植物生物技術(shù)考試重點(共11頁)

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上植物生物技術(shù)考試重點1、 生物技術(shù)？現(xiàn)代生物技術(shù)主要包括哪幾個方面的技術(shù)？生物技術(shù)(biotechnology)，也稱生物工程, 是指以現(xiàn)代生命科學為基礎(chǔ),結(jié)合先進的工程技術(shù)手段和其他基礎(chǔ)科學的科學原理, 按照預先的設(shè)計改造生物體或加工生物原料, 為人類生產(chǎn)出所需要的產(chǎn)品或達到某種目的的一系列技術(shù)。先進的工程技術(shù)：基因工程、細胞工程、酶工程、發(fā)酵工程和蛋白質(zhì)工程等新技術(shù)。改造生物體：獲得優(yōu)良的動植物品種。為人類生產(chǎn)所需的產(chǎn)品：食品、醫(yī)藥、能源、原料等。生物技術(shù)的產(chǎn)生以DNA重組技術(shù)的建立為標志?，F(xiàn)代植物生物技術(shù)包括：植物組織培養(yǎng)技術(shù)、人工種子技術(shù)、細胞工程技術(shù)、基因工

2、程技術(shù)。2、 什么是胚培養(yǎng)？有什么意義？ 無菌條件下將胚從胚珠或種子中分離出來，置于培養(yǎng)基上進行離體培養(yǎng)的方法。意義：克服遠緣雜交不親和性和雜種不育性，獲得種間或?qū)匐s種。種間或?qū)匐s交中，受精作用能正常完成，胚也能進行早期的發(fā)育，但由于胚乳發(fā)育不良，雜種胚最終將夭折，因而不能形成有發(fā)芽能力的種子。3、 什么是基本培養(yǎng)基？ 僅能滿足微生物野生型菌株生長需要的培養(yǎng)基4、 什么是轉(zhuǎn)基因沉默？5、 什么是逆轉(zhuǎn)錄酶？6、植物組織培養(yǎng)？ 將植物的離體器官（如根、莖、葉、花、果實、種子等）、組織（如花藥、胚珠、形成層、皮層、胚乳等）、細胞（如體細胞、生殖細胞花粉等）以及去除細胞壁的原生質(zhì)體，甚至幼小的植株，在

3、人工控制的無菌環(huán)境下，應用人工培養(yǎng)基創(chuàng)造適宜的培養(yǎng)條件，使其生長、分化并成長為完整植株的過程。也稱為離體培養(yǎng)或試管培養(yǎng)。7、 愈傷組織的形成的過程？8、愈傷組織的定義和特點？ 愈傷組織（Callus）：離體的植物器官、組織或細胞，在培養(yǎng)一段時間以后，通過細胞分裂，形成一種高度液泡化、無定形狀態(tài)、由薄壁細胞組成的排列疏松的組織。 細胞分裂快，結(jié)構(gòu)疏松，顏色淺而透明9、闡述外植體的成苗途徑。10、植物組織培養(yǎng)常用的培養(yǎng)基及各自的特點？ 據(jù)其營養(yǎng)水平分：基本培養(yǎng)基、完全培養(yǎng)基 據(jù)其態(tài)相分： 固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基 據(jù)其作用分：誘導培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基 據(jù)培養(yǎng)物的培養(yǎng)過程分：初代培養(yǎng)基、繼代

4、培養(yǎng)基 組織培養(yǎng)中常用的培養(yǎng)基主要有：MS、White、N6、B5、Heller、Nitsch、Miller、KM-8P 培養(yǎng)基種類 固體培養(yǎng)基：加凝固劑（多為瓊脂）的培養(yǎng)基； 液體培養(yǎng)基：不加凝固劑的培養(yǎng)基。 初代培養(yǎng)基：用來第一次接種從植物體上分離下來的外植體的培養(yǎng)基。 繼代培養(yǎng)基：用來接種繼初代培養(yǎng)之后的培養(yǎng)物的培養(yǎng)基。 基本培養(yǎng)基：只含有機和無機成分，但不包括糖、激素和復雜有機添加物等。 完全培養(yǎng)基：基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，根據(jù)試驗的不同需要，附加一些物質(zhì)，如植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)和其它復雜有機附加物等。 2、培養(yǎng)基的特點 MS培養(yǎng)基-大量元素。 特點：無機鹽的濃度高，具有高含量的氮、鉀，尤其硝

5、酸鹽的用量很大，同時還含有一定數(shù)量的銨鹽，這使得它營養(yǎng)豐富，不需要添加更多的有機附加物，就能滿足植物組織對礦質(zhì)營養(yǎng)的要求，有加速愈傷組織和培養(yǎng)物生長的作用，當培養(yǎng)物久不轉(zhuǎn)移時仍可維持其生存。 White(WH)培養(yǎng)基。 特點：無機鹽濃度較低。它的使用也很廣泛，無論是生根培養(yǎng)還是胚胎培養(yǎng)或一般組織培養(yǎng)都有很好的效果。 N6 培養(yǎng)基。 特點：KNO3和(NH4)2SO4含量高，不含鉬。目前在國內(nèi)已廣泛應用于小麥、水稻及其他植物的花粉和花藥培養(yǎng)和組織培養(yǎng)。 B5 培養(yǎng)基。 特點：含有較低的銨鹽，較高的硝酸鹽和鹽酸硫胺素。銨鹽可能對不少培養(yǎng)物的生長有抑制作用，但它適合于有些植物如雙子葉植物特別是木本植

6、物的生長。 KM-8P 培養(yǎng)基。 特點：特點是有機成分較復雜, 它包括了幾乎所有的單糖和維生素、呼吸代謝中的主要有機酸。主要用于原生質(zhì)體培養(yǎng)。 固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基： 固體培養(yǎng)基：使用簡便，一般用于組織、愈傷組織、短枝、莖尖等材料的培養(yǎng)。特別適合植物的快速繁殖。 缺點：一塊外植體只能部分接觸培養(yǎng)基，不能浸沒在培養(yǎng)基中，結(jié)果培養(yǎng)物上下部因接受養(yǎng)分不勻而形成差異，不易使細胞群體保持一致。液體培養(yǎng)基(不加瓊脂)：提供比較均勻的營養(yǎng)，而且細胞的增殖速度快，一般用于細胞，原生質(zhì)體的培養(yǎng)，也可用于愈傷組織的培養(yǎng)，胚狀體等材料的繼代培養(yǎng)。11、植物組織培養(yǎng)室需要控制的條件。溫度：大多數(shù)植物組織培養(yǎng)溫度在2

7、327之間。低于15時培養(yǎng)，植物組織會表現(xiàn)生長停止，高于35時對植物生長不利。不同植物培養(yǎng)的適溫不同。月季是2527、番茄是28。溫度不僅影響植物組織培養(yǎng)育苗的生長速度，也影響其分化增殖以及器官建成等發(fā)育進程。如煙草芽的形成以28為最好，在12以下，33以上形成率皆最低。 光照：主要表現(xiàn)在光照強度、時間長短、光照質(zhì)量等。有的材料培養(yǎng)需要光，有的則不需光；不同的植物所需的光照強度也不一樣。一般1000-5000Lx/12-16h/天。 濕度：濕度影響包括培養(yǎng)容器內(nèi)濕度和環(huán)境濕度。容器內(nèi)濕度水平主要受培養(yǎng)基水分含量和封口材料的影響。封口材料直接影響容器內(nèi)濕度情況。封閉性差的材料易導致培養(yǎng)基干燥；封

8、閉性高的封口材料易引起透氣性不好。濕度過低會使培養(yǎng)基喪失大量水分，導致培養(yǎng)基各種成分濃度的改變和滲透壓的升高，進而影響組織培養(yǎng)的正常進行。濕度過高時，易引起棉塞長霉，造成污染。 氣體環(huán)境: 氧氣是組織培養(yǎng)中必需的因素，瓶蓋封閉時要考慮通氣問題，可用附有濾氣膜的封口材料。通氣最好的是棉塞封閉瓶口，但棉塞易使培養(yǎng)基干燥，夏季易引起污染。固體培養(yǎng)基可加進活性炭來增加通氣度，以利于發(fā)根。培養(yǎng)室要經(jīng)常換氣，改善室內(nèi)的通氣狀況。液體振蕩培養(yǎng)時，要考慮振蕩的次數(shù)、振幅等，同時要考慮容器的類型、培養(yǎng)基等。 12、 植物組織培養(yǎng)最常用的C源、常用的激素及其作用和濃度？蔗糖 2%5% 作為植物生長發(fā)育所需的營養(yǎng)物

9、質(zhì)和調(diào)節(jié)培養(yǎng)基中的滲透壓生長素 誘導細胞分裂和根的分化細胞分裂素 促進細胞分裂和由愈傷組織形成器官，分化不定芽赤霉素 刺激在培養(yǎng)中形成的不定胚發(fā)育成小植株油菜素內(nèi)酯 促進伸長 提高植物內(nèi)源生長素乙烯 促進RNA和蛋白質(zhì)合成和使細胞膜透性增加脫落酸 抑制外植體形成體細胞胚狀體13、植物組織培養(yǎng)中培養(yǎng)基配制過程中應注意的環(huán)節(jié)？ 培養(yǎng)基的配制：準備工作、母液的配置和保存、培養(yǎng)基配置、培養(yǎng)基的滅菌 配制母液時要用蒸餾水或重蒸餾水。藥品應選取等級較高的化學純或分析純。各種藥品要充分溶解再依次混合.配制時注意一些離子之間易發(fā)生沉淀(如Ca2+和S042-)。鐵鹽容易發(fā)生沉淀，需單獨配制。 培養(yǎng)基的配制注意

10、事項： 1、溶解特征：大量元素易沉淀； 2、標簽（濃度、日期） 3、保存期：發(fā)現(xiàn)沉淀不能用。 培養(yǎng)基的配制步驟： 1、將配制好的母液按順序排列， 2、列表計算各母液用量 3、先取適量的蒸餾水放入容器，再依次加入母液 4、加入肌醇和蔗糖，定容后調(diào)pH 5、加入瓊脂，煮開至完全溶解 6、分裝到組培容器 7、封口，貼標簽14、 植物組織培養(yǎng)的理論依據(jù)？植物細胞全能性組織培養(yǎng)的生理依據(jù)：激素（植物生長調(diào)節(jié)劑）調(diào)控15、植物組織培養(yǎng)技術(shù)在目前農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的應用？1 育種上的應用: 單倍體育種：快速純化個體，縮短育種年限， 提高育種效率等作用。遠緣雜交：克服雜交不親和性，用于植物的遠緣雜交；體細胞雜交；胚珠

11、培養(yǎng)。體細胞變異的應用：果樹苗木等。單細胞突變體的篩選：抗性育種。2 種子繁育與生產(chǎn)： 快速繁育：蘭花、香蕉、甘蔗、咖啡等。 獲得脫毒植株，提高種性：病毒可通過維管束傳遞，莖尖細胞分裂很旺，幾乎沒有病毒， 如土豆。 人工種子：不受氣候影響，苜蓿、芹菜、胡蘿卜等。3 植物產(chǎn)品的工廠化生產(chǎn)： 喜樹的喜樹堿（抗癌），人參皂苷，香料植物的香油精。4 種質(zhì)資源的保存： 對于難于產(chǎn)生種子，種子不易保存，或珍稀的植物。 番薯的塊根保存很難，可以取其莖尖進行組織培養(yǎng)，進行保存。16、 簡述植物組織無菌培養(yǎng)的一般步驟？ 外植體表面消毒：將外植體置于有螺絲蓋的玻璃瓶中, 注入含有幾滴活化劑的濃度適當?shù)南疽? 使

12、材料完全浸沒在消毒液中, 蓋上蓋, 把玻璃瓶置入超凈工作臺。消毒期間搖動 2-3 次, 使消毒液充分接觸植物組織。 消毒處理后, 打開瓶蓋, 倒出消毒液, 注入適量的無菌蒸餾水, 再蓋上蓋, 搖動數(shù)次, 將水倒掉如此重復 34 次。 將材料取出, 置于一個已經(jīng)滅菌的培養(yǎng)皿中。 器械消毒：將所要使用的器械 (如解剖刀、鑷子、剪刀等) 置入 95 % 乙醇中, 取出后于酒精燈火焰上灼燒, 待冷卻后即可使用。所有操作器械需使用一次, 消毒一次。 用這些消過毒的將已經(jīng)過表面消毒的材料切取或剝?nèi)∵m當?shù)耐庵搀w。o 將培養(yǎng)容器的蓋或塞子打開,將外植體接種到培養(yǎng)基上,如果使用的是玻璃培養(yǎng)容器,把瓶口置酒精燈火

13、餡上烘烤數(shù)秒鐘,然后迅速用瓶蓋或瓶塞封嚴。17、與整體植物相比，植物離體組織有哪些特點？ 整體植物不同的器官具有明顯的分工，只要有水和無機鹽就可以完成整個生命過程。離體組織與植株沒有了物質(zhì)、能量和信息的交流，從而： 1、生長發(fā)育不受植株的控制，可以脫離原來的發(fā)育路線； 2、得不到生長發(fā)育所需要的培養(yǎng)，從自養(yǎng)變成異樣。 3、所需要的營養(yǎng)與活體組織所需要的營養(yǎng)具有很大的差別。能量來源（碳源）；有機成分、激素等。18、簡述激素在植物組織離體培養(yǎng)過程中的作用？19、常用的PCR技術(shù)有哪些？20、PCR反應的條件？21、PCR反應中關(guān)鍵的試劑有哪些？22、什么是離體授粉？23、柯斯質(zhì)粒？24、載體的種類

14、以及載體應具備的特性？25、質(zhì)粒載體構(gòu)建的基本原則，以及質(zhì)粒載體的一般生物學特性？26、噬菌體的特征？什么是溶菌周期，什么是溶源周期？27、同源基因的共抑制效應？28、基因克隆操作中常用的工具酶種類？29、基因克隆的本質(zhì)以及基因克隆主要包括哪些內(nèi)容？30、簡述植物基因組文庫構(gòu)建的一般步驟以及構(gòu)建原則？31、什么是轉(zhuǎn)基因育種？轉(zhuǎn)基因育種有哪些特點？32、理想的植物受體系統(tǒng)應符合的條件33、根據(jù)你的理解詳細說明農(nóng)桿菌介導的轉(zhuǎn)基因技術(shù)（包括土壤農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒轉(zhuǎn)化系統(tǒng)和發(fā)根農(nóng)桿菌Ri質(zhì)粒轉(zhuǎn)化系統(tǒng)）有哪些優(yōu)點？34、以水稻為例詳細介紹農(nóng)桿菌介導的轉(zhuǎn)基因技術(shù)的具體操過程?35、外源基因整合到植物染色體上的

15、主要的分子鑒定方法？36、轉(zhuǎn)基因檢測可以從哪些方面進行檢測，具體的檢測原理是什么？植物基因工程理論上的三大發(fā)現(xiàn)： DNA為遺傳信息的攜帶者。 DNA的雙螺旋模型和半保留不不連續(xù)復制機制。 中心法則和操縱子模型。植物基因工程技術(shù)上的三大發(fā)明： DNA體外切割與連接技術(shù)。 基因工程載體的使用。 DNA分析技術(shù)：電泳、測序、雜交技術(shù)?；蚬こ痰亩x：用人工的方法，從不同生物中提取外源基因及載體DNA，經(jīng)過體外切割、拼接和重組，然后采取某種方法，把重組后的帶有外源基因的載體DNA引入植物細胞，并使其在植物細胞內(nèi)進行復制和表達，以達到預期改變受體植物細胞遺傳特性的目的。它的核心是重組DNA技術(shù)。也稱：遺

16、傳工程，基因操作，基因克隆，分子克隆?；蚬こ痰纳a(chǎn)應用： 克服遠緣雜交（有性雜交）的困難。 1、使基因在動物、植物，微生物不同生物系統(tǒng)中傳遞。 2、快速、定向的獲取人類所需要的生物新類型。 細胞工程的定義： 利用細胞培養(yǎng)、細胞融合等細胞生物學方法對細胞進行改造，使細胞按人類需要生產(chǎn)有用的產(chǎn)品，或者遺傳物質(zhì)，從而培育新的生物類型。包括：細胞雜交技術(shù)、單克隆抗體、細胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)。 細胞工程的應用-原生質(zhì)體融合植物組織培養(yǎng)室設(shè)計： 準備室（培養(yǎng)基室） 接種室（無菌操作） 培養(yǎng)室（控制溫光） 細胞室（細胞研究）培養(yǎng)基的成分:水、無機鹽、有機成分、植物生長調(diào)節(jié)劑、碳源、凝固劑及其它附加物1、 無機

17、營養(yǎng) 無機物中有16種是植物必須的，即C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S、Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl。 I 雖然不是植物必需元素，但幾乎所有的培養(yǎng)基中都添加I。 植物所需要的濃度大于0.5mmol/L的元素為大量元素，小于0.5mmol/L的元素為微量元素。缺氮：表現(xiàn)出一種很注目的花色素苷的顏色，愈傷組織不能形成導管； 缺鉀或磷：細胞過度生長，形成層組織減退； 缺硫：愈傷組織褪綠； 缺鐵：細胞分裂停止； 缺硼：細胞分裂停滯，細胞伸長；而缺錳銅則會影響細胞伸長。2、 有機成分-氨基酸 氨基酸是蛋白質(zhì)的組成成分，也是一種有機氮化合物。 常用的有甘氨酸、谷氨酸、精氨酸、絲氨酸、丙氨酸

18、、半胱氨酸以及多種氨基酸的混合物（如水解酪蛋白、水解乳蛋白）等。有機氮作為培養(yǎng)基中的惟一氮源時，離體組織生長不良，只有在含有無機氮的情況下，氨基酸類物質(zhì)才有較好的效果。 有機成分 - 維生素類能明顯地促進離體組織的生長。培養(yǎng)基中的維生素主要是B族維生素，如硫胺素（維生素B1）、吡哆醇（維生素B6）、煙酸（維生素B3，又稱維生素PP）、泛酸（維生素B5）、生物素（維生素H）、鈷胺素（維生素Bl2）、葉酸（維生素B11）、抗壞血酸（維生素C）等。 有機成分 - 天然有機物 有機附加物包括有些成分尚不清楚的天然提取物，如椰乳(CM)、香蕉泥、番茄汁(TJ)、馬鈴薯泥、蘋果汁、生梨汁、西瓜汁、酵母提取

19、液（YE）、麥芽浸出物（ME）等。 有機成分 - 肌醇 肌醇：環(huán)己六醇，幫助活性物質(zhì)作用 其他：單核苷酸等。 3、碳 源糖在植物組織培養(yǎng)中是不可缺少的。它不但作為離體組織賴以生長的碳源，且還能使培養(yǎng)基維持一定的滲透壓（一般培養(yǎng)基滲透壓維持在1.54.1MPa）。滲透壓對細胞的增殖和胚狀體的形成都有十分明顯的影響。一般多用蔗糖調(diào)節(jié)滲透壓，其濃度為15，也可用麥芽糖、葡萄糖或果糖等。葡萄糖或果糖價格稍貴，但可防褐化。麥芽糖價格貴，細胞培養(yǎng)時用。 4、激 素激素對愈傷組織的誘導、器官分化及植株再生具有重要的作用.培養(yǎng)基中的關(guān)鍵物質(zhì): 主要包括生長素、細胞分裂素、赤霉素（GA3）、脫落酸（ABA）、乙

20、烯。 激 素 - 生長素生長素能影響植物莖和節(jié)間的伸長、向性、頂端優(yōu)勢、葉片脫落、生根等現(xiàn)象。 離體培養(yǎng)中的作用：誘導愈傷組織的產(chǎn)生；促進細胞脫分化；促進細胞的伸長；促進生根。常用的生長素有吲哚乙酸（IAA）、吲哚丁酸（IBA）、萘乙酸（NAA）、2，4二氯苯氧乙酸（2，4D）。IAA、NAA、IBA、2,4-D之類生長素，可先用少量0.1N氫氧化鈉或乙醇溶解，然后再定容到所需要的體積。 激 素- 細胞分裂素細胞分裂素影響植物細胞分裂、頂端優(yōu)勢的變化和莖的分化等。培養(yǎng)基中加入細胞分裂素，主要是為促進細胞分裂和由愈傷組織形成器官，分化不定芽。由于這類化合物有助于解除頂端優(yōu)勢對腋芽的抑制作用，可用

21、于莖的增殖。細胞分裂素有天然的和人工合成的。常用的有玉米素（ZT）、芐氨基腺嘌呤（6BA）、激動素（KT）等。KT、BA等細胞分裂素則可用少量0.1N鹽酸加熱溶解，然后加水定容。 激 素 比當配制的培養(yǎng)基中生長素/細胞分裂素的比例高時則有利于生根；生長素/細胞分裂素的比例低時則有利于生芽；若兩者濃度相當時，既不利于生根，也不利于生芽，而是愈傷組織的產(chǎn)生占優(yōu)勢。其它的一些激素：赤霉素，植物組織培養(yǎng)中常用的是GA3。脫落酸，在植物組織培養(yǎng)中對培養(yǎng)物有間接的抑制作用，它可抑制外植體形成體細胞胚狀體。水楊酸（阿司匹林），能抑制ABA的形成，有利于胚狀體的形成。5、凝固劑在固體培養(yǎng)時，瓊脂是使用最方便、

22、最好的凝固劑。瓊脂是一種高分子的碳水化合物，以色白、透明、潔凈的為佳，僅溶解于熱水，冷后（40以下）即凝固為固體狀的凝膠。瓊脂的凝固能力除與原料、廠家的加工方式等有關(guān)外，還與高壓滅菌時的溫度、時間、pH等因素有關(guān)，長時間的高溫會使凝固能力下降，過酸、過堿也會使瓊脂發(fā)生水解，喪失凝固能力。 瓊脂糖：原生質(zhì)體培養(yǎng)時用。Phytogel：新型凝固劑。 6、水 植物組織培養(yǎng)所必需 培養(yǎng)基的配制必須用超純水 細胞培養(yǎng)主要用蒸餾水7、 活性炭（AC） 活性炭加入培養(yǎng)基中的目的主要是利用其吸附能力，減少一些有害物質(zhì)的影響，如防止酚類物質(zhì)污染而引起組織褐化死亡。這在蘭花組織培養(yǎng)中效果更明顯。 活性炭使培養(yǎng)基變

23、黑，有利于某些植物生根。 活性炭對物質(zhì)吸附無選擇性，因此使用時應慎重考慮，不能過量，一般用量為0.10.5。活性炭對形態(tài)發(fā)生和器官形成有良好的效應。 8、 培養(yǎng)基的pH 培養(yǎng)基的pH因培養(yǎng)材料不同而異，大多數(shù)植物都要求在pH5.65.8的條件進行組織培養(yǎng)。 在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基的pH不是一成不變的，往往隨著培養(yǎng)基的水分和養(yǎng)料的消耗，pH會發(fā)生一些變化。高壓滅菌會降低培養(yǎng)基中的pH。 配制培養(yǎng)基時，常用0.lmolL的NaOH和0.lmolL的HCl來調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH。 pH的高低會影響瓊脂的凝固能力： pH>6 培養(yǎng)基變硬， pH<5 瓊脂不易凝固 培養(yǎng)基的滅菌和存儲：培養(yǎng)基一般采

24、用濕熱滅菌法，壓力108kPa、溫度為121時，維持20min。某些激素（如GA3、ZT、IAA）、抗生素以及某些維生素等，遇熱時容易分解，不能進行高壓滅菌。當使用這類化合物時，可選擇使用孔徑為0.45m或更小的細菌濾膜過濾滅菌。培養(yǎng)基一般需冷卻到60以下（恰在瓊脂凝固之前）再加入這些遇熱分解化合物。 將濾膜安在過濾器里面進行高壓滅菌。過濾器的滅菌溫度不應超過121 。 植物組培培養(yǎng)中污染的來源：（1) 培養(yǎng)容器；（2）培養(yǎng)基本身；（3）外植體；（4）接種室的環(huán)境；（5）操作用的器械；（6）培養(yǎng)室的環(huán)境。 可以通過滅菌措施防止或減少污染源常用的滅菌方法： 物理滅菌：高溫高壓滅菌、干熱滅菌(烘燒

25、和灼燒)、濕熱滅菌、輻射(紫外線、超聲波、微波)滅菌、過濾滅菌。 化學滅菌：酒精、升汞、過氧化氫、高錳酸鉀、次氯酸鈉、抗生素等化學藥品處理，根據(jù)工作中的不同材料不同目的適當選用。包括：熏蒸滅菌、噴霧滅菌、消毒液滅菌。 高壓滅菌通常會使培養(yǎng)基中的蔗糖水解為單糖，從而改變培養(yǎng)基的滲透壓。 培養(yǎng)基中的鐵在高壓滅菌時會催化蔗糖水解為葡萄糖和果糖。培養(yǎng)基值小于5.5，其水解量更多，培養(yǎng)基中含有活性炭時，高壓下蔗糖水解大大增強。滅菌注意事項： 1、GA3、維生素、蔗糖等的降解問題； 2、灼燒問題； 3、紫外燈的危害； 4、消毒劑對皮膚的損害。脫分化：指高度分化的植物器官、組織或細胞，在離體培養(yǎng)條件下經(jīng)過多

26、次細胞分裂逐漸失去原來的結(jié)構(gòu)、功能和分化狀態(tài)，形成無組織結(jié)構(gòu)的愈傷組織或細胞團的過程。再分化：指離體培養(yǎng)的植物細胞和組織可以由脫分化狀態(tài)重新進行分化，形成另一種或幾種類型的細胞、組織、器官，甚至形成完整植株。植物組織培養(yǎng)步驟：植物組織培養(yǎng)的類型：愈傷組織培養(yǎng): 最為常見的組織培養(yǎng)器官培養(yǎng): 根、莖、葉、花等胚培養(yǎng)：胚、胚乳、珠心、子房、細胞培養(yǎng)和原生質(zhì)體培養(yǎng)：懸浮培養(yǎng)、單細胞培養(yǎng)外植體消毒的一般步驟： 1、預處理，先對植物組織進行修整，去掉不需要的部分，將準備使用的植物材料在流水中沖洗干凈。經(jīng)過預處理的植物材料，其表面仍有很多細菌和真菌。 2、將外植體置于無菌的玻璃瓶中，加入75%的酒精溶液浸

27、泡材料10S左右。倒出酒精，用無菌水沖洗一次。 3、將適當濃度的消毒液(0.1%升汞或2%次氯酸鈉)，使材料完全浸沒在消毒液中，蓋上瓶蓋，把玻璃瓶置入超凈工作臺滅菌一定時間。在滅菌期間須搖動玻璃瓶2-3次。 4、消毒處理后，將消毒液倒出，注入適量的無菌蒸餾水漂洗，將水倒掉，重復3-4次。外植體培養(yǎng) 固體培養(yǎng)法：用瓊脂或植物膠固化培養(yǎng)基來培養(yǎng)植物材料的方法。該方法操作簡單，通氣好，外植體固定，利于愈傷組織的誘導、分化，應用最廣；但養(yǎng)分分布不均，生長速度不均衡，有毒物質(zhì)積累，并常有褐化中毒現(xiàn)象發(fā)生。 液體培養(yǎng)法：即用不加固化劑的液體培養(yǎng)基培養(yǎng)植物材料的方法。一般用于愈傷組織的繁殖、分散；主要用于分

28、離單細胞和產(chǎn)生體細胞無性系，生產(chǎn)次生代謝物質(zhì)。由于液體中氧氣含量較少，所以通常需要通過攪動或振動培養(yǎng)液的方法以確保氧氣的供給， 優(yōu)點：生長繁殖快、均勻，工廠化生產(chǎn) 缺點：需要搖床，頻繁繼代，不利分化。 初代培養(yǎng)旨在獲得無菌材料和無性繁殖系。即接種某種外植體后，最初的幾代培養(yǎng)。初代培養(yǎng)時，常用誘導或分化培養(yǎng)基，即培養(yǎng)基中含有較多的細胞分裂素和少量的生長素。初代培養(yǎng)建立的無性繁殖系包括：莖梢、芽叢、胚狀體和原球莖等。 根據(jù)初代培養(yǎng)時發(fā)育的方向可分為:頂芽和腋芽的發(fā)育、不定芽的發(fā)育、體細胞胚狀體的發(fā)生與發(fā)育。 繼代培養(yǎng)是繼初代培養(yǎng)之后的連續(xù)數(shù)代的擴繁培養(yǎng)過程，外植體或愈傷組織在培養(yǎng)基上生長一段時間以后，由于營養(yǎng)物質(zhì)枯竭，水分散失，以及代謝產(chǎn)物的積累，必須轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基上培養(yǎng)。繼代培養(yǎng)的后代是按幾何級數(shù)增加的過程。 生根培養(yǎng)是使無根苗生根的過程，目的是使生出的不定根濃密而粗壯。生根培養(yǎng)可采用1/2或者1/4MS培養(yǎng)基，全部去掉細胞分裂素，并加入適量的生長素(NAA、IBA等)?？焖俜敝持谐醮囵B(yǎng)只是一個必經(jīng)的過程，而