 組 成 分 析 1 海 洋 科 學(xué) , 2006, 30 柏科藥用植物研究進(jìn)展 3 高 ,單鳴秋 ,丁安偉 ,張 靜 麗 (南京中醫(yī)藥大學(xué)江蘇省方劑重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 ,江蘇南京 210046 。自