表面擦拭微生物限度檢查法回收率實驗方案

1、湖北天圣康迪制藥 GMP文件文件名稱外表擦拭微生物限度檢查法回收率實驗方案文件編碼：共4頁制定人審核人批準人制定日期年 月曰審核日期年 月曰批準日期年 月曰頒發(fā)部門質(zhì)管部頒發(fā)數(shù)量2份生效日期年 月曰分發(fā)部門及數(shù)量質(zhì)管部、QC各 1份外表擦拭微生物限度檢查法回收率實驗方案1.目的對外表擦拭微生物限度檢查法回收率進行驗證，確認所采用的方法適合于供試品的微 生物限度檢查。2范圍本方案適用于外表擦拭微生物限度檢查法回收率的驗證。3. 職責質(zhì)管部負責驗證方案起草、組織實施、起草驗證報告及送審4. 驗證過程4.1驗證用菌種：所用菌種表1菌種名稱編號來源大腸埃希菌【CMC(B) 44103 】金黃色葡萄球菌

2、【CMC( B) 26003 】白色念珠菌【CMC(F) 98001 】枯草芽孢桿菌【CMC(B) 63501 】菌株選擇的原那么：代表性，普遍性，低或非致病性，標準菌株菌種的要求：不得超過5代。采用適宜的方法保存。4.1.4 加菌量：50100cfu。4.2菌液的制備湖北天圣康迪制藥取經(jīng)37C培養(yǎng)18-24小時，大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽抱桿菌肉湯培養(yǎng) 物1ml加9ml生理鹽水10倍稀釋至10-510-7，為50100個/ml，做活菌計數(shù)備用。取經(jīng)25C培養(yǎng)18-24小時的白色念珠菌霉菌液體培養(yǎng)物 1ml加9ml生理鹽水10倍 稀釋至10-510-6，為50100個/ml，做活菌計數(shù)

3、備用。4.3回收率的測定：將經(jīng)滅菌的開孔面積為20cm的金屬模板放在試驗物體外表，分別向無菌物體表 面接種1ml金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌和枯草芽抱桿菌的菌懸液，接種面 積為20cm，并在層流下進行枯燥。驗證結(jié)束后用75%勺酒精擦洗染菌外表。取無菌棉簽用0.9%無菌氯化鈉溶液稍沾濕,在板孔范圍內(nèi)擦抹5次，換1無菌棉簽 同法再擦抹5次，2支棉簽共擦抹10次，然后剪去手接觸局部棉棒，將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內(nèi)。搖勻取 1mL倒平板，每次倒三個平板。分別培養(yǎng)計數(shù)。用同樣的方法重復(fù)操作三次。試驗要進行三次獨立操作，每次試驗的回收率要?70%方可認為該方法適宜。4.4回收率計

4、算試驗結(jié)果下表，棉簽擦拭法的結(jié)果是每次試驗三個平板的平均菌落數(shù)再乘以稀釋倍數(shù)(10)。金黃色葡萄球菌試驗結(jié)果金黃色葡萄球菌試驗結(jié)果表2實驗次數(shù)1號平皿2號平皿3號平皿平均菌落數(shù)檢測結(jié)果123根據(jù)表中的數(shù)據(jù)，回收率計算如下表 3:實驗次數(shù)菌液組菌落數(shù)實驗組菌落數(shù)回收率(%平均回收(%范圍123符合要求不符合要求檢查人 日期 復(fù)核人 日 期 442大腸埃希菌試驗結(jié)果大腸埃希菌試驗結(jié)果表4實驗次數(shù)1號平皿2號平皿3號平皿平均菌落數(shù)檢測結(jié)果123根據(jù)表中的數(shù)據(jù)，回收率計算如下表 5：實驗次數(shù)理論菌總數(shù)檢測結(jié)果回收率%平均回收%范圍123符合要求不符合要求檢杳人日期復(fù)核人日期白色念珠菌試驗結(jié)果白色念珠菌試驗結(jié)果表6實驗次數(shù)1號平皿2號平皿3號平皿平均菌落數(shù)檢測結(jié)果123根據(jù)表中的數(shù)據(jù)，回收率計算如下表 7：符合要求湖北天圣康迪制藥不符合要求實驗次數(shù)理論菌總數(shù)檢測結(jié)果回收率%平均回收%范圍123檢查人 日期 復(fù)核人 日 期 444枯草芽抱桿菌試驗結(jié)果枯草芽抱桿菌試驗結(jié)果表8實驗次數(shù)1號平皿2號平皿3號平皿平均菌落數(shù)檢測結(jié)果123根據(jù)表中的數(shù)據(jù)，回收率計算如下表 9:實驗次數(shù)理論菌總數(shù)檢測結(jié)果回收率%平均回收%范圍123符合要求不符合要求日期 日期 日期 日期 日期： 年 月 日檢查人 復(fù)核人 4.5方法確認結(jié)論符合要求不符