無菌檢驗-隔離器系統(tǒng)驗證

1、無菌檢驗隔離器系統(tǒng)驗證USP <1208>Sterility TestingValidation of Isolator System/General informance這部分是用于無菌檢驗隔離器系統(tǒng)的簡明驗證指南（注意：在這個章節(jié)中，“已滅菌”指的是物品或者表面的微生物被清除的狀態(tài)）在19世紀80年代中期，建立一個無菌檢驗環(huán)境的隔離器就已經開始使用。隔離器可以通過密封的方法或者采用過濾除菌空氣保持正壓的方法，創(chuàng)造一個無菌的環(huán)境。當隔離器處于密閉狀態(tài)時，僅僅能夠在隔離器內部和快速傳遞倉傳遞物品；當隔離器打開時，允許通過一個特殊設計的并經過驗證可以避免污染物進入的開口遞出物品。隔離

2、器采用柔軟的塑料（例如聚氯乙烯）、硬塑料、玻璃或不銹鋼制造。由于隔離器系統(tǒng)從根本上避免了分析人員與物品的直接接觸，因此在無菌檢驗操作時可以避免物品和輔助設備被污染。當隔離器內部與環(huán)境完全隔離時，隔離器內部的物品是無菌條件下的傳遞。操作者穿著半身衣在隔離器內部進行無菌操作，半身衣是連接在隔離器墻體上的柔軟的部分，操作者穿著半身衣有足夠的范圍在隔離器內部進行操作，操作者也可以通過連接在隔離器墻體上的袖子和手套進行操作。在隔離器中，不要求操作者穿著特殊的無菌衣進行操作，允許操作者穿著標準的實驗室服裝進行操作。為確保隔離器內部無菌。使用殺孢子劑對隔離器內部進行滅菌處理。隔離器設計和建造空氣處理系統(tǒng)用于

3、無菌檢驗的隔離器需要配備除菌過濾器（HEPA過濾器是被要求的）。靜態(tài)時，要求隔離器塵埃粒子符合美國聯(lián)邦標準209E的100級空氣質量要求（看潔凈室微生物評價和其他環(huán)境控制1116）。動態(tài)時，不要求隔離器符合100級空氣質量要求，不要求隔離器內部的空氣流速或者空氣交換頻率。隔離器系統(tǒng)是要求防止泄漏的，然而，它不是通常意義上的防止隔離器與外界環(huán)境進行的空氣交換。當與外界環(huán)境直接相連的門打開時，隔離器內部的正壓保證隔離器內部的無菌環(huán)境不被污染。用于無菌檢驗的隔離器內部空氣流可以是單向流或者湍流。傳輸倉和門隔離器有一個附屬的“傳遞通路”殺菌器，通過傳輸通道殺菌器可以直接將無菌的培養(yǎng)基、無菌的稀釋液、無

4、菌的裝備等傳遞進隔離器系統(tǒng)。一般設計成快速傳遞倉或門（RTPs），通過快速傳遞倉或門可以把兩個隔離器彼此相連，無菌的物品就能夠從一個隔離器傳遞到另一個隔離器。通過快速傳遞倉，兩個隔離器或者一個隔離器和一個容器就可以在普通環(huán)境中連接。通過密封圈或法蘭，將傳遞倉的非無菌表面連接。用墊圈壓緊來保證氣密性，避免微生物進入。當兩個傳遞倉法蘭連接形成一個密封通道時，存在一個狹長的墊圈帶，這個部位可能存在微生物污染。因此一旦連接完，在使用傳遞倉傳遞物品之前，必須立即用殺孢子劑對墊圈暴露部分進行處理。并且在傳遞物品時，應當注意無菌技巧的使用，避免物品或手套接觸墊圈。將墊圈裝配在法蘭上時，應當按照傳遞倉生產商的

5、建議進行預防性的維護和潤滑。傳遞倉墊圈應當按照（生產商的）的要求定期更換并且定期檢查，破損的墊圈不能夠保證真正的密封。隔離器安裝位置的選擇用于無菌檢驗的隔離器不需要安裝在潔凈區(qū)，但是安裝在一個限制非授權人員進入的區(qū)域仍然是重要的。安裝時，應當使隔離器周圍有足夠的范圍，以便移動隔離器，傳遞物料，以及通常的維護。隔離器所在的房間不要求進行環(huán)境監(jiān)測。隔離器房間溫度和濕度對于操作者的安全和舒適是重要的，溫濕度對于除菌和凈化技術的影響效果也很關鍵。如果隔離器位于空氣補給窗的氣流通道中，當隔離器采用蒸汽滅菌時，空氣氣流會使隔離器個別部位溫度較低形成冷凝水。當采用對溫度敏感的滅菌方法時，隔離器房間的溫度應當

6、是均一的。隔離器系統(tǒng)的驗證無菌檢驗合格與否是產品放行的前提時，在進行無菌檢驗之前，隔離器系統(tǒng)的驗證必須完成。為了核實隔離器及其輔助設備能夠用于進行無菌檢驗，隔離器系統(tǒng)的驗證可以分成三個部分：安裝驗證、性能驗證、操作驗證。在進行無菌檢驗隔離器系統(tǒng)驗證過程中，應當考慮到下面的觀點。在驗證程序的特定階段（例如IQ、OQ、PQ），各個階段試驗的任務是不被確定的，在隔離器用于確定的檢測前，隔離器的功能應當被驗證并且有文字記錄。安裝確認IQ階段包括隔離器系統(tǒng)詳細的外觀描述，例如隔離器尺寸、內部結構、所用的材料。關于接觸面和傳遞系統(tǒng)，要清晰的畫圖并標注尺寸。設計的隔離器是否符合使用的規(guī)格需要被核實，例如空氣

7、補給、真空、外部排氣、溫濕度控制等。其他與隔離器系統(tǒng)一起使用的設備也要詳細描述；任何設計規(guī)格的修訂都應當詳細描述。設備指南和復印件應當編成目錄并保存，在需要的時候，操作者可以得到并重新查閱。一旦設計規(guī)格符合性被核實，所有的圖紙、方法和設備圖要編成目錄，保存并能夠重新得到。所有的文檔應重新被審閱，便于核實能夠反映出安裝系統(tǒng)的關鍵屬性要求。這樣就建立了符合隔離器系統(tǒng)設計規(guī)格和安裝要求通用的基準。在故障模式下或高風險情況下進行分析時，可能導致試驗失敗的潛在的過程控制問題和設備問題可能被發(fā)現(xiàn)，這些問題應當進行鑒定并記錄在文檔中。如果必要，系統(tǒng)可以被修改，以便將失敗的風險降到最低點，并且關鍵點的控制方法

8、被建立。安裝確認的結果被總結成為一個安裝確認報告，建議包括下列文檔。 設備-設備應符合設計規(guī)格并被列表記錄。IQ報告應核實：符合設計規(guī)格的設備被接收，并且按照生產廠商的要求進行安裝。結構材質-隔離器系統(tǒng)關鍵部位的結構材質經檢測是符合設計要求的。對隔離器材質的殺菌方法兼容性應當被核實。儀表-儀表被核實符合其精度要求并列表。功能規(guī)格-所有操作功能，例如在操作手冊、流程、儀器圖表中指明的功能，都應當被核實能夠執(zhí)行并且符合規(guī)格要求。隔離器系統(tǒng)和其他系統(tǒng)的所有連接部分應進行審核，其功能應被核實符合設計要求。過濾器證明-HEPA過濾器和微生物截留過濾器的測試和證書；測試結果和證書復印件應包括在IQ報告中。

9、核對采購合同，核實空氣過濾系統(tǒng)符合規(guī)格要求。計算機軟件-所有的和隔離器系統(tǒng)有關系的計算機軟件列出名稱、規(guī)格、文檔編號。計算機系統(tǒng)盤被檢查貼簽并安全保存。操作驗證OQ階段核實隔離器系統(tǒng)的操作能夠符合說明書的功能。操作性能檢查-這個試驗核實所有的警報和警報的功能符合說明書要求。系統(tǒng)所有設置點和可調整的參數(shù)都應當被核實符合規(guī)定的要求。隔離器完整性檢測-在通常的操作條件下，隔離器應保持完整性。在隔離器載物并使用化學殺菌劑滅菌前，一個泄露試驗可以證明隔離器符合廠家說明書要求并且是安全的。為了避免外界污染，隔離器通常在20-50Pa正壓下進行操作。如果隔離器系統(tǒng)要求一個恒定的正壓，驗證過程中必須核實：操作

10、時的壓力設置值能夠維持并且可以控制。滅菌周期確認-執(zhí)行一個無菌周期，以便核實操作的實際數(shù)值與無菌周期的各個步驟情況以及設置數(shù)值一致?？梢圆捎脦追N不同的滅菌方法來除去隔離器和輔助系統(tǒng)的微生物。可以用于隔離器滅菌的化學試劑包括過氧乙酸、二氧化氯、臭氧、過氧化氫，不同的試劑有不同的暴露條件和過程控制。選定的滅菌方法應符合廠家的操作要求，并且在實用規(guī)程中對這些方法進行描述是十分關鍵的。使用過氧化氫蒸汽滅菌時，隔離器房間的溫度和濕度的控制是關鍵的。隔離器內部的溫度也是重要的，尤其在使用過氧化氫蒸汽滅菌過程中的影響是非常重要的，關鍵在于保持過氧化氫的濃度，避免低于過氧化氫的冷凝點。一些化學試劑，例如二氧化

11、氯和臭氧，要求在滅菌前預先增加隔離器的濕度。如果采用對濕度有較高的要求的滅菌方法時，在OQ中，控制濕度的能力必須被核實。滅菌劑的濃度和濃度分布情況也是重要的。當滅菌劑以氣態(tài)或蒸汽狀態(tài)存在時，它的濃度可以通過化學指示劑、光譜方法或電極檢測。滅菌劑分布情況也可以使用化學指示劑測量（注意：化學指示劑僅能夠提供定性的而不是定量的信息）。采用滅菌劑在氣態(tài)或蒸汽的狀態(tài)下進行滅菌時，要求隔離器內部使用風機來均勻分布滅菌劑。風機的位置和方向可以進行調節(jié)以保證適宜的氣流分布。由于架子、設備、手套、袖子裝置和半身衣，能夠影響氣流分配模式，必須對隔離器滿載狀態(tài)下的氣流分布進行檢測，物品的擺放情況進行詳細描述并以文件

12、形式記錄。有時使用更小的傳遞隔離器作為便攜式表面滅菌單元，待驗物品和輔助用具通過傳遞倉進入隔離器之前，這些物品和用具在便攜式表面隔離器中進行化學滅菌。在OQ過程中，應制定出便攜式表面滅菌器中物品和用具的擺放情況，審核擺放圖并記錄在OQ上。（注意：化學滅菌劑作用在設備表面，因此，一些被遮蓋的設備表面能夠殘留微生物并存活）。當達到殺菌劑作用時間后，可以使用通過除菌裝置的新鮮空氣或其他方式處理過的新鮮空氣將殺菌劑從隔離器中移走。通過一個向外開放的通道，氣體通過排風口排入大氣；或者通過一個密閉的通道，在通道中使用一個殺菌裝置移走并消除滅菌劑。如果使用一個向外開放的排風通道，排放系統(tǒng)的氣流和安全性應當被

13、檢測。滅菌周期的研究-當OQ完成后，進行滅菌周期的研究以便建立日常滅菌控制過程必要的參數(shù)。一些普遍使用在工業(yè)中的無菌工藝驗證的方法是可行的，例如生物負荷量和過度殺滅。滅菌工藝進行生物指示劑挑戰(zhàn)試驗。生物指示劑的孢子數(shù)和耐熱性是已知的。無論如何，應該得到生物指示劑真實的D值；（看生物指示劑-耐熱性能試驗55）；從生物指示劑供應商處獲得D值是可以接受的。如果不可能獲得準確的D值，同時無法證明滅菌劑濃度的有效性，可以使用半個周期（循環(huán)）的方法對整個周期（循環(huán)）進行確認。性能驗證PQ是核實隔離器系統(tǒng)的功能是符合操作者的要求。PQ過程完成后，滅菌周期是適合的，排出口的滅菌劑被檢測是適合的，所有的PQ過程

14、的數(shù)據(jù)應該被統(tǒng)計，分析，存檔。清洗確認-，在通常情況下，對于無菌檢驗來說，清潔不是關鍵的，但是，殘留的產品可能會對檢驗有影響，有殺菌效果產品的殘留對檢驗結果的影響尤其顯著，在檢測低水平污染時，這些殘留的物質會對檢測產生影響。由于粉末容易擴散，殺菌性粉末產品的殘留對檢驗結果的影響是重要的。對于無菌檢驗隔離器系統(tǒng)和操作者的要求來說，沒有肉眼可見污染這種清洗水平是合適的。清洗方法、周期、設備、清洗隔離器中所用的材料記錄在文件中。無菌驗證-隔離器內表面、隔離器內的設備、拿進隔離器的各種物料都應當去除微生物。隔離器表面、無菌檢驗設備、檢驗物品的滅菌和產品接觸部位或者產品藥物成分接觸部位的滅菌是不同的。隔

15、離器滅菌可以用過度滅菌的log降低值來評估實現(xiàn)。如果超過滅菌周期，無菌保證水平不再被確定。隔離器滅菌操作完成之后，通過空氣過濾系統(tǒng)的維持，好的物品傳遞技術的采用，更重要的是：經過無菌處理的隔離器手套完整性的保持，隔離器的無菌性被保證。通過陰性分數(shù)法或者過度殺滅法可以證實，用于隔離器、試驗物品、無菌檢驗用設備的滅菌方法可以使某種合適的、高抗性的生物指示劑的微生物數(shù)下降6個log降。（看用于滅菌的生物指示劑1035）。過度殺滅分析法適用于每單位104孢子數(shù)的生物指示劑，而陰性分數(shù)法適用于每單位孢子數(shù)大于等于105的生物指示劑。使用足夠數(shù)量的生物指示劑進行試驗可以從統(tǒng)計學上證明滅菌效果是可以再現(xiàn)的以

16、及滅菌劑的分布是合適的。隔離器內設備和物品滿載時，需要用更多的指示劑進行試驗。因此，沒有一個或者更多的足夠量的傳感器來測量殺菌劑的濃度時，增加生物指示劑的放置是可以考慮的。在連續(xù)三次滅菌試驗中，六個log降的殺菌能力是證明可以滅菌的。操作者建立隔離器再次滅菌的周期。這個周期可以是短短的幾天，也可以是幾周的時間，建立的依據(jù)是無菌保持能力（看隔離器內部環(huán)境無菌保持）包裝完整性確認一些材料對殺菌劑有影響，這些材料能抑制微生物的生長。我們關注的是殺菌劑在產品包裝上的穿透（能力），在一些輔助設施例如過濾裝置和管道的穿透力、在一些能夠和產品、培養(yǎng)基、無菌試驗的稀釋劑接觸的材料上的穿透力。在滅菌過程中，操作

17、者有責任核實包裝物、培養(yǎng)基、輔助物品在被批準使用的滅菌過程中沒有受到影響。帶旋轉帽的管狀容器、膠塞密封的小瓶、卷曲的褶皺已經被證明能夠降低殺菌劑的穿透力。金屬箔包裝并且密封的容器能夠防止殺菌劑的進入；然而，這些情況也能夠導致一些表面不被滅菌。在多數(shù)情況下，在進行無菌檢驗之前，操作者使用殺菌劑處理產品包裝表面來減少進入隔離器物品的生物負荷量。操作者有責任通過驗證證明：使用殺菌劑處理產品包裝這個過程，存在于產品內部的低水平的微生物污染沒有受到殺菌劑的影響，不會影響到檢驗的檢出限度。建議用化學和微生物試驗來檢測包裝物對污染的抵制能力。經過隔離器全部的滅菌過程后，殺菌劑對于細菌和真菌的抑制情況的驗證需

18、要進行（參照無菌檢驗71）。對于醫(yī)療裝置的包裝、藥品的包裝和密封系統(tǒng)包裝的要求都是一致的。不論無菌檢驗用培養(yǎng)基還是環(huán)境控制用的培養(yǎng)基，在無菌檢驗時，都必須符合需氧菌、厭氧菌、真菌的生長促進試驗（無菌檢驗71）。隔離器內部環(huán)境的無菌保持在一個無菌周期內，隔離器系統(tǒng)保持內部環(huán)境無菌的能力必須被驗證。隔離器系統(tǒng)出現(xiàn)故障或者隔離器內部的偶然污染情況下的微生物必須被檢測。微生物檢測通常包括一個例行的取樣程序，它可以包括，例如，滅菌后的第一天和無菌保持期的最后一天。放置在隔離器中的培養(yǎng)基被證明是無菌的。隔離器內部可以使用平面接觸雙碟或者棉簽搽拭監(jiān)控。然而，因為培養(yǎng)基殘留會使隔離器產生染菌的風險，因此，最好在檢驗完成后進行檢測。如果試驗中有培養(yǎng)基殘留，細心地從隔離器內部清理干凈。空氣取樣和培養(yǎng)基檢測雙碟可以使用，但它們在檢測隔離器內部非常低水平的污染時不是很靈敏。最可能污染的途徑是檢驗用具和樣品進入隔離器的過程。驗證所有進入隔離器內部的物品是無菌的這一點是關鍵的，也應當定期檢查墊圈，確保其完整，避免微生物的進入。手套和半身衣是另一個