皮膚光過敏反應(yīng)試驗(yàn)

1、皮膚光變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)Skin Photoallergy Test1. 范圍 本方法規(guī)定動(dòng)物皮膚光變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)的基本原則、要求與方法 本方法適用于化妝品原料和產(chǎn)品的皮膚光變態(tài)反應(yīng)檢測(cè)2. 規(guī)范性引用文件GB 14924.3-2010 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 配合飼料營(yíng)養(yǎng)成分GB 14925-2010/XG1-2011 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 環(huán)境及設(shè)施國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)第 1 號(hào)修改單光感作性?；捚钒踩栽u(píng)価忙関歹召指針2015 （日本化粧品工業(yè)連合會(huì)編，2015年11月27日出版，薬事日?qǐng)?bào)社）3. 試驗(yàn)?zāi)康?本試驗(yàn)用于評(píng)估與預(yù)測(cè)人體重復(fù)接觸化妝品原料及其產(chǎn)品，并在日光照射下引起皮膚光變態(tài)反應(yīng)的可能性。4. 定義photoirrit

2、ation ）與光變態(tài)誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生光致敏狀 引起特定的皮膚反應(yīng)，4.1 光敏性（ Photosensitivity ） 廣義的光敏性包括光毒性 （Phototoxicity ，又稱為光刺激性，Photoallergy ）。4.2 皮膚光變態(tài)反應(yīng)（皮膚光過敏反應(yīng)， Skin Photoallergy ） 皮膚接觸受試物并經(jīng)過紫外線照射， 通過作用于機(jī)體免疫系統(tǒng)， 態(tài)，經(jīng)過一定間歇期后， 皮膚再次接觸同一受試物并在紫外線照射下， 其反應(yīng)形式包括：紅斑，水腫等。5. 原理 皮膚光變態(tài)反應(yīng)是一種細(xì)胞介導(dǎo)的由光激活的皮膚免疫性反應(yīng)，是IV 型過敏反應(yīng)的特殊類型，系光感物質(zhì)經(jīng)皮吸收或通過循環(huán)到達(dá)皮膚后與吸

3、收的光線在表皮細(xì)胞層發(fā)生的不良 反應(yīng)。 目前較為公認(rèn)的原理為： 光感物質(zhì)吸收光能后成激活狀態(tài)， 并以半抗原形式與皮膚中 的蛋白結(jié)合成受試物一蛋白結(jié)合物， 經(jīng)表皮的郎罕氏細(xì)胞傳遞給免疫活性細(xì)胞， 引起淋巴細(xì) 胞致敏等免疫反應(yīng)。 致敏的淋巴細(xì)胞再次接觸同一抗原時(shí)釋放出淋巴因子， 導(dǎo)致一系列有害 反應(yīng)。6. 試驗(yàn)的基本原則6.1 光化學(xué)品安全性評(píng)價(jià)的一般原則化妝品原料在紫外可見（UV/VIS ）光譜（290-700 nm）有吸收，具有光穩(wěn)定性， 以及根據(jù) SAR 結(jié)果提示具有潛在的或不良的光效應(yīng)。如果某物質(zhì)在 290-700nm 的摩爾消光系數(shù)不超過 1000 L/mol. cm 時(shí)，無(wú)需提供光過敏

4、試 驗(yàn)的相關(guān)數(shù)據(jù)。6.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物頸部去毛皮膚通過多次皮膚涂抹誘導(dǎo)劑量的化妝品原料后 （可提前給予佐劑、 皮膚損傷處理以增強(qiáng)敏感性）且多次暴露于一定劑量的紫外線（日光）下，誘導(dǎo)特定免疫系 統(tǒng)（誘導(dǎo)階段） ，經(jīng)過一定間歇期后，在動(dòng)物背部去毛皮膚給予激發(fā)劑量的受試物后暴露于 一定劑量的紫外線 （日光） 下，觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物并與對(duì)照動(dòng)物比較對(duì)激發(fā)接觸受試物的皮膚反 應(yīng)強(qiáng)度。6.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)環(huán)境一般選用健康、成年雄性或雌性白色豚鼠，體重350500g，雌性動(dòng)物應(yīng)選用未孕或未曾產(chǎn)仔的。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及實(shí)驗(yàn)環(huán)境設(shè)施應(yīng)符合國(guó)家相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)。選用豚鼠維持飼料，飲用無(wú)菌純化水， 注意以合適的方式補(bǔ)充適量 Vc 。6.4

5、 動(dòng)物試驗(yàn)前準(zhǔn)備試驗(yàn)前動(dòng)物要在實(shí)驗(yàn)環(huán)境中至少適應(yīng)3d5d。將動(dòng)物隨機(jī)分為受試物組、陰性（溶劑）對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組，誘導(dǎo)接觸開始24h前在動(dòng)物頸部給動(dòng)物備皮（去毛），避免損傷皮膚。試驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)應(yīng)記錄動(dòng)物體重。6.5 無(wú)論在誘導(dǎo)階段或激發(fā)階段均應(yīng)對(duì)動(dòng)物進(jìn)行全面觀察包括全身反應(yīng)和局部反應(yīng)，并作 完整記錄。7. 試驗(yàn)方法 根據(jù)日本化妝品安全性評(píng)價(jià)指南（ 2015）中“光變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)”中的推薦，本試驗(yàn)方法選用 Adjuvant and Strip （ 佐劑和角質(zhì)剝離 ）法。以下動(dòng)物試驗(yàn)方法以 Adjuvant and Strip （佐 劑加角質(zhì)剝離法）為例。7.1 動(dòng)物與分組動(dòng)物分為受試物組，陽(yáng)性對(duì)

6、照組，陰性對(duì)照組；每組至少 5只動(dòng)物。如果試驗(yàn)?zāi)康陌?含獲取受試物致敏強(qiáng)度值， 并對(duì)受試物進(jìn)行光變態(tài)強(qiáng)度的分級(jí)， 則每組至少需要 10 只動(dòng)物。7.2 劑量水平誘導(dǎo)接觸階段的受試物濃度為能引起皮膚輕度刺激反應(yīng)的最高濃度，激發(fā)接觸階段的 受試物濃度為不能引起皮膚刺激反應(yīng)的最高濃度。 試驗(yàn)濃度水平可以通過少量動(dòng)物 （ 23 只） 的預(yù)試驗(yàn)獲得。受試物、陽(yáng)性物、陰性對(duì)照的誘導(dǎo)與激發(fā)濃度選擇：通過預(yù)試驗(yàn)，排除原發(fā)皮膚刺激 性與光毒性后的合適的濃度。通常選取的陽(yáng)性物在所選取的濃度下其致敏率應(yīng)為輕度或中 度。7.3 陽(yáng)性物常用較強(qiáng)的陽(yáng)性物為四氯代水楊酰苯胺（ tetracholosalicylanilid

7、e,TCSA ）或其它多鹵代水 楊酰苯胺（如三溴代水楊酰苯胺，3,5,4 -Tribromosalicylanilide ，TBS）。弱的陽(yáng)性物可選擇6-甲基香豆素、硫氯酚等。常用陽(yáng)性物的溶劑為丙酮、乙醇或二者按一定比例的混合物。每次試驗(yàn)均需設(shè)陽(yáng)性對(duì)照物組。7.4 增敏劑的配制本試驗(yàn)以1: 1（v/v）完全弗氏佐劑（FCA）與生理鹽水的混合物作為誘導(dǎo)階段的增敏劑。7.5 UV光源7.5.1 光源選擇通常受試物的活化吸收波長(zhǎng)需包含在所選光源的光譜范圍之內(nèi)。誘導(dǎo)階段與激發(fā)階段均選擇波長(zhǎng)為320nm400nm的UVA，如含有UVB，其劑量不得超過0.1J/cm2。照射劑量誘導(dǎo)階段與激發(fā)階段照射劑量均

8、設(shè)為10.2J/cm2。7.5.3 強(qiáng)度的測(cè)定用前需用輻射計(jì)量?jī)x在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肩部（誘導(dǎo)階段）、背部（激發(fā)階段）照射區(qū)設(shè)數(shù) 個(gè)點(diǎn)測(cè)定光強(qiáng)度（mW/cm2），以平均值計(jì)。照射時(shí)間的計(jì)算：以照射劑量為10.2J/cm2為例，按下式計(jì)算照射時(shí)間。照射時(shí)間（min）=照射劑量(10200mJ/cm2)光強(qiáng)度mJ/(cm2 s) 60注：1mW/cm 2 = 1mJ/cm2/sec7.6 試驗(yàn)步驟7.6.1 備皮正式試驗(yàn)前l(fā)8-24h將動(dòng)物頸部皮膚去毛，去毛面積約為2 X 4 cm2，試驗(yàn)部位皮膚需完好，無(wú)損傷及異常。7.6.2 光誘導(dǎo)階段的處理在動(dòng)物頸部去毛區(qū)的四角分別皮內(nèi)注射0.1ml FCA與生理鹽水

9、的1:1 （v/v）混合乳劑（只注射一次）,然后在敷用區(qū)域以透明膠帶粘附并揭開，反復(fù)數(shù)次以剝?nèi)ゲ糠直砥そ琴|(zhì)層，再將受試物（陽(yáng)性對(duì)照組、陰性對(duì)照組則涂抹陽(yáng)性物或陰性（溶劑）對(duì)照物）約0.1 ml（g）均勻開放涂抹在去毛區(qū)，30min后用UVA進(jìn)行照射（照射劑量為10.2 J/cm2, UVB劑量劑量不得 超過0.1J/cm2（試驗(yàn)前用 紫外輻照計(jì)在 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 頸背部照射區(qū)域測(cè)定光 強(qiáng)度2（mW/cm ），計(jì)算照射時(shí)間），詳見圖1。去角質(zhì)、開放涂布受試物、紫外照射的過程每天進(jìn)行一次，共計(jì)進(jìn)行5次。Tesl SubslanceFiwtmdl adjiijvanc0.1 mlUVAA INDUCTIO

10、N PHASE (A)B INDUCTFON PHASE (B)圖1光誘導(dǎo)階段的佐劑注射、受試物涂敷及紫外線照射示意圖7.6.3 光激發(fā)階段的處理 光誘導(dǎo)處理完成后兩周，將豚鼠背部脊柱兩側(cè)皮膚區(qū)域去毛，去毛區(qū)每塊面積約為2X 2 cm2,實(shí)際涂抹面積為1.5 X 1.5 cm2，共46塊去毛區(qū)（見圖2）。將動(dòng)物固定，在動(dòng)物 去毛區(qū)3和4涂敷0.02ml（g）受試物邙日性對(duì)照組、陰性對(duì)照組則涂抹陽(yáng)性物或陰性（溶劑）對(duì)照物） （涂抹區(qū)域見圖3）。如果受試物為化妝品產(chǎn)品，激發(fā)階段的最大涂敷量不超過0.2ml（g） 。 30min 后，頸部去毛區(qū)和左側(cè)去毛區(qū) （1 和 3）用鋁箔覆蓋，無(wú)刺激性膠帶固定

11、，右 側(cè)去毛區(qū) （2 和 4）用 UVA 光源進(jìn)行照射。受試物涂敷劑量濃度為經(jīng)過預(yù)試驗(yàn)得到的、允許進(jìn) 行恰當(dāng)評(píng)價(jià)的濃度。光源為UV-A，照射劑量為10.2 J/cm2。7.6.4 觀察與評(píng)分光激發(fā)階段紫外照射后的 24h與48h，肉眼觀察涂抹部位的皮膚局部反應(yīng)，并評(píng)分。記錄光誘導(dǎo)階段紫外照射后的 24h，肉眼觀察涂抹照射部位的皮膚局部反應(yīng)，并評(píng)分。同時(shí) 觀察動(dòng)物的一般狀態(tài)、 行為、 體征等。 必要時(shí)可對(duì)受試物給藥部位皮膚進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。根據(jù)表 1 對(duì)每只動(dòng)物皮膚反應(yīng)評(píng)分。7.6.5 結(jié)果評(píng)價(jià)（1 ）當(dāng)受試物組動(dòng)物出現(xiàn)皮膚反應(yīng)積分2時(shí)，判為該動(dòng)物出現(xiàn)皮膚光變態(tài)反應(yīng)陽(yáng)性。（ 2）光致敏率的計(jì)算

12、方法為受試組動(dòng)物皮膚光變態(tài)反應(yīng)陽(yáng)性的動(dòng)物數(shù)/總動(dòng)物數(shù)*100% 。根據(jù)光致敏率對(duì)受試物的光變態(tài)反應(yīng)進(jìn)行強(qiáng)度分級(jí)（表2）。（ 3）光變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)成立的判定：每組動(dòng)物數(shù)設(shè)定為 5只條件下，陽(yáng)性組動(dòng)物中皮膚光變態(tài)反應(yīng)陽(yáng)性動(dòng)物數(shù)1只，且陰性 （溶劑） 對(duì)照組全部動(dòng)物中無(wú)皮膚光變態(tài)反應(yīng)陽(yáng)性動(dòng)物， 判定該光變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)系統(tǒng) 成立；每組動(dòng)物數(shù)10只條件下，20%<陽(yáng)性組致敏率w 60%,且陰性對(duì)照組致敏率 <10% 時(shí)，判定該光變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)系統(tǒng)成立。（ 4）受試物光變態(tài)反應(yīng)性的判定：每組動(dòng)物數(shù)設(shè)定為 5只條件下，受試物組動(dòng)物中皮膚光變態(tài)反應(yīng)陽(yáng)性動(dòng)物1只時(shí)，或每組動(dòng)物數(shù)10只條件下，受試物組動(dòng)物致

13、敏率20%時(shí)，判定該受試物在該濃度下具有光變態(tài)反應(yīng)性。（ 5）皮膚光變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)應(yīng)根據(jù)比較對(duì)照組和受試物組的反應(yīng)進(jìn)行評(píng)價(jià)。陽(yáng)性結(jié) 果時(shí)應(yīng)追加試驗(yàn),如：與已知陽(yáng)性物質(zhì)的比較試驗(yàn)及用其他方法（不加佐劑）進(jìn)行試驗(yàn),其 中非損傷性試驗(yàn)方法有利于進(jìn)一步對(duì)光變態(tài)反應(yīng)性進(jìn)行評(píng)價(jià)。另外, 光變態(tài)反應(yīng)與光毒是兩類較難以僅從觀察結(jié)果進(jìn)行區(qū)分的反應(yīng),必要時(shí)應(yīng)追加光毒性試驗(yàn)。/1 weeks latertLJClTATION PHASE (A)B ELICITATION PHASE 圖2光激發(fā)階段受試物涂抹與紫外照射示意圖表1光變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)皮膚反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)皮膚反應(yīng)評(píng)分紅斑和焦痂形成無(wú)反應(yīng)0輕微的紅斑（勉強(qiáng)可見）1明顯

14、紅斑（散在或小塊紅斑）2中毒-重度紅斑3嚴(yán)重紅斑（紫紅色）至輕微焦痂形成4水腫形成無(wú)水腫0輕微水腫（勉強(qiáng)可見）1中度水腫（皮膚隆起輪廓清楚）2嚴(yán)重水腫（皮膚隆起約 1cm或以上）3最高積分7表2皮膚光變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)致敏強(qiáng)度分級(jí)*，#致敏率（%）等級(jí)致敏強(qiáng)度010I弱1130II輕3160III中6180IV強(qiáng)81100V極強(qiáng)* :進(jìn)行致敏強(qiáng)度分級(jí)時(shí)，每組動(dòng)物數(shù)需增加到至少10只#:致敏率是反應(yīng)評(píng)分為 2或以上的動(dòng)物數(shù)占該組動(dòng)物總數(shù)的百分比，I級(jí)致敏度（弱致敏度）沒有意義，在實(shí)際使用下無(wú)致敏危險(xiǎn)。8 試驗(yàn)報(bào)告報(bào)告應(yīng)包括如下內(nèi)容：（1）受試物名稱、理化性狀、配制方法、所用濃度；（2）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的種屬、

15、品系、來源（注明合格證號(hào)和動(dòng)物級(jí)別）、性別、數(shù)量；（3）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境，包括飼料來源、室溫、相對(duì)濕度、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房合格證號(hào)；（ 4）試驗(yàn)方法；（5）試驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)動(dòng)物體重；（ 6）結(jié)果：以表格形式報(bào)告各組動(dòng)物皮膚反應(yīng)情況和致敏率等（建議的表格形式見表 3）；（7）結(jié)論。昭八、組受0.110.20.024810.224試 物 組 陽(yáng) 性 對(duì) 昭 八、 組480.110.20.0210.22448表3xxx對(duì)豚鼠皮膚光變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)結(jié)果（Adjuvant and Strip法）組動(dòng)誘導(dǎo)階段局部皮膚反應(yīng)評(píng)分（誘導(dǎo)照射后24h）激發(fā)階段觀察局部皮膚反應(yīng)評(píng)分（激發(fā)照射后）> 2致別物時(shí)間的動(dòng)敏數(shù)紅

16、斑（只）水腫（只）（激紅斑（只）水腫（只）物數(shù)率發(fā)照（只(射)%)后，h)受試物 劑量ml（g）紫外照0123401射劑量2J/cm23 受試物劑量ml（g）紫外照射劑量2J/cm012340123陰0.110.20.0210.224&9 試驗(yàn)結(jié)果的解釋 試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)能得出受試物的光變態(tài)反應(yīng)能力，必要時(shí)給出受試物的光致敏強(qiáng)度。 動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果只能在很有限的范圍內(nèi)外推到人類。 引起豚鼠強(qiáng)烈反應(yīng)的物質(zhì)在人群中也可能 引起一定程度的光變態(tài)反應(yīng)，而引起豚鼠較弱反應(yīng)的物質(zhì)在人群中也許不能引起光變態(tài)反應(yīng)。皮膚光變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)”起草說明一、基本情況：光變態(tài)是 IV 型超敏反應(yīng)的特殊類型，目前世界各國(guó)有關(guān)光

17、變態(tài)試驗(yàn)尚未形成統(tǒng)一的評(píng)價(jià)方 法及操作規(guī)程，推薦的各種方法的敏感性差異較大，各有優(yōu)缺點(diǎn)。 ICH 、歐盟 (EMEA) 和美國(guó) (FDA/CDER) 在免疫毒性指導(dǎo)原則中均沒有具體的評(píng)價(jià)光敏潛在性的常規(guī)非臨床試驗(yàn)方法。我國(guó)已經(jīng)發(fā)布的 “化學(xué)藥物刺激性、 過敏性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則 ”和 “天然藥物免疫毒性 (過敏性、 光過敏反應(yīng)) 研究的技術(shù)指導(dǎo)原則 ”中對(duì)光變態(tài)的評(píng)價(jià)基本上參考國(guó)外的評(píng)價(jià)方法。 推 薦采用 Adjuvant and Strip (佐劑和角質(zhì)剝離)法、 Harber 法、Horio 法、Jordan 法、Maurer 法、 Morikawa 和 Vinson 法等。而化妝品

18、安全性評(píng)價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)、規(guī)范中尚未納入。為滿足化妝品行業(yè)發(fā) 展的需要及化妝品安全監(jiān)管的需要，有必要制定規(guī)范的皮膚光變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)方法作為化妝品安全 性評(píng)價(jià)中用以補(bǔ)充化妝品原料及產(chǎn)品的光安全性檢測(cè)。二、起草過程：本試驗(yàn)方法以采標(biāo)的方式進(jìn)行撰寫編制，在起草過程中主要參照日本化妝品工業(yè)連合會(huì)所編 寫的化妝品安全性評(píng)價(jià)指南 2015中“光感作性”章節(jié)、美國(guó) EPA1982 年編寫的皮膚毒性 一書中“光變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)”章節(jié)、以及我國(guó)食品藥品監(jiān)管總局2015年 5月 13日所編寫的化學(xué)藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則 。在皮膚光變態(tài)反應(yīng)動(dòng)物試驗(yàn)方法的編寫中， 有關(guān)“化妝品原料進(jìn)行光安全性評(píng)價(jià)的基本原則”

19、、 “光變態(tài)反應(yīng)的定義” 、“光變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)的適用范圍”等內(nèi)容主要參考?xì)W洲藥品審評(píng)局(EMEA)2003 年光安全性測(cè)試指南注釋 、ICH 。試驗(yàn)動(dòng)物的選擇參照 THE SCCS NOTES OF GUIDANCE FOR THE TESTING OF COSMETIC INGREDIENTS AND THEIR SAFETY EVALUATION( 9 th revision, September 29th, 2015) 。動(dòng)物光變態(tài)試驗(yàn)(佐劑加角質(zhì)剝離法)的試驗(yàn)條件與步驟主要依據(jù)日本化妝品工業(yè)連合會(huì)所 編寫的化妝品安全性評(píng)價(jià)指南 2015，美國(guó) EPA 編寫的光變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)中相關(guān)章節(jié)、以及

20、 引用數(shù)較多兩篇核心的英文文章與 1 本專業(yè)書籍中相關(guān)章節(jié)。參照了 ICH2015 年 1 月最新修訂 的藥物光安全性評(píng)估指導(dǎo)原則 -S10-Step 5以及歐洲藥品局( EMA )對(duì)該導(dǎo)則的解讀，從中主要參考目前光安全性評(píng)價(jià)的策略與原則，光變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)發(fā)展 的現(xiàn)狀。同時(shí)主要參考 4 篇近期英文文獻(xiàn)中報(bào)道的體外光過敏檢測(cè)方法進(jìn)展情況。制定依據(jù)：本方法主要以日本化妝品工業(yè)連合會(huì)所編寫的 化妝品安全性評(píng)價(jià)指南 2015 中光變態(tài)反應(yīng) 試驗(yàn)、 EPA 編寫的為指導(dǎo)原則，具體依據(jù)如下：【1】光感作性。化粧品安全性評(píng)価忙関歹召指針2015(日本化粧品工業(yè)連合會(huì)編，2015 年11 月 27日出版，薬事日

21、報(bào)社)【 2】 Photoallegy Testing. Dermototoxicity (US EPA, 1982)【 3】 化學(xué)藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則。 【 H 】 GPT4-1 。國(guó)家食品 藥品監(jiān)管總局。 2015 年 5月 13日【 4】 THE SCCS NOTES OF GUIDANCE FOR THE TESTING OF COSMETICINGREDIENTS AND THEIR SAFETY EVALUATION( 9 th revision, September 29th, 2015)【 5】 ICH Guidance S10 on Photosafet

22、y Evaluation of Pharmaceuticals Step5. ICH, January 2015【 6】 中藥、天然藥物免疫毒性(過敏性、光過敏反應(yīng))研究的技術(shù)指導(dǎo)原則?！?Z】GPT5-1。國(guó)家食品藥品監(jiān)管總局。2005年3月。【 7】 Guidance for Industry -Photosafety Testing. (CDER FDA US DHHS, 2003)四、 主要內(nèi)容：本文主要從皮膚光變態(tài)試驗(yàn)方法所適用的范圍、所引用的規(guī)范性文件試驗(yàn)的原理、試驗(yàn)基本 原則及試驗(yàn)所涉及的相關(guān)試驗(yàn)、 方法、 步驟等方面進(jìn)行描述， 主要從動(dòng)物試驗(yàn)、 人體試驗(yàn)兩方面， 重點(diǎn)介紹了試驗(yàn)

23、所涉及的動(dòng)物選擇與分組、陰性、陽(yáng)性對(duì)照組的設(shè)置。同時(shí)分誘導(dǎo)階段與激發(fā)階 段，較為細(xì)致具體地描述了試驗(yàn)中受試物劑量設(shè)置、 光源選擇、 紫外照射水平的選擇等重要內(nèi)容， 并在試驗(yàn)方法中對(duì)于動(dòng)物備皮、佐劑注射、受試物給藥與紫外線照射的流程中各環(huán)節(jié)的實(shí)驗(yàn)條件 與操作方法進(jìn)行了細(xì)致描述。五、 其他需要說明的問題目前雖然在制藥行業(yè)與工業(yè)方面均有光變態(tài)反應(yīng)的動(dòng)物試驗(yàn)方法，但由于動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果對(duì)人 體試驗(yàn)預(yù)測(cè)性不理想、以及動(dòng)物福利方面的考慮，美國(guó)FDA 早在 2003 年即廢除了光變態(tài)反應(yīng)的動(dòng)物試驗(yàn)方法， 而 EMA 、ICH 也已經(jīng)將重點(diǎn)轉(zhuǎn)向體外替代方法。 但動(dòng)物試驗(yàn)仍然是進(jìn)行人體光變 態(tài)反應(yīng)的前提之一，對(duì)特定

24、具有光過敏性的藥品與化妝品原料的安全性評(píng)價(jià)仍具有一定意義。影響光變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)結(jié)果的因素較為復(fù)雜，除受試物本身理化特性外，試驗(yàn)方案中受試物劑 量的設(shè)置、紫外線照射劑量的設(shè)定、誘導(dǎo)階段與激發(fā)階段的具體方案、已經(jīng)是否使用佐劑的選擇 有可能影響最終的結(jié)果。光變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)方法”編制說明為進(jìn)一步完善化妝品安全技術(shù)法規(guī)體系，中國(guó)食品藥品檢定研究院組織開展了光變態(tài)反應(yīng)試 驗(yàn)方法的制訂工作。一、 必要性（一）滿足化妝品行業(yè)發(fā)展的需要。 近年來，我國(guó)化妝品生產(chǎn)和消費(fèi)均呈現(xiàn)快速發(fā)展的趨勢(shì)。隨著化妝品行業(yè)的發(fā)展和科學(xué)認(rèn)識(shí) 的提高，原有的化妝品安全評(píng)價(jià)方法在某些方面上已不能完全滿足當(dāng)前化妝品行業(yè)發(fā)展需要，亟 待進(jìn)行補(bǔ)充

25、修訂。光敏性物質(zhì)是指善于吸收太陽(yáng)光中的長(zhǎng)波紫外線的物質(zhì)。 常見的有植物性香料、 動(dòng)物性香料 以及染料、焦油、瀝青類物質(zhì)等。日常生活中經(jīng)常使用的膏霜類、香水類、香粉類化妝品中含有 的香精、染發(fā)膏中含有的各種染料等就含有各種光敏性物質(zhì)。在日光照射下，反復(fù)使用含有光敏 物質(zhì)的化妝品、化學(xué)品有可能引起光變態(tài)反應(yīng)，產(chǎn)生丘疹、紅斑等皮膚損傷。鑒于免疫系統(tǒng)的復(fù) 雜性、人與動(dòng)物種屬間的差異以及相關(guān)檢測(cè)技術(shù)發(fā)展的局限性，目前還沒有行之有效的可以預(yù)測(cè) 化學(xué)物質(zhì)潛在致敏性的評(píng)價(jià)方法。豚鼠皮膚光變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)早在 20 世紀(jì) 70 年代就已經(jīng)被引入到光敏性藥品的光安全評(píng)價(jià)方法 中，日本化妝品工業(yè)聯(lián)合會(huì)一直也使用該方法進(jìn)行化妝品原料的光安全性評(píng)價(jià)。人體光斑貼試驗(yàn) 目前主要用于藥品的光變態(tài)性檢驗(yàn)中。目前國(guó)內(nèi)缺乏對(duì)于具有光變態(tài)反應(yīng)性的化妝品原料的檢驗(yàn) 方法。因此，將其納入到化妝品安全性評(píng)價(jià)方法中，可進(jìn)一步補(bǔ)充化妝品原料及產(chǎn)品的光安全性 評(píng)估方法。（二）滿足化妝品安全監(jiān)管的需要。 在化妝品行業(yè)迅速發(fā)展的同時(shí)，化妝品安全事件頻頻發(fā)生，公眾對(duì)化妝品的質(zhì)量安全要求 和監(jiān)管期望越來越高。一些監(jiān)督過程中必需的檢驗(yàn)檢測(cè)及評(píng)價(jià)方法需要進(jìn)一步明確。在我國(guó)， 藥品等已將光變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)方法納入評(píng)價(jià)指南中，