定量測(cè)定體外診斷試劑的線性評(píng)估方案及數(shù)學(xué)操_省略_序的研究_

1、2011.04(下首都醫(yī)藥 CAPITAL MEDICINE11摘要:目的目的 研究制定定量測(cè)定體外診斷試劑的線性評(píng)估方法。方法方法 參考美國(guó)國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)制訂的評(píng)價(jià)方案(EP6-A:定量測(cè)量方法的線性評(píng)價(jià):一種統(tǒng)計(jì)學(xué)方法;批準(zhǔn)指南與國(guó)內(nèi)的有關(guān)法規(guī)及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)相結(jié)合。結(jié)果與結(jié)論結(jié)果與結(jié)論 研究給出了定量測(cè)定體外診斷試劑的線性評(píng)估方法,并對(duì)有關(guān)的數(shù)學(xué)操作程序及統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行了描述。關(guān)鍵詞:體外診斷試劑;線性;評(píng)價(jià)方案線性是定量測(cè)定體外診斷試劑產(chǎn)品的關(guān)鍵指標(biāo),也是產(chǎn)品上市前審批的主要內(nèi)容之一。但目前國(guó)內(nèi)還沒(méi)有體外診斷試劑產(chǎn)品線性評(píng)價(jià)方法的有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)及明確要求。本文通過(guò)參考美國(guó)國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)

2、準(zhǔn)委員會(huì)(National Committee for Clinical Laboratory Standards, NCCLS制訂的評(píng)價(jià)方案(EP6-A,定量測(cè)量方法的線性評(píng)價(jià):一種統(tǒng)計(jì)學(xué)方法;批準(zhǔn)指南(EP6-A:Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures: A Statistical Approach; Approved Guideline,結(jié)合國(guó)內(nèi)的有關(guān)法規(guī)及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn),摸索出定量測(cè)定體外診斷試劑的線性評(píng)估方法,即通過(guò)多項(xiàng)式擬合驗(yàn)證線性偏差是否滿足臨床可允許誤差,進(jìn)而確定產(chǎn)品的線性范圍,在給出線性評(píng)

3、估方法的基礎(chǔ)上,文中也對(duì)有關(guān)的數(shù)學(xué)操作程序及統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行了描述。1 線性評(píng)價(jià)方案線性是指在給定的測(cè)量范圍內(nèi),使測(cè)定結(jié)果與樣本中分析物的量直接成比例的能力。本方案采用多項(xiàng)式法進(jìn)行臨床實(shí)驗(yàn)室定量測(cè)定方法的線性評(píng)價(jià)。多項(xiàng)式線性北京市藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心(100053于泳 薛玲定量測(cè)定體外診斷試劑的線性評(píng)估方案及數(shù)學(xué)操作程序的研究體外診斷試劑產(chǎn)品的系列研究(五評(píng)價(jià)首先假定數(shù)據(jù)組為非線性,并假定在不存在隨機(jī)誤差的情況下,數(shù)據(jù)點(diǎn)正好落于一條直線或曲線上。具體的評(píng)價(jià)方法包括兩部分,第一部分檢驗(yàn)非線性多項(xiàng)式是否較線性多項(xiàng)式與數(shù)據(jù)更為相符。當(dāng)非線性多項(xiàng)式較線性多項(xiàng)式更符合時(shí),進(jìn)行方法的第二部分,

4、評(píng)估最適非線性多項(xiàng)式與線性多項(xiàng)式間的差異是否小于預(yù)先設(shè)定的臨床可允許誤差,同時(shí)對(duì)測(cè)定結(jié)果的精密度進(jìn)行檢驗(yàn),以提高統(tǒng)計(jì)功效。2 線性評(píng)價(jià)方案的總體設(shè)計(jì)2.1 評(píng)估方案的確定2.1.1 要確定樣本類型,為避免基質(zhì)效應(yīng)對(duì)結(jié)果的影響,進(jìn)行線性評(píng)價(jià)時(shí)所選用的樣本應(yīng)與臨床實(shí)驗(yàn)樣本相似,但不可采用含有對(duì)測(cè)定方法具有明確干擾作用的樣本,如溶血、脂血、黃疸或含有某些特定藥物的樣本。理想樣本為分析物濃度接近預(yù)期測(cè)定上限的病人混合血清,可用其他病人樣本將其稀釋為預(yù)定濃度。EP6-A中建議應(yīng)盡可能按以下順序進(jìn)行樣本種類的選擇:病人混合血清;用適當(dāng)稀釋液稀釋的病人血清;添加分析物的病人樣本;用處理過(guò)的低濃度物質(zhì)或處理過(guò)

5、的血清物質(zhì)稀釋的病人血清;商業(yè)質(zhì)控品/校準(zhǔn)品/線性物質(zhì);使用生理鹽水稀釋的樣本;稀釋不足或過(guò)度稀釋的商業(yè)質(zhì)控品;水溶液;其他溶劑的溶液。2.1.2 要確定樣本數(shù)量,EP6-A中針對(duì)不同目的給出了建議的樣本數(shù);建立線性范圍:建議9至11個(gè)濃度,每個(gè)濃度下重復(fù)2至4次;驗(yàn)證內(nèi)部方法或修正方法:建議7至9個(gè)點(diǎn),每個(gè)濃度重復(fù)2至3次;驗(yàn)證線性范圍在實(shí)驗(yàn)室有效:建議5至7個(gè)濃度,S=9S=10S=111:低濃度樣本(L 1:低濃度樣本(L1:低濃度樣本(L2:0.875L+0.125H 2:0.889L+0.111H 2:0.9L+0.1H 3:0.750L+0.250H 3:0.778L+0.222H

6、 3:0.8L+0.2H 4:0.625L+0.375H 4:0.667L+0.333H 4:0.7L+0.3H 5:0.500L+0.500H 5:0.556L+0.4440H 5:0.6L+0.4H 6:0.375L+0.625H 6:0.445L+0.555H 6:0.5L+0.5H 7:0.250L+0.750H 7:0.334L+0.666H 7:0.4L+0.6H 8:0.125L+0.875H 8:0.223L+0.777H 8:0.3L+0.7H 9:高濃度樣本(H9:0.112L+0.888H 9:0.2L+0.8H 10:高濃度樣本(H10:0.1L+0.9H11:高濃度樣

7、本(H續(xù)附表1 樣本配制方案樣本序號(hào)123456789配制2/23/24/25/26/27/29/2(7+9/29附表2 樣本配制方案S=5S=6S=7S=81:低濃度樣本(L 1:低濃度樣本(L 1:低濃度樣本(L 1:低濃度樣本(L 2:0.75L+0.25H 2:0.80L+0.20H 2:0.833L+0.167H 2:0.857L+0.143H 3:0.50L+0.50H 3:0.60L+0.40H 3:0.667L+0.333H 3:0.714L+0.286H 4:0.25L+0.75H 4:0.40L+0.40H 4:0.500L+0.500H 4:0.571L+0.429H 5

8、:高濃度樣本(H 5:0.20L+0.80H 5:0.333L+0.667H5:0.429L+0.571H 6:高濃度樣本(H6:0.167L+0.833H6:0.286L+0.714H 7:高濃度樣本(H7:0.143L+0.857H 8:高濃度樣本(H附表1 樣本配制方案醫(yī)療器械導(dǎo)航2011.04(下首都醫(yī)藥 CAPITAL MEDICINE12 線性為Y = b 0+ b 1X。稱為臨床標(biāo)準(zhǔn)的線性或一階線性。第二種:對(duì)擬合三級(jí)曲線和二級(jí)曲線的b 2或b 3進(jìn)行檢驗(yàn),所對(duì)應(yīng)的Sig0.05,則非線性系數(shù)0;此次最佳擬合不是一級(jí)線性。對(duì)非一級(jí)線性者,須進(jìn)一步計(jì)算最佳擬合曲線與直線的平均差異值

9、(Average deviation from linearity, ADL。如ADL<臨界值, 判定為臨床可接受的非線性,即二階或三階線性。第三種:如ADL>臨界值,判定為臨床不可接受的非線性,即非線性。其中,ADL值可按(210+=Sx b bx p ADL Xx 進(jìn)行計(jì)算,p(x:最佳擬合二階或三階方程的擬合值;b 0+b 1:擬合一階方程的擬合值;S:樣本數(shù);C:總測(cè)量數(shù)據(jù)的平均值C=(S 1+S 2+S 3+S n /n。根據(jù)是否成線性的結(jié)果驗(yàn)證產(chǎn)品的線性范圍。綜上所述,筆者參考EP6-A,通過(guò)對(duì)不同濃度水平樣本的測(cè)試,并進(jìn)行線性評(píng)價(jià)分析,驗(yàn)證產(chǎn)品的線性范圍。文中也對(duì)有關(guān)

10、的數(shù)學(xué)操作程序及統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行了描述,希望可以對(duì)定量測(cè)定體外診斷試劑產(chǎn)品的上市前審批提供一些參考和幫助。參考文獻(xiàn)1 葉應(yīng)撫,王毓三,申子瑜.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程M.第三版.北京:衛(wèi)生部醫(yī)政司,2006,472 顏紅.醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)M.北京:人民衛(wèi)生出版社,2005,103 Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures:A Statistical Approach;Approved Guideline.EP6-A.2003,1(20110222收稿醫(yī)療器械導(dǎo)航每個(gè)濃度重復(fù)2次;應(yīng)注意當(dāng)建立方法的線性范圍時(shí),應(yīng)有2

11、0%到30%的樣本的濃度范圍超出預(yù)期的測(cè)量范圍,但在可接受的線性響應(yīng)范圍內(nèi)。由于EP6-A中也強(qiáng)調(diào)了重復(fù)測(cè)定的次數(shù)應(yīng)足以對(duì)每一濃度的樣品建立可信的評(píng)估。對(duì)于某些分析物,在一定的濃度時(shí)可能需要3-5次重復(fù)測(cè)試,并且明確了對(duì)不同的濃度采取不同的重復(fù)次數(shù)不會(huì)對(duì)系統(tǒng)的評(píng)價(jià)產(chǎn)生不利的影響。因此驗(yàn)證人員可以根據(jù)產(chǎn)品特性對(duì)需要的重復(fù)測(cè)定次數(shù)做出選擇。2.1.3 根據(jù)確定的樣本濃度數(shù)量制備不同濃度水平的樣本。EP6-A的附錄A中給出了5到11個(gè)等間距濃度樣本的參考分配方法(見(jiàn)附表1、續(xù)表1。為了減少因稱量或復(fù)溶樣本時(shí)產(chǎn)生的誤差,筆者也認(rèn)為可以采用將高濃度混合樣本進(jìn)行倍比稀釋的方法,得到等濃度間隔的不同濃度水平樣本,但采用這種方法時(shí)應(yīng)考慮增加高濃度的樣本數(shù)。附表2給出的采用倍比稀釋方法的9個(gè)濃度樣本的參考配制方案,其中9號(hào)樣本為高濃度混合樣本,7號(hào)樣本為9號(hào)樣本倍比稀釋即9號(hào)樣本濃度的1/2,6號(hào)樣本為7號(hào)樣本倍比稀釋,以此類推分別得到5至1號(hào)樣本。為了增加高濃度的樣本數(shù),樣本序號(hào)8的高濃度樣本濃度為序號(hào)7與序號(hào)9樣本濃度之和的一半。2.2 數(shù)據(jù)分析方法 完成方案設(shè)計(jì)后,可對(duì)樣本進(jìn)行測(cè)試,EP6-A建議所有樣本在一次運(yùn)行中或幾次間隔很短的運(yùn)行中隨機(jī)測(cè)定,實(shí)驗(yàn)最好在一天之內(nèi)完成。在對(duì)測(cè)試結(jié)果進(jìn)