子宮內(nèi)膜癌組織中黃體生成素及其受體的表達(dá)意義

1、    子宮內(nèi)膜癌組織中黃體生成素及其受體的表達(dá)意義            作者：時(shí)間：2007-11-22 11:39:00                           

2、                        作者：陳蕾，白宏偉，尹善德，程鸞，趙軍，孫緒德，王藹明【關(guān)鍵詞】  促黃體激素；受體,LH；免疫組織化學(xué)；子宮內(nèi)膜腫瘤Expressions and significances of luteinizing hormone and its receptor in human endometrial cancer

3、【Abstract】AIM:  To study the localization and distribution of luteinizing hormone (LH) and its receptor (LHR) in human endometrial cancer of various differentiation grades. METHODS: LH and its receptor were detected in 15 endometrial cancers by immunohistochemical methods(HE staining, SABC). RE

4、SULTS: LH and its receptor had the same distribution pattern in the tissues of endometrial cancer. The positive signals were mainly located in the membrane and the cytoplasm of adenocarcinoma cells, but not in the nuclei.   The positive intensity was also gradually increased along with the

5、 differentiation from low to highgrade adenocarcinoma （P<0.05）. CONCLUSION:  The endometrioid  adenocarcinoma cells may not only produce LH but express HLR. Their expressions are associated with the differentiation grades of human endometrial cancer.【Keywords】 luteinizing hormone; recep

6、tors, LH; immunohistochemistry; endometrial neoplasms【摘要】 目的： 探討黃體生成素（LH）及其受體（LHR）在不同分化程度的子宮內(nèi)膜腺癌組織中的定位及分布. 方法： 采用常規(guī)組織學(xué)HE染色和免疫組織化學(xué) (SABC)技術(shù)檢測(cè)了子宮內(nèi)膜腺癌組織15例中LH及LHR表達(dá)和分布. 結(jié)果：  LH及LHR在子宮內(nèi)膜腺癌組織中的定位基本一致，陽(yáng)性物質(zhì)主要位于腺癌細(xì)胞的胞膜和胞質(zhì)，胞核未見(jiàn)陽(yáng)性物質(zhì). 隨著分化程度的提高，其免疫反應(yīng)性物質(zhì)的著色也逐漸增強(qiáng)，相鄰各組間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）. 結(jié)論： 子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞既能產(chǎn)生LH，

7、又能表達(dá)LHR，與子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞的分化程度有關(guān). 【關(guān)鍵詞】 促黃體激素；受體，LH；免疫組織化學(xué)；子宮內(nèi)膜腫瘤0引言黃體生成素 (luteinizing hormone, LH)及其受體(LHR)存在于下丘腦垂體腺軸和以外的多種組織1-3，同時(shí)在乳腺、前列腺、子宮和卵巢等發(fā)生的腫瘤細(xì)胞上也有LH的結(jié)合位點(diǎn)，從而對(duì)其進(jìn)行功能調(diào)節(jié)4-6. 子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，也是一種激素依賴(lài)性腫瘤，有研究表明7，子宮內(nèi)膜腺癌組織上有LHR的表達(dá)，然而它是否自分泌LH及LHR的表達(dá)與子宮內(nèi)膜腺癌的分化程度是否相關(guān)，尚未見(jiàn)有報(bào)道. 我們采用免疫組織化學(xué)的方法，研究了不同病理分級(jí)的子宮內(nèi)膜

8、腺癌組織中LH和LHR的表達(dá)，旨在了解LH及其受體的表達(dá)與子宮內(nèi)膜腺癌增殖的關(guān)系， 為進(jìn)一步探討LH在子宮內(nèi)膜癌發(fā)病機(jī)制中的作用提供依據(jù). 1材料和方法1.1材料子宮內(nèi)膜腺癌標(biāo)本15例來(lái)自第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院住院患者，其中高中低分化腺癌各5例（HE染色鑒定），選取同期住院的2例子宮內(nèi)膜增生過(guò)長(zhǎng)的標(biāo)本作陽(yáng)性對(duì)照，所有標(biāo)本用40 g/L甲醛固定24 h，常規(guī)石蠟包埋，制備46 m厚的連續(xù)切片，并貼附于鉻礬明膠的載玻片上. 對(duì)每例腺癌組織切片分別用LH抗體和LHR抗體進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色. 鼠抗人LH mAb購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz 生物試劑公司，工作濃度為11000；兔抗人LHR多克

9、隆抗體和SABC檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自武漢Boster公司，工作濃度為1200；DAB顯色試劑盒均為北京中山公司產(chǎn)品. 1.2方法按武漢Boster公司推薦的SABC染色程序稍加改進(jìn)，具體步驟為：切片經(jīng)二甲苯脫蠟，梯度酒精水化，3 mL/L甲醇雙氧水孵育30 min以滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，10  mmol/L磷酸鹽緩沖液（PBS, pH=7.4）振洗5 min×3；滴加20 mL/L的正常羊血清（用10 mmol/L PBS，pH=7.4配制）封閉背景；棄去封閉血清不洗，分別滴加LH單克隆抗體和LHR多克隆抗體，4冰箱孵育16 h；PBS洗5 min×3；第二抗體為生物

10、素標(biāo)記的羊抗兔IgG(1200稀釋)，室溫孵育2 h；PBS洗5 min×3；滴加SABC復(fù)合物（1100稀釋?zhuān)┦覝胤跤? h； PBS洗5 min×4；DAB顯色，復(fù)染，脫水，透明，中性樹(shù)膠封片. 分別用正常羊血清和10 mmol/L PBS取代第一抗體進(jìn)行孵育作替代對(duì)照和空白對(duì)照. 采用Q500圖象分析系統(tǒng)（美國(guó)Leica公司），對(duì)不同分化程度的子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞LH及其受體免疫反應(yīng)性物質(zhì)的相對(duì)含量進(jìn)行測(cè)定，光鏡下每例隨機(jī)測(cè)10個(gè)細(xì)胞，每組測(cè)50個(gè)細(xì)胞，并計(jì)算出每個(gè)細(xì)胞LH及其受體免疫反應(yīng)性物質(zhì)相對(duì)含量.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：  實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用x±s表示，組間比較

11、采用方差分析. 2結(jié)果2.1LH及LHR的分布LH及LHR免疫反應(yīng)陽(yáng)性產(chǎn)物呈棕褐色細(xì)顆粒狀，二者在胃癌組織中的定位分布區(qū)域基本一致. 對(duì)于子宮內(nèi)膜增生過(guò)長(zhǎng)，陽(yáng)性物質(zhì)主要位于腺細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，細(xì)胞核陰性，(圖1A,B)；對(duì)于子宮內(nèi)膜癌，陽(yáng)性物質(zhì)主要位于腺癌細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，細(xì)胞核是陰性的，隨著分化程度的提高，其免疫反應(yīng)性物質(zhì)的著色也逐漸增強(qiáng)，相鄰各組間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）. 陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)均為陰性(圖24).圖1子宮內(nèi)膜增生過(guò)長(zhǎng)LH和LHR表達(dá)略2.2LH及LHR免疫反應(yīng)量LH及LHR的相對(duì)含量，隨著分化程度的增加而增加的趨勢(shì)，相鄰各組間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05，表1

12、）.圖2圖4略表1子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞LH和LHR免疫反應(yīng)性物質(zhì)的含量 (略)3討論 LH早在1938年首次由HaHtman和Benz報(bào)導(dǎo)為腺垂體分泌的一種糖蛋白激素，并在1967年首次被分離成, 兩個(gè)亞基. 隨著研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)LH及其受體，既可存在于正常的乳腺8、前列腺9、頜下腺10等組織，又可存在于一些惡性腫瘤組織4-6，并對(duì)其功能進(jìn)行調(diào)節(jié). 我們采用免疫組織化學(xué)的方法，發(fā)現(xiàn)人子宮內(nèi)膜腺癌組織中有LH的分布，且LH與LHR均定位于子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞的胞質(zhì)和（或）胞膜，胞核未見(jiàn)陽(yáng)性信號(hào)，二者的分布范圍大致相同. 在子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞中同時(shí)檢測(cè)出LH及其受體，說(shuō)明子宮內(nèi)膜腺癌具有自分泌

13、LH的功能，它可能通過(guò)局部作用來(lái)調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞的功能，當(dāng)然這還有待于進(jìn)一步的LH及其受體mRNA的檢測(cè)來(lái)加以證實(shí). 我們的試驗(yàn)結(jié)果還顯示，人子宮內(nèi)膜腺癌組織中LH及其受體表達(dá)的陽(yáng)性物質(zhì)的含量與子宮內(nèi)膜癌的分化程度有一定的關(guān)系. 子宮內(nèi)膜腺癌分化程度越好，陽(yáng)性物質(zhì)的含量越高；反之，分化越差，陽(yáng)性物質(zhì)的含量越低. 子宮內(nèi)膜高分化腺癌的陽(yáng)性物質(zhì)含量最高，中分化腺癌次之，低分化腺癌最低，統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)差異顯著. 子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞表達(dá)LH及其受體的具體意義尚不清楚，這可能與GnRH及性激素依賴(lài)性腫瘤細(xì)胞的發(fā)生和增殖調(diào)控有關(guān). 研究資料表明11，GnRH類(lèi)似物或拮抗劑已被用于這類(lèi)腫瘤患者的臨床治療，其抑制作用可達(dá)44%，特別是在體外GnRH不能直接作用于內(nèi)膜癌細(xì)胞，其作用的發(fā)揮主要是通過(guò)LH，而不是FSH. 也有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)12，在內(nèi)膜癌發(fā)生的過(guò)程中，LH還可以促進(jìn)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞向子宮肌層的侵襲，其作用途徑是通過(guò)激活蛋白激酶A（PKA）來(lái)實(shí)現(xiàn)的，因此在治療子宮內(nèi)膜癌時(shí)，建議應(yīng)用抑制LH分泌的藥物，即GnRH類(lèi)似物或拮抗劑. 我們的研究結(jié)果結(jié)合上述已有的試驗(yàn)結(jié)果，作者認(rèn)為