傳染性支氣管炎含圖解

1、傳染性支氣管炎(IB是雞的一種急性、高度接觸傳染的病毒性呼吸道和泌尿生殖道疾病。其特征是咳嗽、噴嚏、氣管啰音和呼吸道黏膜呈漿液性卡他性炎癥。如發(fā)生腎病變型傳染性支氣管炎還會出現(xiàn)病雞腎腫大、腎小管和輸尿管內(nèi)有尿酸鹽沉積等病理變化。雛雞通常表現(xiàn)流鼻液、呼吸困難等呼吸道癥狀,有時會發(fā)生死亡;產(chǎn)蛋雞則以產(chǎn)蛋量減少和蛋白品質(zhì)下降較為常見。歷史與分布本病于1930年春在美國北達(dá)科他州首先發(fā)現(xiàn)。1931年由Schalk 和Hawn正式報道。1936年Beach和Schalm確定了該病的病原,1937年Beaudette和Hudson 首次利用雞胚培養(yǎng)該病毒。1956年Jungherr等證明IB的病原不只一個

2、血清型。1962年Winterfield和Hitchner發(fā)現(xiàn)了腎病變型傳染性支氣管炎(IB-nephrosis form。目前,該病在世界上大多數(shù)養(yǎng)雞地區(qū)都有發(fā)現(xiàn)。我國于1972年由鄺榮祿教授在廣東首先報道了IB的存在。此后北京、上海等地相繼有報道,現(xiàn)該病已蔓延至全國大部分地區(qū),給養(yǎng)雞業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。本病病原是傳染性支氣管炎病毒(infectious bronchitis virus, IBV,屬于冠狀病毒科冠狀病毒屬,是該屬的代表種。IBV多數(shù)呈圓形或橢圓形,直徑約120nm,病毒粒子有囊膜,表面有長約20nm的桿狀纖突。各毒株在蔗糖溶液中的浮密度不同,峰值常在(1.151.18g

3、/ml之間,離心時為避免丟失病毒纖突,離心力最好不要超過100 000g。IBV的基因組核酸為不分段的正鏈單股RNA,具有感染性,全長約27 000個核苷酸。主要編碼3種病毒特異性結(jié)構(gòu)蛋白,即纖突糖蛋白(S、膜蛋白(又稱基質(zhì)糖蛋白,M、核衣殼蛋白(N。其中S蛋白合成后會裂解為S1和S2兩條糖多肽亞單位。研究表明,血凝抑制抗體和大多數(shù)病毒中和抗體都是由S1誘發(fā)的,病毒的組織嗜性也與S1有密切關(guān)系。由于IBV的基因組核酸在復(fù)制過程中易發(fā)生突變和高頻重組,所以IBV的血清型眾多。據(jù)不完全統(tǒng)計,迄今已至少發(fā)現(xiàn)27個IBV血清型,常見的包括Massachusetts、Connecticut、Iowa97

4、、Iowa609、Delaware、Georgia、New Hampshire EF、Australian T 等。而且新的血清型和變異株還在不斷出現(xiàn),這就給IB的防制帶來很大困難。同時也使一般的實驗室很難通過中和試驗對分離毒株進(jìn)行血清型鑒定(主要是缺少全套的標(biāo)準(zhǔn)血清和抗原?？紤]到S蛋白(尤其S1糖多肽亞單位與IBV的免疫原性關(guān)系最為密切。因此,近年來建立了一系列針對IBV S1基因的基因分型方法。其中以限制性內(nèi)切酶酶切片段長度多態(tài)性分析(RFLP和序列同源性分析最為常用。初步研究表明,血清分型和基因分型方法在一定程度上有可比性,不同血清型毒株的S1糖多肽氨基酸序列的差異一般在20%25%之間

5、,有的甚至更高。但也有例外,如Connecticut 46株和M41株分屬不同血清型,而差異僅為7.6%。據(jù)調(diào)查,我國目前大部分地區(qū)的IBV毒株屬于Massachusetts血清型和基因型(其代表株為M41,主要引起呼吸道癥狀。但有些地區(qū)也存在類似美國Gray株和Holte株的野毒的局部流行,其共同特點是引起典型腎臟損傷。傳染性支氣管炎病毒本身不能直接凝集雞的紅細(xì)胞,但經(jīng)過1%胰酶或磷脂酶C在37下處理3h后,可具有血凝活性,并且這一活性能被特異性抗血清所抑制。利用該特性,有些實驗室建立了鑒定IBV毒株或監(jiān)測抗體水平的間接血凝抑制試驗,但該方法目前尚缺乏規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)。傳染性支氣管炎病毒能在1011

6、日齡的發(fā)育雞胚中生長。將IBV野毒材料首次接種于雞胚后,90%的胚仍能存活,只有少數(shù)胚會出現(xiàn)生長遲緩或矮小化。但隨著病毒傳代次數(shù)的增加,其對雞胚的毒力也不斷增強(qiáng),到第10代時,可在接種后的第10d引起80%的雞胚死亡。特征性變化是:胚體矮小并蜷縮成球形,尿囊膜增厚,緊貼胚體,卵黃囊縮小,尿囊液增多等。IBV也能在1518日齡的雞胚腎細(xì)胞(CEK、雞腎細(xì)胞(CK和雞胚肝細(xì)胞(CEL上生長,經(jīng)多次傳代(610代后,可引起較明顯的細(xì)胞病變,表現(xiàn)為胞漿融合,形成合胞體及細(xì)胞死亡。多數(shù)IBV野毒不需要適應(yīng)就可以在氣管組織培養(yǎng)物上生長,并引起纖毛運動停止。由此建立的雞胚氣管環(huán)培養(yǎng)法(Toc已成為分離IBV

7、、測定毒價和血清分型的有效方法。傳染性支氣管炎病毒株在56 15min或4590min可被滅活,但在-30以下可存活24年。IBV在pH6.06.5的環(huán)境中培養(yǎng)時最穩(wěn)定,在室溫中也能抵抗1%HCl(pH2、1%石碳酸和1%NaOH(pH121h。而雞新城疫病毒(NDV、傳染性喉氣管炎病毒(ILTV和禽痘病毒(FPV則在室溫中不能耐受pH12,這對鑒別病毒有一定意義。IBV對一般消毒劑敏感,在1%來蘇兒溶液、0.01%高錳酸鉀溶液、1%福爾馬林溶液、2%氫氧化鈉溶液及70%乙醇中35min即被滅活。雞是IBV的自然宿主,各種齡期的雞均易感,但以雛雞和產(chǎn)蛋雞發(fā)病較多,尤其40日齡以內(nèi)的雛雞發(fā)病最為

8、嚴(yán)重,死亡率也高。本病的主要傳播方式是病雞從呼吸道排毒,經(jīng)空氣中的飛沫和塵埃傳給易感雞。此外,也可從泄殖腔排毒,通過飼料、飲水等媒介,經(jīng)消化道傳染。IB屬于高度接觸性傳染病,在雞群中傳播速度快(2周內(nèi)可波及全場,潛伏期短(平均3d,病雞帶毒時間長(康復(fù)后49d仍可排毒。發(fā)病率高,但死亡率不高(幼雞約5%,成雞約1.2% 1.4%。本病一年四季流行,但以冬春寒冷季節(jié)最為嚴(yán)重。過熱、擁擠、溫度過低、通風(fēng)不良、飼料中的營養(yǎng)成分配比失當(dāng)、缺乏維生素和礦物質(zhì)及其他不良應(yīng)激因素都會促進(jìn)本病的發(fā)生。傳染性支氣管炎的臨床表現(xiàn)比較復(fù)雜。這一方面是由于IBV本身變異快、血清型多造成的,另一方面也與環(huán)境中的其他致病

9、因子(如大腸桿菌、支原體等混合感染,以及不良的飼養(yǎng)管理因素(如濫用抗生素、飼料配比失當(dāng)?shù)扔嘘P(guān)。呼吸型:雞群往往發(fā)病突然。4周齡以下的幼雞主要表現(xiàn)為伸頸、張口呼吸、咳嗽、打噴嚏、呼吸啰音等癥狀。2周齡以內(nèi)的雞,還常見鼻竇腫脹、流鼻液、流淚、頻頻甩頭等。病情嚴(yán)重時,病雞精神沉郁、食欲廢絕、羽毛松亂、體溫升高、怕冷扎堆,甚至引起死亡?？祻?fù)雞則大多發(fā)育不良,形體消瘦,蛋雛雞還會因輸卵管損傷而嚴(yán)重影響或完全喪失產(chǎn)蛋能力。56周齡以上的雞發(fā)病癥狀與幼雞相似,但因氣管內(nèi)滯留大量分泌物而造成的“咕?！碑惓：粑舾黠@,尤以夜間最清晰。另外,較少見到流鼻液的現(xiàn)象。這種呼吸道癥狀可持續(xù)7d14d,同時有黃白色或綠

10、色下痢,但死亡率比幼雛低。成年雞感染IB后的呼吸道癥狀較輕微,相比之下產(chǎn)蛋性能的變化更明顯。主要表現(xiàn)為開產(chǎn)期推遲,產(chǎn)蛋量明顯下降,降幅在25%50%之間,可持續(xù)48周。同時畸形蛋、軟殼蛋、粗殼蛋增多。蛋的品質(zhì)也下降,蛋清稀薄如水,蛋黃與蛋清分離?？祻?fù)后的蛋雞產(chǎn)蛋量很難恢復(fù)到患病前的水平。腎型:主要發(fā)生于24周齡的雞。最初表現(xiàn)短期(約1d4d的輕微呼吸道癥狀,包括啰音、噴嚏、咳嗽等,但只有在夜間才較明顯。如無混合感染導(dǎo)致的明顯癥狀,常常容易被忽視。呼吸道癥狀消失后不久,雞群會突然大量發(fā)病,出現(xiàn)厭食、口渴、精神不振、拱背扎堆等癥狀,同時排出水樣白色稀糞,內(nèi)含大量尿酸鹽,肛門周圍羽毛污濁。病雞因脫水

11、而體重減輕、胸肌發(fā)紺,重者雞冠、面部及全身皮膚顏色發(fā)暗。發(fā)病10d12d達(dá)到死亡高峰,21d后死亡停止,死亡率約30%。產(chǎn)蛋雞感染后也會引起產(chǎn)蛋量下降、產(chǎn)異常蛋和死胚率增加,但死亡不多。不同的臨床型有不同的病理變化特征。呼吸型:幼雛主要病變表現(xiàn)為鼻腔、喉頭、氣管、支氣管內(nèi)有漿液性、卡他性和干酪樣(后期分泌物。上呼吸道因此會被水樣或黏稠的黃白色分泌物附著或堵塞。鼻竇、喉頭、氣管黏膜充血、水腫、增厚。氣囊輕度混濁、增厚。支氣管周圍肺組織發(fā)生小灶性肺炎。如伴有混合感染,還可見到呼吸道發(fā)生膿性、纖維素性炎癥。產(chǎn)蛋雞則多表現(xiàn)為卵泡充血、出血、變形、破裂,甚至發(fā)生卵黃性腹膜炎。若在雛雞階段感染過IB,則成

12、年后雞的輸卵管發(fā)育不全,長度不及正常的一半,管腔狹小、閉塞。呼吸系統(tǒng)的病理組織學(xué)變化可見氣管、支氣管黏膜的纖毛脫落,上皮細(xì)胞變圓和空泡變性,嚴(yán)重時會脫落。黏膜固有層內(nèi)出現(xiàn)不同程度的充血、水腫和炎癥細(xì)胞浸潤。早期主要為異嗜性白細(xì)胞,隨后則以淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞為主。生殖系統(tǒng)的病理組織變化表現(xiàn)為輸卵管黏膜上皮細(xì)胞變性,纖毛變短或脫落,分泌細(xì)胞減少,黏膜層內(nèi)炎性細(xì)胞浸潤及粘膜基質(zhì)的纖維化。卵泡顆粒膜細(xì)胞呈樹枝狀增生,卵泡溶解。子宮部的殼腺細(xì)胞變形,固有層腺體增生,并有較多淋巴細(xì)胞浸潤。腎型:主要病變表現(xiàn)為腎臟蒼白、腫大、小葉突出。腎小管和輸尿管擴(kuò)張,沉積大量尿酸鹽,使整個腎臟外觀呈斑駁的白色網(wǎng)線狀,俗稱

13、“花斑腎”。在嚴(yán)重病例中,白色尿酸鹽不但彌散分布于腎表面,而且會沉積在其他組織器官表面,即出現(xiàn)所謂的內(nèi)臟型“痛風(fēng)”。發(fā)生尿石癥的雞除輸尿管擴(kuò)張,內(nèi)有砂粒狀結(jié)石外,還往往出現(xiàn)一側(cè)腎高度腫大,同時另一側(cè)腎萎縮。病理組織學(xué)病變方面表現(xiàn)為腎小管上皮細(xì)胞腫脹變性,甚至壞死脫落。管腔擴(kuò)張,內(nèi)含尿酸鹽結(jié)晶。腎間質(zhì)水腫,并有淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤,有時還可見纖維組織增生。近年來,有關(guān)傳染性支氣管炎病毒變異株引起肌肉、腸道,甚至腺胃等非呼吸、生殖和泌尿系統(tǒng)的組織、器官發(fā)生病變的報道不斷出現(xiàn)。但其中大部分尚待進(jìn)一步證實。因為現(xiàn)有的研究數(shù)據(jù)表明,除IBV毒株本身的致病作用外,環(huán)境中的一些誘因(如寒冷、飼料成

14、分不當(dāng)、濫用藥物、多種病原混合感染等對傳染性支氣管炎病變的表現(xiàn)形式和嚴(yán)重程度有很大影響。如果將異常的臨床表現(xiàn)或病理變化都?xì)w究于IBV毒株變異本身,則容易對診斷和防制工作帶來不利的影響。根據(jù)本病的臨床特點、病史、癥狀表現(xiàn)和病理變化,可作出初步診斷。確診則需要借助于病毒學(xué)、血清學(xué)和分子生物學(xué)等一系列實驗室檢測方法。(一病毒分離常用于病毒分離的材料包括病雞的喉頭分泌物和泄殖腔內(nèi)容物(用無菌棉拭子蘸取、氣管、肺組織和腎臟等。將新鮮病料(組織塊需磨碎,按15110加入滅菌磷酸鹽緩沖液制成組織懸液,離心取上清,加適量抗生素于4冰箱內(nèi)感作2h4h。然后接種于911日齡SPF雞胚或非免疫健康雞胚的尿囊腔內(nèi),3

15、7孵育36h48h,取出部分雞胚,收獲尿囊液進(jìn)行血清學(xué)或分子生物學(xué)檢測,其余雞胚繼續(xù)孵化6d7d,觀察胚體變化。如病料中有傳染性支氣管炎病毒,則部分雞胚在接種后3d5d發(fā)生死亡,胚體比同日齡正常雞胚矮小,卷成球形,又稱“侏儒胚”。羊膜及尿囊膜增厚,胚體充血。初次分離的野毒往往要經(jīng)過雞胚盲傳23代后,才能見到明顯和規(guī)律的雞胚病變。此外,也可通過雞胚氣管環(huán)培養(yǎng)法分離IBV。(二病毒鑒定 1.干擾試驗 IBV在雞胚中能夠干擾NDV-B1株(即新城疫II系疫苗株產(chǎn)生血凝素,因此,可利用這種方法對IBV進(jìn)行鑒定。具體做法是:取911日齡SPF或無母源抗體的雞胚1020只,分成兩組。其中一組先通過尿囊腔內(nèi)

16、接種經(jīng)無菌處理的病料,每只雞胚0.1ml,另一組作為對照,不接種。孵化10h后,兩個組同時經(jīng)尿囊腔途徑接種含NDV-B1株的雞胚尿囊液,每只雞胚0.1ml。繼續(xù)孵化36h48h后,把兩組所有雞胚置4冰箱內(nèi)4h 以上,然后逐只收獲并測定尿囊液的血凝效價。若病料中確實存在傳染性支氣管炎病毒,則該組雞胚有50%以上的血凝效價在1:20以下,而對照組的雞胚則有90%以上的血凝效價在1:40或以上。整個試驗要嚴(yán)格按上述規(guī)定時間去做,否則干擾作用就會減弱或消失。 2.血清學(xué)試驗常用于鑒定IBV的血清學(xué)方法包括病毒中和試驗(VN和免疫熒光抗體技術(shù)(IFA等。但由于IBV的血清型很多,而對大多數(shù)實驗室來講很難

17、制備或獲得全套的型特異性標(biāo)準(zhǔn)陽性血清。因此,目前主要通過血清學(xué)方法判斷分離物中是否含有IBV。3.分子生物學(xué)試驗一般根據(jù)IBV基因組RNA的保守區(qū)段(如3末端設(shè)計引物,通過反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR或反轉(zhuǎn)錄-巢式聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-nested PCR擴(kuò)增特異的基因片段。這個方法靈敏、快速、特異,能夠較好地避免IBV血清型眾多所造成的不便。因此已被許多實驗室接受并投入臨床樣本檢測。另外,也有通過核酸探針進(jìn)行診斷的報道,但其操作不如RT-PCR方便。(三人工發(fā)病將感染性的雞胚尿囊液通過氣管內(nèi)接種或點眼感染方式,接種1日齡SPF雛雞或無母源抗體的健康雛雞。經(jīng)18h36h后,接種雞會出現(xiàn)

18、明顯的癥狀和病理變化。本方法在氣溫較低的冬春季節(jié)進(jìn)行,較易獲得成功。另外,由于臨床上有多種因素會影響本病的癥狀表現(xiàn),所以建議人工發(fā)病時最好配合病理組織學(xué)檢查做出診斷。(四血清學(xué)診斷對本病的血清學(xué)檢驗方法有病毒中和試驗(VN、瓊脂擴(kuò)散試驗(AGP、血凝抑制試驗(HI、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA等。病毒中和試驗:用病毒中和試驗可對傳染性支氣管炎病毒進(jìn)行定性和定量檢驗。試驗方法有雞胚(711日齡法、雞腎細(xì)胞培養(yǎng)法和蝕斑法3種。雞感染傳染性支氣管炎病毒后約10d(疾病流行過后的恢復(fù)期,其血液內(nèi)出現(xiàn)中和抗體,并可持續(xù)612個月。因此,對患病雞群的檢驗,通常采雙份血清樣,第一次是在發(fā)病初期,第二次是在發(fā)

19、病后23周。若第二次血清樣抗體滴度比第一次高出4倍,即可診斷為雞傳染性支氣管炎感染。瓊脂擴(kuò)散試驗:可用感染雞胚的絨毛尿囊膜制備抗原,也可用聚乙二醇濃縮感染雞胚尿囊液制備抗原,按常規(guī)方式完成試驗,經(jīng)24h48h觀察結(jié)果。此法特異性較強(qiáng),操作方法簡單而快速。雞感染IBV野毒或接種弱毒疫苗7d9d后就能檢出沉淀抗體,并可持續(xù)23個月。一般認(rèn)為雛雞血清中和指數(shù)在3.17以上時,就能用瓊擴(kuò)試驗測出沉淀抗體的存在,因此采用AGP試驗對疫苗接種效果的監(jiān)測有現(xiàn)實使用意義。血凝抑制試驗:將含有傳染性支氣管炎病毒的雞胚尿囊液離心濃縮后,加等量磷脂酶C置37處理90min作為抗原,再按微量法操作進(jìn)行血凝抑制試驗。(五鑒別診斷傳染性支氣管炎流行初期,要注意與新城疫、禽流感、傳染性喉氣管炎、支原體等引起的慢性呼吸道病、傳染性鼻炎、大腸桿菌性氣囊炎、雛雞曲霉菌病及維生素A缺乏癥等相區(qū)別。從臨床表現(xiàn)上來看,新城疫和禽流感的病情往往比本病嚴(yán)重,雛雞常可見到神經(jīng)癥狀及內(nèi)臟組織的出血和壞死。傳染性喉氣管炎很少發(fā)生于幼雛,且患雞的呼吸道癥狀較重,?？瘸鳇S色或血樣黏液,氣管、喉頭黏膜出血和壞死嚴(yán)重,同時氣管黏膜上皮細(xì)胞會出現(xiàn)合胞體和核內(nèi)包涵體。慢性呼吸道