肺巖寧方下調(diào)裸鼠人肺腺癌細(xì)胞移植瘤中磷酸化Akt和缺氧誘導(dǎo)因

1、肺巖寧方下調(diào)裸鼠人肺腺癌細(xì)胞移植瘤中磷酸化Akt和缺氧誘導(dǎo)因子1蛋白表達(dá)         09-08-13 17:17:00     編輯：studa20                          作者：張銘, 徐振曄,

2、白冰, 董昀【摘要】  觀察肺巖寧方對人肺腺癌細(xì)胞A549裸鼠移植瘤中缺氧誘導(dǎo)因子1（hypoxia inducible factor1，HIF1）表達(dá)的絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶（Akt）信號調(diào)節(jié)的影響。方法：32只A549荷瘤裸鼠隨機(jī)分為4組：模型組、順鉑組、肺巖寧方組和綜合治療（順鉑加肺巖寧方）組，每組8只?；熃M和綜合治療組于第1、3、5天腹腔注射順鉑各0.1 mg，肺巖寧方組和綜合治療組予肺巖寧方0.4 ml灌胃，持續(xù)21 d。觀察抑瘤率，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcription polymerase chain reaction，RTPCR）檢測移植瘤中H

3、IF1 mRNA表達(dá)，免疫組化法檢測移植瘤中HIF1和磷酸化Akt（phosphorylated Akt, pAkt）蛋白表達(dá)。結(jié)果：肺巖寧方組裸鼠抑瘤率為34.17%，綜合治療組為64.38%。RTPCR結(jié)果顯示，綜合治療組HIF1 mRNA的表達(dá)水平低于模型組（P<0.05）。免疫組化實驗顯示，化療組、肺巖寧方組和綜合治療組移植瘤HIF1蛋白表達(dá)均明顯低于模型組（P<0.01）；肺巖寧方組和綜合治療組pAkt蛋白表達(dá)明顯低于模型組（P<0.05）。結(jié)論：益氣養(yǎng)精法為主的肺巖寧方可抑制肺癌腫瘤生長，并與順鉑有協(xié)同作用。肺巖方對HIF1蛋白表達(dá)的抑制作用可能與下調(diào)pAkt表達(dá)

4、有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】  益氣養(yǎng)精; 肺巖寧方; 人肺腺癌A549; 缺氧誘導(dǎo)因子1, 亞基; 絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶; 裸鼠Objective: To observe the effects of Feiyanning Decoction, a compound traditional Chinese herbal medicine, in inhibiting the growth of transplanted A549 tumors in nude mice and the expressions of pAkt and HIF1 in A549 tumors. Methods:

5、Thirtytwo nude mice were transplanted with human lung adenocarcinoma cells (A549 cells) to make the mice model, and then randomly divided into four groups: untreated group (n=8), diamminedichloroplatinum (DDP) group (n=8), Feiyanning group (n=8) and DDP plus Feiyanning group (n=8). The nude mice in

6、DDP group and DDP plus Feiyanning group were treated with DDP 0.1 mg by peritoneal injection on the 1st, 3rd and 5th day after model establishment. The nude mice in the Feiyanning group and the DDP plus Feiyanning group were treated with Feiyanning Decoction for 21 days. Reverse transcription polyme

7、rase chain reaction (RTPCR) was used to detect the expression of HIF1 mRNA in tumors, and immunohistochemical method was used to detect the expressions of pAkt and HIF1 proteins in tumors. Results: The inhibition rates of tumor in Feiyanning group and DDP plus Feiyanning group were 34.17% and 64.38%

8、 respectively. RTPCR showed that the expression level of HIF1 mRNA in DDP plus Feiyanning group was lower than that in the untreated group (P<0.05). Immunohistochemical staining showed that the optical density (OD) indexes of HIF1 in DDP group, Feiyanning group and DDP plus Feiyanning group were

9、lower than that in the untreated group (P<0.01). The expressions of pAkt in the Feiyanning group and DDP plus Feiyanning group were lower than that in the untreated group either (P<0.05). Conclusion: Feiyanning Decoction is effective in inhibiting the growth of lung cancer. And the effect of i

10、nhibiting the expression of HIF1 protein by Feiyanning Decoction may correlate with downregulation of pAkt.Keywords: reinforcing qi and nourishing jing; Feiyanning Decoction; human lung adenocarcinoma cell strain; hypoxia inducible factor 1, alpha subunit; Akt; nude mice    缺氧誘導(dǎo)因子（hyp

11、oxia inducible factors，HIF）是一類轉(zhuǎn)錄因子，HIF1可以調(diào)節(jié)許多靶基因，促進(jìn)腫瘤的血管生成、細(xì)胞增殖以及腫瘤轉(zhuǎn)移等，磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol 3 kinase, PI3K）絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶中Akt信號的活化可使HIF1蛋白合成增加1。肺巖寧方是徐振曄教授研制的具有防治肺癌侵襲轉(zhuǎn)移作用的經(jīng)驗方，本研究旨在觀察肺巖寧方對A549裸鼠移植瘤中HIF1表達(dá)的Akt信號調(diào)節(jié)的影響，探求該方抑制腫瘤生長的可能作用靶點(diǎn)。1  材料與方法1.1  實驗材料1.1.1  實驗動物及細(xì)胞株 Balb/C裸鼠32

12、只，雄性，8周齡，體質(zhì)量（14±2）g，購于上海西普爾必凱實驗動物有限公司，許可證號為SYXK（滬）20050002。飼養(yǎng)于上海中醫(yī)藥大學(xué)龍華醫(yī)院實驗中心SPF級動物房，室溫25 ，濕度70%，自由進(jìn)食與飲水。人肺腺癌細(xì)胞株A549購于中國科學(xué)院上海細(xì)胞生物學(xué)研究所。培養(yǎng)于含10胎牛血清（fetal calf serum, FBS）的RPMI 1640的細(xì)胞培養(yǎng)基，37 、5 CO2、飽和濕度培養(yǎng)。1.1.2  實驗儀器 DU800紫外分光光度儀購于美國Beckman公司，TGradient聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) （polymerase chain reaction, P

13、CR）儀購于德國Biometra公司，凝膠成像分析系統(tǒng)購于美國Alpha公司。1.1.3  主要藥材和試劑 肺巖寧方由生黃芪、白術(shù)、七葉一枝花、蜂房、黃精、山萸肉、仙靈脾和靈芝等組成，由龍華醫(yī)院中藥房提供。常規(guī)水煎，濃縮至生藥含量為2.0 g/ml，4 保存。順鉑（diamminedichloroplatinum，DDP），20 mg/瓶，齊魯制藥廠產(chǎn)品，批號為04090352。RNA提取液TRIzol為北京天為時代科技公司產(chǎn)品，逆轉(zhuǎn)錄（reverse transcription, RT）反應(yīng)試劑盒為上海晶美生物工程有限公司產(chǎn)品，AmpliTaq DNA聚合酶為上海生物化工

14、有限公司產(chǎn)品，兔抗人HIF1和磷酸化Akt（phosphorylated Akt, pAkt）單克隆抗體為美國Santa Cruz公司產(chǎn)品，免疫組化SP試劑盒為美國Zymed公司產(chǎn)品。1.2  實驗方法1.2.1  動物模型制備及給藥 A549細(xì)胞懸液0.1 ml（含細(xì)胞數(shù)目5×106個），注射于裸鼠右腋部皮下。裸鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為模型組、DDP組、肺巖寧方組和綜合治療組（DDP+肺巖寧方），每組8只。2周后觀察到裸鼠皮下有小結(jié)節(jié)長出，成瘤率100%，開始給藥，給藥劑量根據(jù)人鼠體表面積折合法計算。模型組：生理鹽水0.4 ml灌胃21 d?；熃M：第1、

15、3、5天DDP溶液（20 mg DDP溶于200 ml生理鹽水）1 ml（含DDP 0.1 mg）腹腔注射。肺巖寧方組：中藥0.4 ml（含生藥0.8 g）灌胃21 d。綜合治療組：第1、3和5天DDP溶液1 ml腹腔注射，中藥0.4 ml（含生藥0.8 g）灌胃21 d。停藥后次日，處死裸鼠，剝?nèi)×鰤K，稱質(zhì)量后切取部分腫瘤組織，置于10%中性福爾馬林液中固定，48 h內(nèi)常規(guī)石蠟包埋。取余下標(biāo)本70 凍存，用于檢測。1.2.2  觀察指標(biāo)1.2.2.1  抑瘤率 抑瘤率=（空白對照組平均瘤質(zhì)量實驗組平均瘤質(zhì)量）/空白對照組平均瘤質(zhì)量×100%。1.2.2

16、.2  RTPCR檢測腫瘤組織中HIF1 mRNA表達(dá)  采用TRIzol一步法提取總RNA，在RT反應(yīng)體系中按照試劑盒說明進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，PCR擴(kuò)增參照試劑盒說明，引物由上海生物化工有限公司合成。內(nèi)參照磷酸甘油醛脫氫酶( glyceraldehyde phosphate dehydrogenase, GAPDH)上游引物：5ACA GCC GCA TCT TCT TGT GCA GTG3；下游引物：3GGC CTT GAC TGT GCC GTT GAA TTT5。擴(kuò)增片段長度174 bp。HIF1上游引物：5ACA AGT CAC CAC AGG ACA G3；下游引物

17、：3AGG GAG AAA ATC AAG TCG5。擴(kuò)增片段長度168 bp。反應(yīng)條件為：GAPDH，94 變性，52.2 退火，72 延伸，25個循環(huán)；HIF1，94 變性，49 退火，72 延伸，34個循環(huán)。在紫外光凝膠成像分析系統(tǒng)下攝片，檢測擴(kuò)增片段灰值，以HIF1基因片段與GAPDH片段灰度值的比值作為其相對表達(dá)水平數(shù)值。1.2.2.3  免疫組化法檢測HIF1和pAkt蛋白表達(dá)  免疫組化法檢測各組腫瘤組織中HIF1和pAkt蛋白表達(dá)，操作步驟參照試劑盒說明書進(jìn)行。圖像分析采用CMIAS多功能真彩色圖像分析系統(tǒng)。每張切片隨機(jī)采樣測量4處，計算單位面積下陽性染色區(qū)

18、域面積。     09-08-13 17:17:00     編輯：studa201.3  統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計量資料實驗數(shù)據(jù)用x±s表示。以方差分析檢驗各組均數(shù)間的差異性，組間比較使用最小顯著差異（LSD）法。若方差不齊時改用GamesHowell校正檢驗。P<0.05視為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2  結(jié)  果2.1  對荷瘤裸鼠的體內(nèi)抑瘤作用 DDP組和綜合治療組的抑瘤率均>50%，兩者的平均瘤質(zhì)量

19、與模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），綜合治療組的抑瘤率大于化療組的抑瘤率，但兩者之間的平均瘤質(zhì)量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。肺巖寧方組的抑瘤率為34.17%，平均瘤質(zhì)量與模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。表1  各組荷瘤裸鼠瘤質(zhì)量及抑瘤率（略）2.2  各組腫瘤組織中HIF1 mRNA表達(dá) 綜合治療組HIF1 mRNA表達(dá)低于模型組，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），但肺巖寧方組、化療組與模型組HIF1 mRNA表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義。見表2和圖1。表2  各組荷瘤裸鼠腫瘤組織HI

20、F1 mRNA的表達(dá)（略）2.3  HIF1和pAkt蛋白表達(dá)  DDP組、肺巖寧方組和綜合治療組HIF1蛋白表達(dá)低于模型組(P<0.01)，綜合治療組的表達(dá)最低。肺巖寧方組和綜合治療組pAkt表達(dá)均顯著低于模型組（P<0.05）。見表3和圖2、3。表3  各組荷瘤裸鼠腫瘤組織中HIF1和pAkt蛋白表達(dá)（略）3  討  論    對人類腫瘤標(biāo)本的免疫組化分析顯示，在大多腫瘤組織中HIF1呈過度表達(dá)，HIF1的表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的增殖、浸潤及轉(zhuǎn)移能力相關(guān)，其高表達(dá)常提示不良的預(yù)后2, 3。在缺氧應(yīng)激反應(yīng)中，

21、HIF1是信號傳遞過程中極為重要的因子，調(diào)控的靶基因涉及細(xì)胞的生長、糖代謝、氧的轉(zhuǎn)運(yùn)和利用等多個方面。PI3K/Akt是近年發(fā)現(xiàn)的信號傳遞因子。Akt使HIF1轉(zhuǎn)錄活性增強(qiáng)是通過使細(xì)胞內(nèi)可利用的蛋白池量增加來實現(xiàn)的4。蛋白水平下降將導(dǎo)致HIF1 DNA結(jié)合能力下降，且對其下游目的基因的調(diào)控能力下降。而PI3K/Akt通路表達(dá)增強(qiáng)或?qū)kt負(fù)性調(diào)控基因PTEN阻斷后，在多種細(xì)胞類型中，HIF1蛋白水平、DNA結(jié)合或轉(zhuǎn)錄活性均有增加5。抑制HIFl的表達(dá)已經(jīng)成為腫瘤治療的新思路，作為新的抗腫瘤靶點(diǎn)正在進(jìn)行藥物研制開發(fā)。    從肺癌診斷分期來看，大多數(shù)患者一經(jīng)發(fā)現(xiàn)就為

22、中晚期。中晚期肺癌患者，素體本虛，臟腑失調(diào)，邪毒盤踞，加之“久病及腎”，損耗腎中精氣，導(dǎo)致腎陰陽失調(diào)。故晚期肺癌多見動則氣喘，腰酸膝軟，食欲不振，舌淡苔少，脈沉細(xì)無力等，屬精氣虧虛，癌毒蘊(yùn)結(jié)。因此，精氣虧虛是肺癌發(fā)生、發(fā)展的重要內(nèi)在因素。據(jù)此，徐振曄教授提出了以益氣養(yǎng)精為主治療晚期非小細(xì)胞肺癌的學(xué)術(shù)觀點(diǎn)，抓住肺癌患者本虛標(biāo)實的病機(jī)，益氣養(yǎng)精為主，兼以解毒抗癌，達(dá)到治病求本、標(biāo)本兼顧的目的。肺巖寧方中生黃芪為補(bǔ)氣要藥，藥理研究證明其能提高免疫系統(tǒng)功能，具有抑癌作用，與補(bǔ)氣健脾之白術(shù)合用，共補(bǔ)肺脾腎之虛；黃精補(bǔ)腎益精，滋補(bǔ)肺脾，與女貞子二藥合用，滋腎養(yǎng)陰，補(bǔ)益肺肝脾之陰虛；仙靈脾補(bǔ)腎壯陽，山萸肉補(bǔ)

23、精助陽，二藥與黃精、女貞子并用，寓“陰中求陽”、“陽中求陰”之義；石見穿、七葉一枝花、蜂房攻毒消腫，散結(jié)抗癌。諸藥合用，共奏益氣養(yǎng)精、解毒散結(jié)之效。臨床研究表明肺巖寧方能夠穩(wěn)定晚期肺癌瘤體，抑制腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移，提高患者的生存質(zhì)量，延長生存期，在抗肺癌轉(zhuǎn)移方面確有良好療效6, 7。    本研究通過肺巖寧方治療A549荷瘤裸鼠，結(jié)果提示，化療組和綜合治療組的抑瘤率均大于50%，兩者的平均瘤質(zhì)量與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。肺巖寧方組的抑瘤率為34.17%，平均瘤質(zhì)量低于模型組（P<0.05）。說明肺巖寧方具有一定的抑制腫瘤生長的作用，肺巖

24、寧方和順鉑在抑制腫瘤生長方面有協(xié)同作用。RTPCR和免疫組化實驗表明，肺巖寧方并沒有明顯抑制HIF1 mRNA表達(dá)的作用，但可以顯著減少HIF1蛋白的表達(dá)。同時也觀察到肺巖寧方可以下調(diào)pAkt蛋白的表達(dá)。由此提示肺巖寧方對HIF1蛋白表達(dá)的抑制作用可能與下調(diào)pAkt蛋白表達(dá)有關(guān)，從而影響下游基因的表達(dá)，達(dá)到控制腫瘤生長的目的。    惡性腫瘤的靶向治療已經(jīng)成為研究熱點(diǎn)，目前認(rèn)為以HIF1為選擇性治療靶點(diǎn)是可行的。但中藥對HIF1信號途徑的作用研究尚不多見，本研究為進(jìn)一步研究肺巖寧方抑制血管生成的有效成分提供了線索。此外，由于中藥的組成比較復(fù)雜，其抗腫瘤作用是多靶點(diǎn)

25、和多通道的，對于該方的作用機(jī)制仍然值得進(jìn)一步研究。【參考文獻(xiàn)】  1 Vaupel P. The role of hypoxiainduced factors in tumor progression. Oncologist. 2004; 9 Suppl 5: 1017.2 Birner P, Schindl M, Obermair A, et al. Expression of hypoxiainducible factor 1 alpha in epithelial ovarian tumors: its impact on prognosis and on response t

26、o chemotherapy. Clin Cancer Res. 2001; 7(6): 16611668.3 Zhong H, De Marzo AM, Laughner E, et al. Overexpression of hypoxiainducible factor 1 alpha in common human cancers and their metastases. Cancer Res. 1999; 59(22): 58305835.4 Blancher C, Moore JW, Robertson N, et al. Effects of ras and von Hippe

27、lLindau (VHL) gene mutations on hypoxiainducible factor (HIF)1 alpha, HIF2 alpha, and vascular endothelial growth factor expression and their regulation by the phosphatidylinositol 3'kinase/Akt signaling pathway. Cancer Res. 2001; 61(19): 73497355.5 Kakinuma Y, Ando M, Kuwabara M, et al. Acetylc

28、holine from vagal stimulation protects cardiomyocytes against ischemia and hypoxia involving additive nonhypoxic induction of HIF1alpha. FEBS Lett. 2005; 579(10): 21112118.6 Wang ZQ, Xu ZY. Exploration of "QiBenefiting and EssenceNourishing Method" in the treatment of pulmonary cancer in m

29、iddle and late stage. Shanghai Zhong Yi Yao Da Xue Xue Bao. 2002; 16(4): 3031. Ch     09-08-13 17:17:00     編輯：studa201.3  統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計量資料實驗數(shù)據(jù)用x±s表示。以方差分析檢驗各組均數(shù)間的差異性，組間比較使用最小顯著差異（LSD）法。若方差不齊時改用GamesHowell校正檢驗。P<0.05視為差異有統(tǒng)計學(xué)意義

30、。2  結(jié)  果2.1  對荷瘤裸鼠的體內(nèi)抑瘤作用 DDP組和綜合治療組的抑瘤率均>50%，兩者的平均瘤質(zhì)量與模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），綜合治療組的抑瘤率大于化療組的抑瘤率，但兩者之間的平均瘤質(zhì)量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。肺巖寧方組的抑瘤率為34.17%，平均瘤質(zhì)量與模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。表1  各組荷瘤裸鼠瘤質(zhì)量及抑瘤率（略）2.2  各組腫瘤組織中HIF1 mRNA表達(dá) 綜合治療組HIF1 mRNA表達(dá)低于模型組，兩者比較差異有統(tǒng)計

31、學(xué)意義（P<0.05），但肺巖寧方組、化療組與模型組HIF1 mRNA表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義。見表2和圖1。表2  各組荷瘤裸鼠腫瘤組織HIF1 mRNA的表達(dá)（略）2.3  HIF1和pAkt蛋白表達(dá)  DDP組、肺巖寧方組和綜合治療組HIF1蛋白表達(dá)低于模型組(P<0.01)，綜合治療組的表達(dá)最低。肺巖寧方組和綜合治療組pAkt表達(dá)均顯著低于模型組（P<0.05）。見表3和圖2、3。表3  各組荷瘤裸鼠腫瘤組織中HIF1和pAkt蛋白表達(dá)（略）3  討  論    對人類腫瘤標(biāo)本的免疫

32、組化分析顯示，在大多腫瘤組織中HIF1呈過度表達(dá)，HIF1的表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的增殖、浸潤及轉(zhuǎn)移能力相關(guān)，其高表達(dá)常提示不良的預(yù)后2, 3。在缺氧應(yīng)激反應(yīng)中，HIF1是信號傳遞過程中極為重要的因子，調(diào)控的靶基因涉及細(xì)胞的生長、糖代謝、氧的轉(zhuǎn)運(yùn)和利用等多個方面。PI3K/Akt是近年發(fā)現(xiàn)的信號傳遞因子。Akt使HIF1轉(zhuǎn)錄活性增強(qiáng)是通過使細(xì)胞內(nèi)可利用的蛋白池量增加來實現(xiàn)的4。蛋白水平下降將導(dǎo)致HIF1 DNA結(jié)合能力下降，且對其下游目的基因的調(diào)控能力下降。而PI3K/Akt通路表達(dá)增強(qiáng)或?qū)kt負(fù)性調(diào)控基因PTEN阻斷后，在多種細(xì)胞類型中，HIF1蛋白水平、DNA結(jié)合或轉(zhuǎn)錄活性均有增加5。抑制HIF

33、l的表達(dá)已經(jīng)成為腫瘤治療的新思路，作為新的抗腫瘤靶點(diǎn)正在進(jìn)行藥物研制開發(fā)。    從肺癌診斷分期來看，大多數(shù)患者一經(jīng)發(fā)現(xiàn)就為中晚期。中晚期肺癌患者，素體本虛，臟腑失調(diào)，邪毒盤踞，加之“久病及腎”，損耗腎中精氣，導(dǎo)致腎陰陽失調(diào)。故晚期肺癌多見動則氣喘，腰酸膝軟，食欲不振，舌淡苔少，脈沉細(xì)無力等，屬精氣虧虛，癌毒蘊(yùn)結(jié)。因此，精氣虧虛是肺癌發(fā)生、發(fā)展的重要內(nèi)在因素。據(jù)此，徐振曄教授提出了以益氣養(yǎng)精為主治療晚期非小細(xì)胞肺癌的學(xué)術(shù)觀點(diǎn)，抓住肺癌患者本虛標(biāo)實的病機(jī)，益氣養(yǎng)精為主，兼以解毒抗癌，達(dá)到治病求本、標(biāo)本兼顧的目的。肺巖寧方中生黃芪為補(bǔ)氣要藥，藥理研究證明其能提高免疫系

34、統(tǒng)功能，具有抑癌作用，與補(bǔ)氣健脾之白術(shù)合用，共補(bǔ)肺脾腎之虛；黃精補(bǔ)腎益精，滋補(bǔ)肺脾，與女貞子二藥合用，滋腎養(yǎng)陰，補(bǔ)益肺肝脾之陰虛；仙靈脾補(bǔ)腎壯陽，山萸肉補(bǔ)精助陽，二藥與黃精、女貞子并用，寓“陰中求陽”、“陽中求陰”之義；石見穿、七葉一枝花、蜂房攻毒消腫，散結(jié)抗癌。諸藥合用，共奏益氣養(yǎng)精、解毒散結(jié)之效。臨床研究表明肺巖寧方能夠穩(wěn)定晚期肺癌瘤體，抑制腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移，提高患者的生存質(zhì)量，延長生存期，在抗肺癌轉(zhuǎn)移方面確有良好療效6, 7。    本研究通過肺巖寧方治療A549荷瘤裸鼠，結(jié)果提示，化療組和綜合治療組的抑瘤率均大于50%，兩者的平均瘤質(zhì)量與模型組比較差異有統(tǒng)計

35、學(xué)意義（P<0.01）。肺巖寧方組的抑瘤率為34.17%，平均瘤質(zhì)量低于模型組（P<0.05）。說明肺巖寧方具有一定的抑制腫瘤生長的作用，肺巖寧方和順鉑在抑制腫瘤生長方面有協(xié)同作用。RTPCR和免疫組化實驗表明，肺巖寧方并沒有明顯抑制HIF1 mRNA表達(dá)的作用，但可以顯著減少HIF1蛋白的表達(dá)。同時也觀察到肺巖寧方可以下調(diào)pAkt蛋白的表達(dá)。由此提示肺巖寧方對HIF1蛋白表達(dá)的抑制作用可能與下調(diào)pAkt蛋白表達(dá)有關(guān)，從而影響下游基因的表達(dá)，達(dá)到控制腫瘤生長的目的。    惡性腫瘤的靶向治療已經(jīng)成為研究熱點(diǎn)，目前認(rèn)為以HIF1為選擇性治療靶點(diǎn)是可行的。但中藥對HIF1信號途徑的作用研究尚不多見，本研究為進(jìn)一步研究肺巖寧方抑制血管生成的有效成分提供了線索。此外，由于中藥的組成比較復(fù)雜，其抗腫瘤作用是多靶點(diǎn)和多通道的，對于該方的作用機(jī)制仍然值得進(jìn)一步研究?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1 Vaupel P. The role of hypoxiainduced factors in tumor pro