實(shí)驗(yàn)四、花粉生活力的測定

1、實(shí)驗(yàn)四、花粉生活力的測定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模和ㄟ^實(shí)驗(yàn)掌握花粉生活力測定的具體技術(shù)和方法。二、實(shí)驗(yàn)原理：花粉生活力是指在正常條件下花粉在雌蕊上萌發(fā)的能力?；ǚ凵盍y定在雜交工作中很重要，尤其親本花期不相同需要從外地采集花粉作父本時，花粉要經(jīng)過一段較長時間的貯藏運(yùn)輸過程，因此在雜交前應(yīng)檢驗(yàn)花粉的生活力，以免應(yīng)用無生活力的花粉而造成雜交工作的失敗。三、實(shí)驗(yàn)材料：蘋果花粉四、實(shí)驗(yàn)用具與試劑：指形管、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、凹式載玻片、滴瓶、培養(yǎng)皿、天平、燒杯、玻璃棒、微波爐、濾紙、水浴鍋、計數(shù)器、鑷子；碘化鉀（KI）、碘、藍(lán)墨水、蒸餾水、蔗糖、瓊脂、硼酸等。五、實(shí)驗(yàn)步驟常用的測定花粉生活力的方法：形態(tài)觀察

2、法、碘-碘化鉀染色法、藍(lán)墨水染色法和培養(yǎng)基發(fā)芽法。1. 形態(tài)觀察法 直接在顯微鏡下觀察花粉的形態(tài)，根據(jù)花粉的典型性（如具有正常的大小、形狀、色澤等）判斷花粉的生活力，即形態(tài)正常的花粉有生活力，而一些小的、皺縮的、畸形的花粉不具有生活力。具體方法：將花粉置于載玻片上，在顯微鏡下觀察3個不同視野，要求被檢查的花粉?？倲?shù)達(dá)到100粒以上，計算正?；ǚ哿Ｕ伎倲?shù)的比率。此法簡便易行但準(zhǔn)確性差，一般只用于測定新鮮花粉的生活力。 2. 染色法(1) 碘-碘化鉀染色法 原理：正常的花粉積累淀粉較多，而不正常的花粉則少。據(jù)此，可用化學(xué)物質(zhì)染色，根據(jù)呈色反應(yīng)來間接測定花粉的正常與否和花粉生活力的差別。通常正?；ǚ?/p>

3、用I-KI染色后呈藍(lán)色，而發(fā)育不良畸形花粉則不積累淀粉，當(dāng)I-KI染色時呈黃褐色。 I-KI溶液：取2.0 g KI溶于510mL蒸餾水中，然后加入1.0 g I2待全部溶解后，再加蒸餾水至200mL，貯于棕色瓶中備用。 具體方法：取少量花粉撒于載玻片上，加一滴蒸餾水，用鑷子使花粉散開，再加一滴I-KI溶液，蓋上蓋玻片置于顯微鏡下觀察。凡被染色呈藍(lán)色表示具有生活力，呈黃褐色者為發(fā)育不良生活力弱的花粉。為了保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，要求觀察不同的3個視野，求其平均值，統(tǒng)計花粉生活力。(2) 藍(lán)墨水染色法 藍(lán)墨水溶液：正常購買的藍(lán)墨水稀釋10倍。 具體方法：取少量花粉撒于載玻片上，加一滴蒸餾水，用鑷子使花

4、粉散開，再加一滴藍(lán)墨水溶液，蓋上蓋玻片置于顯微鏡下觀察。凡被染色呈無色時表示具有生活力，呈藍(lán)黑色者為發(fā)育不良生活力弱的花粉。為了保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，要求觀察不同的3個視野，求其平均值，統(tǒng)計花粉的生活力。3. 培養(yǎng)基發(fā)芽法：人為的創(chuàng)造適合于花粉發(fā)芽的環(huán)境條件，以花粉發(fā)芽的情況來鑒定花粉生活力的強(qiáng)弱。(1) 培養(yǎng)基的制作與接種10%蔗糖+0.01%硼酸+1%瓊脂，溶于蒸餾水中，加熱煮沸即可。將配好的培養(yǎng)基保持在40的水浴鍋中保溫，即不凝固。用玻璃棒蘸一滴培養(yǎng)基滴在載玻片的凹玻片內(nèi)，然后用頭發(fā)沾少量花粉條播。將載玻片放在墊有濕潤濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)或倒扣在培養(yǎng)皿上，并貼上標(biāo)簽（花粉品種名稱、姓名和日期），將

5、培養(yǎng)皿放于25暗培養(yǎng)24h后統(tǒng)計發(fā)芽率。(2) 觀察記數(shù)在顯微鏡下觀察，每品種觀察不同的3個視野，每個視野花粉粒數(shù)目20粒，求平均值，統(tǒng)計花粉的發(fā)芽率。花粉發(fā)芽的標(biāo)準(zhǔn)，以花粉管伸長超出花粉直徑為準(zhǔn)。四、作業(yè)1繪出花粉發(fā)芽前、后的形態(tài)特征圖。2統(tǒng)計碘-碘化鉀染色法和藍(lán)墨水染色法測定花粉生活力的結(jié)果，并填寫表1。3. 統(tǒng)計培養(yǎng)基發(fā)芽法測定花粉生活力的結(jié)果，并填寫表2。4. 比較花粉生活力測定的不同方法，并分析引起花粉生活力差異的具體原因。表1 染色法測定花粉生活力結(jié)果統(tǒng)計表 染色法各視野中有活力和無活力花粉粒的數(shù)量花粉生活力(%)視野花粉?？倲?shù) (個)有活力花粉粒數(shù)量(個)無活力花粉粒數(shù)量(個)各個視野花粉生活力 (%