生化試劑參數(shù)

1、生化試劑各機(jī)型參數(shù)確定生化試劑各機(jī)型參數(shù)確定目錄生化試劑主要參數(shù)及意義生化試劑其他參數(shù)及意義各機(jī)型生化分析儀概括介紹各機(jī)型參數(shù)特點(diǎn)生化試劑主要參數(shù)及意義生化試劑說明書中各參數(shù)（例：脂肪酶）項(xiàng)目名稱方法類型反應(yīng)方向測定波長測定溫度樣本體積試劑量分析時(shí)間校正方法生化試劑主要參數(shù)及意義項(xiàng)目名稱(test name)：常以項(xiàng)目的英文縮寫來設(shè)置。方法類型(assay/Method )（適用于儀器的方法）：方法類型主要分為：終點(diǎn)法和動(dòng)力學(xué)法u終點(diǎn)法u一點(diǎn)終點(diǎn)法：樣本與試劑混勻一定時(shí)間后讀取反應(yīng)終點(diǎn)吸光度，如血糖氧化酶法、總蛋白雙縮脲法、白蛋白溴甲酚綠法等。u兩點(diǎn)終點(diǎn)法：（又稱固定時(shí)間法）樣本與試劑混勻一定

2、時(shí)間后先讀取吸光度A1，延遲一定時(shí)間后讀取吸光度A2，計(jì)算吸光度差值與標(biāo)準(zhǔn)比較求得結(jié)果。如肌酐苦味酸法等?？上齼?nèi)源性物質(zhì)干擾。生化試劑主要參數(shù)及意義u動(dòng)力學(xué)法u一級動(dòng)力學(xué)法：（兩點(diǎn)速率法）樣本與試劑反應(yīng)不斷消耗反應(yīng)物，反應(yīng)速度不斷減小，吸光度變化不斷減小，在特定時(shí)間段內(nèi)進(jìn)行監(jiān)測，該時(shí)間段內(nèi)吸光度升高或降低與樣本濃度成正比，如同型半胱氨酸、總膽汁酸等。u零級動(dòng)力學(xué)法：（連續(xù)監(jiān)測法，用于酶活性監(jiān)測）樣本與試劑反應(yīng)，反應(yīng)物可勻速生成某個(gè)產(chǎn)物，如NADH，在特定波長下吸光度均勻的增大或減小，增大或減小的速度與樣本濃度呈正比。如堿性磷酸酶、乳酸脫氫酶等。生化試劑主要參數(shù)及意義一級動(dòng)力學(xué)法：（兩點(diǎn)速率法

3、）生化試劑主要參數(shù)及意義零級動(dòng)力學(xué)法：（連續(xù)監(jiān)測法，用于酶活性監(jiān)測）生化試劑主要參數(shù)及意義反應(yīng)方向(response direction)u正向反應(yīng)（UP/INC/+）：吸光度增加。u負(fù)向反應(yīng)（DOWN/DEC/-）：吸光度下降。測定溫度30、37、25樣本體積（sample volum）一般為2-35l ，以0.1l步進(jìn)。試劑量（regengt volum）一般為20-300l ，以1l步進(jìn)。不同機(jī)型生化分析儀的樣本量及試劑量限制不同，樣本與試劑可根據(jù)比例進(jìn)行增大或減少。生化試劑主要參數(shù)及意義測定波長（wavelength）：不同生化分析儀具備不同的波長?？蛇x擇單波長或雙波長。u主波長（ma

4、in wavelength/primary wavelength ）根據(jù)待測物質(zhì)在特定波長下具有最大吸收峰來選擇主波長。u副波長（次波長sub wavelength/second wavelength ）可不選擇設(shè)定。副波長可消除樣本溶血，血清渾濁的干擾影響，副波長與主波長越接近越好。檢測時(shí)吸光度值為主波長的吸光度減去副波長的吸光度。生化試劑主要參數(shù)及意義分析時(shí)間：u孵育時(shí)間（incubate time）一點(diǎn)終點(diǎn)法的孵育時(shí)間是指樣本與試劑開始到反應(yīng)終點(diǎn)的時(shí)間；兩點(diǎn)終點(diǎn)法是指第一個(gè)吸光度反應(yīng)點(diǎn)開始到第二個(gè)吸光度點(diǎn)為止時(shí)間。一般為5min。u延遲時(shí)間（delay time）加入第二反應(yīng)試劑后到第一

5、個(gè)吸光度監(jiān)測點(diǎn)開始的時(shí)間。即樣本與反應(yīng)試劑（第二試劑）混勻開始至第一個(gè)吸光度選擇點(diǎn)之間的時(shí)間。單試劑一般設(shè)置為30s，雙底物反應(yīng)或酶類反應(yīng)一般設(shè)置為1-3min。u連續(xù)監(jiān)測時(shí)間（ continuous monitoring time）在延遲時(shí)間后的零級反應(yīng)開始，監(jiān)測至少4個(gè)點(diǎn)（3個(gè)吸光度變化值），一般為1-2min。生化試劑主要參數(shù)及意義校正方法（Calibration Type）：可采用標(biāo)準(zhǔn)液（校準(zhǔn)液）定標(biāo)方式或理論K值方式獲取標(biāo)準(zhǔn)曲線。u線性定標(biāo)（ Linear/AB）：兩點(diǎn)定標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)曲線呈直線。u非線性定標(biāo)（Spline/4AB/polygonal）：多點(diǎn)定標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)曲線近似于直線。u理論

6、K值 （Factor/MB）：多用于連續(xù)監(jiān)測法測定酶活時(shí)，無需定標(biāo)曲線，根據(jù)摩爾消光系數(shù)計(jì)算得到結(jié)果。 106 VF= vL生化試劑主要參數(shù)及意義V：反應(yīng)體系總體積（ml）；v：樣本體積（ml）：摩爾消光系數(shù)（cm2/mol）L：比色杯光徑（cm）；106：將mol換算為mol生化試劑其他參數(shù)及意義試劑吸光度上限、下限/試劑吸光度界限(OD Limt) 底物耗盡限額(substrate exhaust limit)試劑吸光度線性范圍(Linearity） 試劑線性范圍（Technical Limit）前區(qū)檢查限(Prozone Check Limt) 方程式（Fomular）小數(shù)位（Decim

7、al Places）雙份界限（Duplicate Limit）敏感性界限(Sensitivity Limit)第一標(biāo)準(zhǔn)吸光度界限(S1 Abs.limt)反應(yīng)過程吸光度界限(Absorbance Limit)生化試劑其他參數(shù)及意義試劑吸光度上限、下限/試劑吸光度界限(OD Limt) 常用規(guī)定波長及光徑下的吸光度值表示。終點(diǎn)法常在0點(diǎn)讀數(shù)，連續(xù)監(jiān)測法常以反應(yīng)監(jiān)測起始點(diǎn)來判讀該吸光度值?？捎糜谂袛嘣噭┵|(zhì)量。檢測試劑空白時(shí)，若超過此參數(shù)的限值，則提示試劑可能失效。底物耗盡限額(substrate exhaust limit)連續(xù)監(jiān)測法或兩點(diǎn)終點(diǎn)法時(shí)設(shè)置。根據(jù)吸光度上升或下降設(shè)定MAX-OD/MIN

8、-OD，吸光度超過設(shè)定界限時(shí)，代表樣品酶活非常高，底物消耗太快，所測得結(jié)果不能代表真實(shí)酶活力。生化試劑其他參數(shù)及意義 試劑吸光度范圍(Linearity） 線性度不能超過設(shè)定界限，超限時(shí)說明吸光度的變化量之間已經(jīng)不成線性或說明底物不足，檢測結(jié)果會(huì)變低。試劑線性范圍（Dynamic Range/Technical Limit）與試劑/樣本比值有關(guān)，超出范圍的樣本應(yīng)增加樣本量重測或樣本稀釋后重測。生化試劑其他參數(shù)及意義方程式（Fomular）Y=aX+ba為截距，b為斜率。用于校正檢測結(jié)果，一般a為1.000，b為0.000，小數(shù)位（Decimal Places）主要根據(jù)項(xiàng)目參考范圍的小數(shù)位進(jìn)行設(shè)

9、定，一般0-2位。前區(qū)檢查限(Prozone Check Limt) 主要用于免疫比濁法項(xiàng)目，可根據(jù)項(xiàng)目要求選YES或NO，比較終點(diǎn)法后兩個(gè)讀數(shù)點(diǎn)的差別，如果后一點(diǎn)比前一點(diǎn)的吸光度低，表示已經(jīng)有抗原過剩，樣本應(yīng)稀釋后重測 生化試劑其他參數(shù)及意義雙份界限（Duplicate Limit）也稱離散性，是同一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液兩次測定吸光度的差值，表示試劑和儀器的重復(fù)性,此值越小表示試劑和儀器的精密度越高敏感性界限(Sensitivity Limit) 可以檢測的最低吸光度值，也就是檢測最低濃度的可靠性第一標(biāo)準(zhǔn)吸光度界限(S1 Abs.limt)通常指零濃度標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度界限，在終點(diǎn)法和速率法中計(jì)算方式不同生

10、化試劑其他參數(shù)及意義反應(yīng)過程吸光度界限(Absorbance Limit)在動(dòng)力學(xué)反應(yīng)中,由于高濃度（活性）樣本使底物耗盡，所測吸光度已不可靠,使高濃度的樣本測定值低很多,甚至為負(fù)值。為能正確反映測定結(jié)果，需設(shè)置底物耗盡限(某一特定吸光度)，是在反應(yīng)時(shí)間內(nèi)反應(yīng)沒有發(fā)生底物耗盡時(shí)所能達(dá)到的最小(反應(yīng)曲線向下)或最大(反應(yīng)曲線向上)的吸光度值 ，該吸光度即為吸光度界限?？捎糜诖_保高濃度（活性）樣本結(jié)果的準(zhǔn)確性。淡藍(lán)色字體標(biāo)注參數(shù)設(shè)定時(shí)一般為機(jī)器默認(rèn)。各機(jī)型生化分析儀概括介紹AU400AU640AU2700AU480各機(jī)型生化分析儀概括介紹機(jī)型機(jī)型 試劑位試劑位 R1/R2R1/R2 項(xiàng)目項(xiàng)目 (

11、(雙雙) ) 速度速度 無無 ISEISE 樣本樣本 (ul)(ul) R1R1 (ul)(ul) R2R2 (ul)(ul) 反應(yīng)液反應(yīng)液 (ul)(ul) AU400AU400 48/4848/48 3838 400400 2 2- -5050 2525- -300300 AU600AU600 48/4848/48 4848 800800 2 2- -5050 2525- -300300 AU640AU640 48/4848/48 4848 800800 2 2- -5050 2525- -300300 150150- -550550 AU2700AU2700 48/4848/48 484

12、8 16001600 1.61.6- - 1515- -250250 120120- -430430 AU5600AU5600 26402640 AU系列各機(jī)型生化分析儀概括介紹各機(jī)型生化分析儀概括介紹機(jī)機(jī)型型 試試劑劑位位 R R1 1/ /R R2 2 項(xiàng)項(xiàng)目目 （雙雙） 速速度度 無無 I IS SE E 樣樣本本 ( (u ul l) ) R R1 1 ( (u ul l) ) R R2 2 ( (u ul l) ) 反反應(yīng)應(yīng)液液 ( (u ul l) ) 7 76 60 00 0P P 4 44 4 8 80 00 0 2 2- -3 35 5 7 76 60 00 0D D 1 1

13、6 6 2 24 40 00 0 2 2- -2 20 0 2 20 0- -2 27 70 0 1 15 50 0- -3 38 80 0 7 71 17 70 0S S 4 45 5/ /4 45 5 8 86 6 8 80 00 0 2 2- -3 35 5 2 20 0- -2 27 70 0 1 15 50 0- -3 35 55 5 7 70 06 60 0 3 32 2/ /3 32 2 3 32 2 3 36 60 0 3 3- -5 50 0 5 50 0- -3 35 50 0 2 25 50 0- -5 50 00 0 7 70 08 80 0 3 33 3/ /3 33

14、 3 4 49 9 3 36 60 0 2 2- -2 25 5 2 20 0- -2 27 70 0 1 15 50 0- -3 32 20 0 7 70 02 20 0 4 40 0 3 36 6 2 20 00 0 2 2- -5 50 0 2 20 0- -3 35 50 0 1 18 80 0- -5 50 00 0 7 71 15 50 0 3 32 2/ /3 32 2 6 60 00 0 2 25 50 0- - 7 71 18 80 0 3 33 3/ /3 33 3 8 86 6 8 80 00 0 1 1. .5 5- -3 35 5 2 20 0- -2 27 70 0

15、 1 12 20 0- -3 30 00 0 日立系列各機(jī)型生化分析儀概括介紹Beckman CX5Beckman LX20各機(jī)型生化分析儀概括介紹Beckmam系列機(jī)機(jī)型型 試試劑劑位位 R R1 1/ /R R2 2 項(xiàng)項(xiàng)目目 速速度度 無無I IS SE E 樣樣本本 ( (u ul l) ) R R1 1 ( (u ul l) ) R R2 2 ( (u ul l) ) 反反應(yīng)應(yīng)液液 ( (u ul l) ) C CX X4 4 2 24 4 2 24 4 2 22 25 5 3 3- -2 25 5 C CX X5 5 2 24 4 2 29 9 6 60 00 0 3 3- -6

16、69 9 C CX X7 7 2 24 4 3 33 3 9 90 00 0 3 3- -2 25 5 C CX X9 9 2 24 4 3 33 3 9 90 00 0 3 3- -2 25 5 L LX X2 20 0 4 41 1 7 70 0 8 80 00 0 3 3- -2 25 5 2 20 00 0- -3 32 27 7/ /6 6- -7 75 5 2 22 25 5- -3 32 25 5 各機(jī)型參數(shù)特點(diǎn)不同機(jī)型分析方法 表示方法 常用選擇項(xiàng) COBAS Asaay Rate A/2Pont rate/1 Ponit/2 Point end HITACHI Assay c

17、ode Rate A/2Pont rate/1 Ponit/2 Point endOLYMPUS Method RATE/FIXED/ENDBECKMAN Reaction type RATE1/2/END1/2ABBOTT Reaction defintion Rate /Flex Rate/End 各機(jī)型參數(shù)特點(diǎn) 不同機(jī)型反應(yīng)方向 表示方法 可選擇項(xiàng) COBAS INC/DEC INC/DECHITACHI INC/DEC INC/DECOLYMPUS Reaction Slope +/-BECKMAN Reaction Direction Positive/NegativeABBOTT

18、Reaction Mode Up/Down各機(jī)型參數(shù)特點(diǎn) 不同機(jī)型測定波長 主波長 次波長COBAS Wave(Main/ Sub)HITACHI Wave(Main/ Sub)OLYMPUS Wavelength pri Wavelength secBECKMAN Primary Wavelength Secondary WavelengthABBOTT Wavelength Primary Wavelenght Secondary 不同機(jī)型所具波長數(shù)目不同，一般波長分布為 從紫外線到紅外線340-800nm。參數(shù)設(shè)定時(shí)可選擇與項(xiàng)目要求相近的波長。各機(jī)型參數(shù)特點(diǎn)不同機(jī)型反應(yīng)時(shí)間：儀器的一個(gè)分析周期中，試劑和樣本混合最后一點(diǎn)測定讀數(shù)時(shí)間 常見儀器可以選擇的時(shí)間COBAS P800 :110、15、22分鐘 C501: 310分鐘HITACHI ：3、5、8、10、15、22分鐘OLYMPUS固定時(shí)間： 8.3分鐘ABBOTT固定時(shí)間：9.6 分鐘BECKMAN可達(dá)時(shí)間：975秒各機(jī)型參數(shù)特點(diǎn) 不同機(jī)型試劑加入相應(yīng)時(shí)間(分鐘) HITACHI R1 R2(1.5) R3(5) R4(9) P800 R1 R2(1.5) R3(5) R4(9) C501 R1 R2(1.5) R3