大蝎子草抗炎鎮(zhèn)痛活性部位研究

1、大蝎子草抗炎鎮(zhèn)痛活性部位研究                    作者：陶玲，支娜，柏帥，楊如會，沈祥春【摘要】  目的研究大蝎子草抗炎鎮(zhèn)痛的活性作用部位，為進(jìn)一步尋找活性成分奠定基礎(chǔ)。方法采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹及皮膚毛細(xì)血管通透性實(shí)驗(yàn)、醋酸致小鼠扭體反應(yīng)與小鼠熱板致痛等實(shí)驗(yàn)動物模型進(jìn)行整體動物生物活性評價。結(jié)果大蝎子草提取物水層、醋酸乙酯層和氯仿層能夠顯著減少醋酸致小鼠扭體次數(shù)，延長熱板痛反

2、應(yīng)時間，水層還能顯著抑制二甲苯致小鼠耳廓腫脹及皮膚毛細(xì)血管通透性增高，與對照組比較均有顯著性差異。結(jié)論大蝎子草提取物水層有較好的抗炎鎮(zhèn)痛作用， 醋酸乙酯層和氯仿層具有鎮(zhèn)痛作用，為活性成分的尋找提供了研究基礎(chǔ)和方向。 【關(guān)鍵詞】  大蝎子草 抗炎 鎮(zhèn)痛活麻藥用歷史悠久，在楚彝本草滇藥錄藏本草等均有記載，主要用于治療中風(fēng)不語，咳嗽多痰、風(fēng)濕疼痛、跌打損傷、骨折等。論文論文參考網(wǎng)根據(jù)文獻(xiàn)資料我國大部分地區(qū)所用活麻為蕁麻科蕁麻屬的植物，因此，目前國內(nèi)外在蕁麻屬藥用植物的活性研究較多，由于其明確的療效，引起相關(guān)科研人員的日益重視1。    活麻作為治療藥物以紅禾麻

3、藥名被2003版貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收錄，該標(biāo)準(zhǔn)收載的活麻原植物為蕁麻科珠牙艾麻Laportea bulbifera (Sieb. et Zucc.) Wedd.的新鮮或干燥全草2。我們經(jīng)過廣泛的調(diào)查，貴州不少民族地區(qū)以蕁麻科蝎子草屬植物大蝎子草Girardinia diversifolia (Link) Friis的全草或根作為活麻藥材廣泛使用，而目前對該植物的相關(guān)研究未見報(bào)道。為促進(jìn)植物資源的合理開發(fā)和利用，本研究以大蝎子草Girardinia diversifolia (Link) Friis為研究對象，按照傳統(tǒng)部位分離的方法，采用經(jīng)典抗炎鎮(zhèn)痛模型研究其活性部位，為進(jìn)一步指導(dǎo)大

4、蝎子草的研究開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1  材料1.1  藥材與藥物制備大蝎子草，采集于貴州省貴陽市花溪區(qū)，經(jīng)貴陽醫(yī)學(xué)院龍慶德老師鑒定為蝎子草屬植物大蝎子草Girardinia diversifolia (Link) Friis的地上部分，藥材標(biāo)本留于貴陽醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院藥用植物學(xué)和生藥學(xué)教研室。藥材經(jīng)低溫干燥后，取1 kg 加入95%乙醇8 L進(jìn)行提取，回流提取3次，抽濾，合并濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進(jìn)行濃縮，濃縮液依次經(jīng)石油醚、醋酸乙酯、氯仿萃取，分別得到各部位萃取物21.4，3.2，1.0 g和剩余水層34.8 g。1.2 試劑阿司匹林，中國醫(yī)藥公司上海分公司產(chǎn)品（批號840130）；

5、醋酸，上海申博化工有限公司產(chǎn)品，AR（批號0501101）；甲酰胺，天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心產(chǎn)品，AR（批號20030909）；二甲苯，重慶川江化學(xué)試劑廠產(chǎn)品，AR（批號20070716）；伊文思藍(lán)，中國醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司進(jìn)口分裝（批號F20020913）；氯化鈉，重慶川江化學(xué)試劑廠產(chǎn)品，AR（批號20060109）。1.3 動物昆明種小鼠，兼有，體重1822 g，由貴陽醫(yī)學(xué)院動物實(shí)驗(yàn)中心提供動物合格證號：SCXK（黔）2002-0001。1.4 儀器BS223S型分析天平，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司產(chǎn)品； HH-601超級恒溫水浴鍋，江蘇金壇市環(huán)宇科學(xué)儀器廠產(chǎn)品；GJ28402型

6、熱板測痛儀，浙江寧海白石電子醫(yī)藥儀器廠產(chǎn)品；722光柵分光光度計(jì)，上海第三分析儀器廠產(chǎn)品。2 方法2.1 抗炎實(shí)驗(yàn)2.1.1 對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響參照文獻(xiàn)方法3，選取體重（20 ±2）g小鼠 60只，隨機(jī)分為6組，即模型組、阿司匹林組（300mg/kg）、大蝎子草石油醚部位（103mg/kg）、氯仿部位(16 mg/kg)、醋酸乙酯部位（5 mg/kg）及水層（174 mg/kg）。各給藥組均相當(dāng)于大蝎子草生藥劑量為 5g/kg，每組10 只小鼠，給藥容積為10 ml/kg，連續(xù)給藥5d，末次給藥40 min后，于小鼠右耳(兩面)均勻涂抹二甲苯20 l/只致炎，左耳不涂，同

7、時立即尾靜脈注射1%伊文思藍(lán) 0.1 ml/10 g。20 min后將小鼠頸椎脫臼處死，用直徑為 8 mm的打孔器沿左右耳片同一部位打下圓耳片，在電子天平上稱重，右耳與左耳重量之差即為腫脹度。并計(jì)算腫脹抑制率，腫脹抑制率（%）=（模型組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度）/模型組平均腫脹度×100%。2.1.2 伊文思藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)曲線的的制作4精密稱取伊文思藍(lán)粉末 0.010 g，置于100 ml容量瓶中，用甲酰胺溶解并定容，配成100 g?ml-1溶液，在分別精密吸取 0.25，0.5，1，2，4，6，8 ml該溶液于10 ml容量瓶中并再次用甲酰胺定容，以620 nm波長，1 cm光徑測定其

8、吸光度（A），甲酰胺調(diào)零，以吸光度 （A） 對溶液中伊文思藍(lán)的濃度（C）求得回歸方程為：A=0.122 8C+0.006 8，r=0.999 2，伊文思藍(lán)濃度在2.5 80 g?ml-1與吸光度值呈良好的線性關(guān)系。2.1.3 對小鼠皮膚毛細(xì)血管通透性的影響參照文獻(xiàn)方法5，將致炎右耳片剪成數(shù)片浸入2 ml甲酰胺中，38水浴48 h將染料滲出，離心，上清液于620 nm處測吸光度A值，按“2.1.2”項(xiàng)伊文思藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算伊文思藍(lán)的含量。2.2 對熱板致痛的影響6取雌性昆明種小鼠，體重在（20±2）g，置于（55±0.5）的熱板上，記錄小鼠自放置于熱板上至出現(xiàn)舔后足反應(yīng)所需的時

9、間，即為痛閾值，凡小于5 s或大于30 s及跳躍的均淘汰，合格小鼠再測1次痛閾值，取兩次平均值作為各鼠痛閾值。選取合格小鼠60只，按體重與痛閾值隨機(jī)分為6組，10只/組，分組與給藥同“2.1.1”項(xiàng)。于末次給藥40 min后測定痛閾值（用藥后小鼠痛閾大于60 s者中止實(shí)驗(yàn)并計(jì)以60 s），計(jì)算痛閾提高百分率，痛閾提高百分率（%）=（給藥后平均痛閾值-給藥前平均痛閾值）/給藥前平均痛閾值×100%。論文參考網(wǎng)2.3 冰醋酸致小鼠扭體法7取昆明種小鼠60只，各半，按體重隨機(jī)分為6組，分組與給藥同“2.1.1”項(xiàng)，于末次給藥40 min后，小鼠腹腔注射0.6%冰醋酸0.1 ml/10 g，

10、觀察并記錄20 min內(nèi)小鼠的扭體次數(shù)并計(jì)算鎮(zhèn)痛抑制率，鎮(zhèn)痛抑制率（%）=(模型組平均扭體次數(shù)-給藥組平均扭體次數(shù))/模型組平均扭體次數(shù)×100%。實(shí)驗(yàn)過程中室溫維持在（18±1）。2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS10.0 統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行分析，兩兩比較用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異顯著，P<0.01為極顯著差異。3 結(jié)果3.1 對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響小鼠右耳涂二甲苯后，耳廓顯著腫大，腫脹度高達(dá)（11.20±0.53）mg，阿司匹林顯著抑制二甲苯所導(dǎo)致小鼠耳廓腫脹的急性炎癥反應(yīng)，表現(xiàn)為腫脹度降低，抑制率為63.17%，大蝎子草各提取部位中，水

11、層對二甲苯所導(dǎo)致的急性炎癥反應(yīng)具有顯著的抑制，抑制率為45.68%，而醋酸乙酯、氯仿及石油醚等部位未見顯著抑制作用。結(jié)果見表1。表1  大蝎子草各提取部位對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹度的影響（略）3.2 對二甲苯所致小鼠皮膚毛細(xì)血管通透性的影響小鼠尾靜脈注射伊文思藍(lán)后，由于二甲苯導(dǎo)致小鼠耳部充血、水腫，因此伊文思藍(lán)隨血流到達(dá)小鼠耳部分布較多?？寡姿幬镆种贫妆剿露装Y，小鼠耳片伊文思藍(lán)含量減少。表2實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，阿司匹林和大蝎子草水層部位具有顯著的抑制炎癥滲出，降低皮膚毛細(xì)血管通透性的作用。表2  大蝎子草各提取部位對小鼠皮膚毛細(xì)血管通透性的影響（略）3.3 對熱板致小鼠疼

12、痛反應(yīng)的影響連續(xù)給藥5d后，阿司匹林組、大蝎子草水層部位、醋酸乙酯層、氯仿層均顯著延長小鼠的痛閾值，與模型組比較差異顯著，痛域值提高百分率分別為43.92%，31.95%，19.95%，20.56%。結(jié)果見表3。表3  大蝎子草提取部位對小鼠熱板法痛閾的影響（略）3.4 對醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響結(jié)果顯示大蝎子草水層、醋酸乙酯和氯仿部分能夠有效抑制醋酸刺激腹腔黏膜引起的痛反應(yīng)，減少扭體次數(shù)。結(jié)果見表4。表4  大蝎子草各提部位對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響（略）4 討論    大蝎子草為蕁麻科蝎子草屬植物Girardinia diversifol

13、ia (Link) Friis系貴州少數(shù)民族民間習(xí)用的活麻原藥材之一。根據(jù)苗族用藥經(jīng)驗(yàn)，大蝎子草具有舒筋活絡(luò)、消腫止痛等功效，主要用于治療腰腿痛、風(fēng)濕痛、跌打損傷、前列腺炎等，具有獨(dú)特的療效，且通過民間廣泛應(yīng)用證明其作用安全可靠。    本研究采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹、皮膚毛細(xì)血管通透性增高兩種非特異炎癥模型評價大蝎子草對早期急性炎癥的影響，以熱板法和醋酸所致扭體實(shí)驗(yàn)兩種用于鎮(zhèn)痛藥初篩的經(jīng)典常用方法評價其鎮(zhèn)痛作用及可能的活性部位。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，大蝎子草提取物的水層部分能夠有效抑制二甲苯致小鼠耳廓腫脹及皮膚毛細(xì)血管通透性增高，提高小鼠熱刺激體表的痛閾，抑制醋酸刺激腹

14、腔粘膜引起的痛反應(yīng)，減少扭體次數(shù)。氯仿層和醋酸乙酯層也能夠提高小鼠熱刺激體表的痛閾，抑制醋酸刺激腹腔粘膜引起的痛反應(yīng),減少扭體次數(shù)；但是本次研究未見明顯的抗炎作用。而石油醚層在本次研究中未見抗炎鎮(zhèn)痛作用，這可能與石油醚主要成分為油脂等成分相關(guān)。    以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，民間采用水煎煮的用藥方法可以最大程度地得到藥效的活性部位，發(fā)揮藥物的抗炎鎮(zhèn)痛作用；同時為進(jìn)一步研究其活性成分提供了研究方向。其抗炎作用的活性成分及可能的作用機(jī)制有待于進(jìn)一步深入研究。【參考文獻(xiàn)】  1李寧,張慶林.蕁麻屬植物化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展J.中國新藥雜志,2007,16(21): 1746.2貴州省藥品監(jiān)督管理局.貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)S.貴陽:貴州科技出版社, 2003: 187.3高瑩瑩,敖明章,萬軍梅,等.維藥刺山柑醇提取物抗炎鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究J.中藥材,2007,30(6): 702.4姚靜,周建平,平其能,等.類透明質(zhì)酸殼聚糖微乳