基因工程課件4——實(shí)驗(yàn)3：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)

1、安徽大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求安徽大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院Contents 一一、實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 二二、實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料 三三、實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 四四、預(yù)期結(jié)果預(yù)期結(jié)果 五五、注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)安徽大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院一、實(shí)驗(yàn)原理一、實(shí)驗(yàn)原理安徽大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院1、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)簡(jiǎn)介、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)簡(jiǎn)介安徽大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院2、PCR技術(shù)基本原理及特點(diǎn)技術(shù)基本原理及特點(diǎn)安徽大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院PCR反應(yīng)循環(huán)示意圖反應(yīng)循環(huán)示意圖533594 94 高溫變性高溫變性雙鏈雙鏈DNADNA分離出分離出2 2條條單鏈單鏈DNADNA分子分子53 53 低溫退火低溫退火5335一對(duì)特異性引物分一對(duì)

2、特異性引物分別結(jié)合到兩條單鏈別結(jié)合到兩條單鏈模板模板DNADNA上。上。上游引物上游引物下游引物下游引物72 72 適溫延伸適溫延伸5335在在DNADNA聚合酶的作用聚合酶的作用下，下，dNTPsdNTPs從引物從引物33端開始參入，并沿著端開始參入，并沿著模板從模板從55向向33方向方向延伸，合成出新生的延伸，合成出新生的DNADNA互補(bǔ)鏈。互補(bǔ)鏈。1個(gè)分子個(gè)分子2n個(gè)分子個(gè)分子n個(gè)循環(huán)安徽大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院20個(gè)循環(huán)個(gè)循環(huán)安徽大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院3、一個(gè)個(gè)典型反應(yīng)應(yīng)的反應(yīng)應(yīng)體系系及程序參數(shù)參數(shù)介紹紹安徽大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院安徽大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院4、DNA聚合酶聚合酶安徽大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院安徽大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院5、寡核苷苷酸引物的設(shè)計(jì)設(shè)計(jì)安徽大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院安徽大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院安徽大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院二、實(shí)驗(yàn)材料二、實(shí)驗(yàn)材料安徽大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院三、實(shí)驗(yàn)步驟三、實(shí)驗(yàn)步驟用手指在管壁上輕彈幾下，混勻上述反應(yīng)混合物，高速離心機(jī)離心用手指在管壁上輕彈幾下，混勻上述反應(yīng)混合物，高速離心機(jī)離心10 s，使反，使反應(yīng)液集中在管底。應(yīng)液集中在管底。安徽大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院30個(gè)循環(huán)個(gè)循環(huán)安徽大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院安徽大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院四、預(yù)期結(jié)果四、預(yù)期結(jié)果500030002000