LC_MS_MS法測(cè)定人血漿中羅紅霉素的血藥濃度

1、品在檢測(cè)時(shí)未發(fā)現(xiàn)此物。3. 5本法經(jīng)試驗(yàn), 表明靈敏度高, 準(zhǔn)確度好, 可作為為異福medicati onsJ .Chin J Chin Phar macol . (中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志 , 1998, 14(4 :2392243.2Ch . P (2005 Vol (中國(guó)藥典2005年版. 二部 S .2005:2652267.雙釋膠囊的內(nèi)在質(zhì)量控制。REFERENCES1L IM. Pr ogress on the fixed 2doxe combinati ons of antitubercul ous收稿日期:2007212218LC /MS/MS法測(cè)定人血漿中羅紅霉素的血藥濃度何夕典,

2、 袁波, 徐海燕122(1. 中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥劑科, 沈陽(yáng)2. 摘要:目的建立LC /MS/MSia C 18色譜柱, 流動(dòng)相甲醇2水2甲酸(75-1250. 5 , 流速為0. 5mL m in 。:SI M , 血漿樣品用乙醚提取濃集, 進(jìn)行LC /MS/MS分析。結(jié)果本方法在0. 140. g 1(r 0. 9997 , 平均回收率87. 6%, 日內(nèi)和日間RS D 10%。結(jié)論本方法快速、準(zhǔn)確, 。關(guān)鍵詞:液質(zhì)聯(lián)用; 血藥濃度中圖分類(lèi)號(hào):R969. 11文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):100727693(2008 0520424203D eter m i n a ti on of

3、the Concen tra ti on of Rox ithrom yc i n i n the Hu man Pl a s ma by LC /MS /MS1, 22HE Xi 2dian Y UAN Bo , XU Hai 2yan (1. The First A ffiliated Hospital of China M edical U niversity, Shenyang 110001, China; 2.School of Phar m acy, Shenyang Phar m aceutical U niversity, Shenyang 110016, China ABST

4、RACT:OBJECT I VE To establish a LC /MS/MS method t o deter m ine the concentrati on of r oxithr omycin in the hu man p las ma . M ETHOD S The assay was conducted on the D ia monsil C 18colu mn with methanol 2water 2methane acid (75250. 5 as the mobile-1phase, running at a fl ow rate of 0. 5mL m in .

5、 LC /MS/MS was perf or med in the selected i on monit oring (SI M mode . Theclarithr omycin was used as the internal standard . The p las ma samp les were extracted with diethyl ether and deter m ined by LC /MS/MS . RESUL TS The linear calibrati on curve was obtained in the concentrati on range of 0

6、. 140. 0g mL-1(r =0. 9997 , therecovery of within 2day RS D and bet w een 2day RS D were 10%.CO NCL US I O N The method is shown t o be convenient, accurate, rap id, and suitable for the deter m inati on of r oxithr omycin in the hu man p las ma and phar macokinetic studies of r oxithr omycin . KE Y

7、 WO R D S:LC /MS/MS;r oxithr omycin; p las ma drug concentrati on羅紅霉素(Roxithr omycin 是一種半合成大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素, 對(duì)革蘭陽(yáng)性菌、部分革蘭陰性菌、厭氧菌、支原體、衣原體、軍團(tuán)菌等均有較強(qiáng)的抗菌作用。臨床證明, 羅紅霉素對(duì)治療呼吸道感染、泌尿生殖道感染、皮膚和軟組織感染方面效果顯著。羅紅霉素具有口服吸收好、對(duì)胃酸穩(wěn)定、生物利用度好、血和組織中含量高、不良反應(yīng)小、半衰期長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)。有關(guān)羅紅霉素的血藥濃度分析, 多采用微生物法1和高效液相色譜-電化學(xué)檢測(cè)器2中羅紅霉素的血藥濃度。1儀器與試劑1. 1儀器TS Q Qu

8、antu m U ltra 液相色譜2三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀,電噴霧離子源(ESI 源 , Surveyor LC 泵, Surveyor 型自動(dòng)進(jìn)樣器以及Xcalibur 1. 3數(shù)據(jù)采集軟件(美國(guó)Finnigan 公司 ;M icr os oft Excel 2000數(shù)據(jù)處理軟件(美國(guó)微軟公司 ; TG L 216C 型離心機(jī)(上海手術(shù)器械廠(chǎng) ; X W 280A 旋渦混合器(上, 而微生物法操作繁瑣、周期長(zhǎng), 電化學(xué)檢測(cè)器一般實(shí)驗(yàn)室難以具備。由于羅紅霉素結(jié)構(gòu)中無(wú)共軛基團(tuán), 只在紫外末端吸收, 用紫外檢測(cè)器檢測(cè)靈敏度低, 需預(yù)先對(duì)血樣進(jìn)行提取濃集, 文獻(xiàn)報(bào)道325的提取方法回收率低, 操作繁

9、瑣。本實(shí)驗(yàn)建立了LC /MS/MS法來(lái)測(cè)定人血漿海精科實(shí)業(yè)有限公司 。1. 2藥品及試劑羅紅霉素對(duì)照品(純度99. 6% , 內(nèi)標(biāo)克拉霉素(純度99. 8% 均購(gòu)于中國(guó)生物制品檢定所; 甲醇為色譜純(山東禹作者簡(jiǎn)介:何夕典, 男, 主管藥師Tel:(024 2325666626158E 2mail:G AO_M ing9778yahoo . com. cn 424Chin J MAP, 2008Oct ober, Vol . 25No . 5中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志2008年10月第25卷第5 期王試劑廠(chǎng) ; 甲酸、乙醚和碳酸鈉為分析純(沈陽(yáng)化學(xué)試劑廠(chǎng) ; 空白血漿由沈陽(yáng)中心血站提供。2方法2.

10、1試驗(yàn)條件2. 1. 1色譜條件色譜柱為D ia monsil C 18柱(150mm 4. 6mm, 5m ; 流動(dòng)相為甲醇2水2甲酸(75250. 5 , 流速為0. 5mL m in-12. 3血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備取空白血漿50L, 加羅紅霉素標(biāo)準(zhǔn)系列溶液50L , 配制成相當(dāng)于羅紅霉素血漿濃度為0. 1, 0. 4, 1. 0, 4. 0, 10. 0, 40. 0g mL 的樣品, 按“血漿樣-1品處理”依法操作, 每一濃度進(jìn)行雙樣本分析, 進(jìn)樣20L, 記錄色譜圖; 以待測(cè)物濃度為橫坐標(biāo), 待測(cè)物與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值為縱坐標(biāo), 用加權(quán)最小二乘法6進(jìn)行回歸運(yùn)算, 求-2得的直線(xiàn)回歸方程

11、即為標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)y =2. 74810x -4. 666-310, r =0. 9997, 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn), 羅紅霉素血漿濃度測(cè)定, 柱溫:室溫。2. 1. 2質(zhì)譜條件ESI 離子源; 源噴霧電壓為4. 0k V; 加熱毛細(xì)管溫度為300; 鞘氣(N 2 壓力25A rb; 輔助氣(N 2 壓力5A rb; 碰撞氣(A r 壓力1. 2mTorr; 羅紅霉素和克拉霉素的碰撞誘導(dǎo)解離(C I D 電壓都為25e V; 正離子方式檢測(cè); 掃描方式為選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)(SR M , 用于定量分析的離子反應(yīng)分別為m /z 837. 5(m /z 679. 3羅紅霉素 和m /z 748. 5(m /z158. 1

12、(克拉霉素 ; 掃描時(shí)間為0. 3s 。2. 2樣品的處理方法2. 2. 1樣品的預(yù)處理方法的線(xiàn)性范圍為0. 140. 0g mL -1。2. 4方法專(zhuān)屬性與檢測(cè)限離子化方式下, 主要生成+準(zhǔn), 為m /z 837. 5和m /z748. +H 進(jìn)行產(chǎn)物離子掃+m /z 679. 3和m /z 158. 1, 將。分別取6名受試者的空白血漿50L, 除不加內(nèi)標(biāo)外, 按“血漿樣品的處理”依法操作, 進(jìn)行LC /MS/MS 分析, 獲得空白血漿樣品的色譜圖, 如圖1A; 將一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液和內(nèi)標(biāo)溶液加入空白血漿中, 依同法操作, 得色譜圖, 如圖1B, 其中羅紅霉素的保留時(shí)間約為4. 7m in

13、, 內(nèi)標(biāo)克拉霉素的保留時(shí)間約為4. 2m in; 取健康受試者給藥后收集的血漿樣品, 依同法操作, 得色譜圖, 如圖1C 。結(jié)果表明, 空白血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾待測(cè)物及內(nèi)標(biāo)物的測(cè)定。最低檢測(cè)限為0. 06g mL -1 。血2mL, 上下震蕩, -15m in, 分離上層血漿, 貯存。2. 2. 2血漿樣品的處理向50L 血漿中分別加入50L 內(nèi)標(biāo)溶液(克拉霉素10g mL -1 和0. 05mol L -1Na 2C O 330L, 混勻; 加1mL 提取溶劑乙醚, 渦流混合1m in, 往復(fù)振蕩10m in (180次m in-1, 離心5m in (4000r m in-1, 分取上層

14、有機(jī)相于另一試管中, 于40空氣流下吹干, 殘留物加入1mL 流動(dòng)相溶解, 渦流混合, 取20L 進(jìn)行LC /MS/MS分析。圖1測(cè)定血漿中羅紅霉素和內(nèi)標(biāo)克拉霉素的質(zhì)譜圖A -空白血漿; B -空白血漿加入羅紅霉素至0. 4000g mL -1和內(nèi)標(biāo)克拉霉素至80. 00g mL -1; C -受試者口服含200mg 羅紅霉素參比制劑后2. 5h 血漿樣品(峰I 為羅紅霉素, 峰II 為克拉霉素F i g 1Chr omat ogram s of r oxithr omycin and internal standard clarithr omycinA -blank p las ma; B

15、-blank p las ma with r oxithr omycin 0. 4000g mL -1and internal standard clarithr omycin 80. 00g mL -1; C -healthy volunteer p las ma sa mp le 2. 5h after a oral dose of 200mg r oxithr omycin (I :r oxithr omycin; II :clarithr omycin 2. 5血漿樣品提取回收率取空白血漿50L, 按“血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備”項(xiàng)下的方法配制羅紅霉素低、中、高三個(gè)濃度(分別為0. 1, 4.

16、 0, 32. 0g mL -1 的質(zhì)量控制(QC 樣品, 6樣本, 連續(xù)測(cè)定3d, 并與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)同時(shí)進(jìn)行, 計(jì)算QC 樣品的測(cè)得濃度, 與配制濃度對(duì)照, 求得本法的準(zhǔn)確度與精密度, 數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。日內(nèi)精密-2-3度標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)y =3. 69410x -7. 68210, r =0. 9995; 日取空白血漿50L, 按“血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備”項(xiàng)下的方法制備羅紅霉素低、中、高三個(gè)濃度點(diǎn)(0. 1, 4. 0, 32. 0g mL -1 的樣品, 每一濃度進(jìn)行6樣本分析。同時(shí)另取空白血漿50L, 除不加標(biāo)準(zhǔn)系列溶液和內(nèi)標(biāo)外, 按“血漿樣品的處理”項(xiàng)下操作, 向提取的上清液中加入相應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液和內(nèi)標(biāo)

17、各50L, 渦流混合, 40空氣流下吹干。殘留物以1mL 流動(dòng)相溶解, 進(jìn)樣分析, 獲得相應(yīng)峰面積(3次測(cè)定的平均值 。以每一濃度兩種處理方法的峰面積比值計(jì)算提取回收率。羅紅霉素在0. 1, 4. 0, 32. 0g mL -1三個(gè)濃度的血漿樣品提取回收率分別為85. 1%、87. 3%和90. 5%。2. 6精密度試驗(yàn)間精密度標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)y =5. 12910-2x -3. 78210-3, r =0. 9996。2. 7穩(wěn)定性的考察本實(shí)驗(yàn)考察了羅紅霉素血漿樣品經(jīng)液2液萃取處理后室溫放置24h 的穩(wěn)定性, 血漿樣品室溫放置2h 的穩(wěn)定性, 血漿樣品-20放置30d 及血漿樣品經(jīng)歷3次冷凍(解凍循

18、425中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志2008年10月第25卷第5期Chin J MAP, 2008Oct ober, Vol . 25No . 5表1人血漿中羅紅霉素的準(zhǔn)確度與精密度Tab 1Accuracy and p recisi on of Roxithr omycin in hu man p las ma 加入量-10. 104. 0032. 0限為0. 06g mL -1。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)在0. 140. 0g mL -1內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好(r =0. 9997 。故此法有較高的靈敏度和專(zhuān)屬性, 能夠滿(mǎn)足生物樣品測(cè)定的要求。采用LC /MS/MS 法測(cè)定羅紅霉素的含量, 有檢測(cè)時(shí)間短、靈敏度高、重復(fù)性好及

19、血漿預(yù)處理方法簡(jiǎn)單、易操作的優(yōu)點(diǎn), 在實(shí)際的臨床藥動(dòng)學(xué)研究和血藥濃度檢測(cè)工作中有廣泛的應(yīng)用前景。REFERENCES1WANG H, ZHANG Q Y, SH I A M. Detecti on of Roxithr omycin content in human bl ood p las ma by HP LC J .Anti 2infecti on Phar macy, 2005, 2(1 :252DA I HU C omycin and Its Related J .2002, 22(3 :1852188. H REN J M. Detecti on of Roxithr omycin

20、 in human bl ood p las ma by RE 2HP LC J .Journal of He Bei medical University, 2005, 26(5 :3532354. 4TI A N L, Z HONG D F . Detecti on of Roxithr omycin in human bl ood p las ma by HP LC 2EC J .Chin Phar m J (中國(guó)藥學(xué)雜志 , 1999, 34(7 :480483. 5TI A N J, HU C Q. D iscussi on of Roxithr omycin and its rel

21、ated substances by high 2s peed column HP LC J .Chin J Phar m Anal (藥物分析雜志 , 2003, 23(6 :4342438.測(cè)得值-10. 100. 013. 880. 1331. 201. 8日內(nèi)精密度6. 73. 45. 7測(cè)得值-10. 100. 0063. 980. 0931. 402. 1日間精密度6. 42. 26. 7環(huán)的穩(wěn)定性。穩(wěn)定性考察時(shí), 取空白血漿50L, 按“標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備”項(xiàng)下的方法配制羅紅霉素低、高兩個(gè)濃度的血漿樣品(羅紅霉素濃度分別為0. 1和32. 0g mL-1, 每一種濃度水平進(jìn)行3樣本分

22、析, 采用LC /MS/MS法測(cè)定。數(shù)據(jù)表明:處理后的血漿樣品室溫放置24h 內(nèi)穩(wěn)定(RE 在7. 9%之內(nèi) , 血漿樣品室溫放置2h 內(nèi)穩(wěn)定(RE 在5. 2%之內(nèi) , 血漿樣品-20放置30d 內(nèi)穩(wěn)定(RE 在6. 9%之內(nèi) 紅霉素血漿樣品經(jīng)過(guò)3次冷凍(3. 7%之內(nèi) 。3討論的預(yù)處理方法, 簡(jiǎn)單易操作, 使用樣品量少。選用克拉霉素作為內(nèi)標(biāo), 其中羅紅霉素的保留時(shí)間約為4. 7m in, 內(nèi)標(biāo)克拉霉素的保留時(shí)間約為4. 2m in; 結(jié)果表明, 空白血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾待測(cè)物及內(nèi)標(biāo)物的測(cè)定。本方法提取回收率均大于85%, 日內(nèi)及日間精密度(RS D 均小于10%, 最低檢測(cè)收稿日期:20

23、07207212高效毛細(xì)管電泳法測(cè)定育亨賓樹(shù)皮中育亨賓的含量李開(kāi)俊, 陳琴華71006111, 2, 張卓, 朱軍, 張曉川211(1. 鄖陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬東風(fēng)總醫(yī)院, 湖北十堰442008; 2. 西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院, 西安摘要:目的建立高效毛細(xì)管電泳(HPCE 測(cè)定育亨賓樹(shù)皮中育亨賓含量的方法。方法運(yùn)用高效毛細(xì)管電泳方法, 熔融石-1英毛細(xì)管(75m I D 50cm , 緩沖液為20mmol L 磷酸鹽緩沖液(PH =3. 0 , 檢測(cè)波長(zhǎng):270n m, 分離電壓:15k V, 柱溫25, 用0. 45m 微孔濾膜過(guò)濾后進(jìn)樣, 壓力進(jìn)樣:50mbar 5s 。結(jié)果方法最低檢測(cè)濃度為0. 1g mL -1, 線(xiàn)性范圍1200g mL -1, r =0. 9991, 線(xiàn)性關(guān)系良好。精密度RS D 為1.