地榆水提液對四種癌細胞生長抑制作用的研究

1、地榆水提液對四種癌細胞生長抑制作用的研究    【摘要】  目的研究地榆水提液對癌細胞生長的抑制作用。方法細胞形態(tài)觀察和活細胞計數(shù)法研究地榆水提液對人白血病細胞K562，肝癌細胞HepG2，胃癌細胞BGC823，宮頸癌細胞Hela生長的抑制作用。結(jié)果地榆水提液可使4種癌細胞形態(tài)上發(fā)生皺縮、變圓、脫壁、碎裂等變化，生長受到明顯抑制，抑制率最高可達85.20%。結(jié)論 地榆有確切的抑癌作用，并與中醫(yī)的氣血理論和藥物歸經(jīng)理論相一致，再次說明了中醫(yī)基本理論的博大精深，即便在體外細胞水平上也有良好體現(xiàn)，對實驗室手段研究中醫(yī)藥同樣有著重要指導(dǎo)意義。 【關(guān)鍵詞

2、】  地榆；癌細胞；生長；抑制作用Abstract：ObjectiveTo investigate the inhibitory effects of the extract of Sanguisorba officinalis L. on human carcinoma cells.MethodsMorphological change observation and live cell accounting were used to investigate the inhibitory effects of Sanguisorba officinalis L. on human

3、chronic myloid leukemia K562 cell,hepatoma HepG2 cell,cervical carcinoma Hela cell and gastic carcinoma BGC823 cell.ResultsGrowth of the four kinds of cells was significantly inhibited by the extract of sanguisorba officinalis L., highest 85.20% and cell morphological changes included shrinkage,roun

4、dness,floating and crumbling.ConclusionSanguisorba officinalis L. has reliable carcinoma-inhibiting effects and the effects conform to the “qi” and blood theory and the Meridian-reaching theory of traditional Chinese medicine.Key words:Sanguisorba officinalis L.；Carcinoma cell;  Growth ; Inhibi

5、tory effects   筆者在臨床上見一癌癥病人，經(jīng)中醫(yī)中藥治療，取得十分滿意的效果，在征得主治醫(yī)生同意后，將其方中出現(xiàn)頻率較高的11種中藥制成提取液，進行體外抑癌篩選，發(fā)現(xiàn)其中的地榆水提液具有良好作用，現(xiàn)將地榆水提液的研究情況報道如下：1  器材1.1  藥材地榆生藥購于內(nèi)蒙古中蒙醫(yī)院藥房。論文論文參考網(wǎng)取生藥適量，六蒸水洗3遍，烘干，稱量；六蒸水浸泡過夜，武火煮沸，文火煎煮40 min，紗布過濾，濾渣加適量六蒸水置115高壓蒸氣鍋內(nèi)30 min，紗布過濾；合并兩次濾液，2冰箱靜置72 h，高、中、低速濾紙，0.45 m，0.22 m微孔濾膜逐級

6、過濾；濾液蒸發(fā)濃縮，滅菌，4保存，使用時以培養(yǎng)液稀釋至所需質(zhì)量分數(shù)（以生藥計算）。1.2  器材與試劑倒置相差顯微鏡（Nikon eclipse TE2000-U），超凈臺（蘇州凈化設(shè)備有限公司），CO2培養(yǎng)箱（GALAXY &BINDER），24孔培養(yǎng)板（BIOFIL），RPMI1640，高糖DMEM（GIBCO），胎牛血清（TBD）。1.3  癌細胞系人白血病細胞系K562，肝癌細胞系HepG2，胃癌細胞系BGC823，宮頸癌細胞系Hela（均由本實驗室傳代保種），均常規(guī)傳代培養(yǎng)。2  方法2.1  實驗分組每種細胞均設(shè)對照組（不加藥）與觀察

7、組（加藥），觀察組分設(shè)高（4 mg/ml）、中（1 mg/ml）、低（0.25 mg/ml）3個濃度組。2.2 加藥處理取對數(shù)生長期的4種癌細胞，均以2×104/孔接種于24孔培養(yǎng)板，接種24 h后加藥。加藥后：每天于倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化；每隔24 h各組均取5孔細胞臺?D藍拒染法計活細胞數(shù)，每孔計3次，5孔取平均值，計算出當(dāng)天的生長抑制率，抑制率（%）=（對照組平均活細胞數(shù)-觀察組平均活細胞數(shù)）/對照組平均活細胞數(shù)×100%，1，連續(xù)6 d。2.3  抑制效果的判斷與分析細胞形態(tài)的觀察與分析：參考章靜波的五級分類評價2；平均抑制率：6 d的抑制率相加

8、取平均值；最高抑制率：每種細胞各濃度組取其6 d中最高的一天。抑制率的比較采用2檢驗。論文參考網(wǎng)3  結(jié)果3.1  地榆水提液對細胞形態(tài)的影響對照組：HepG2，BGC823和Hela緊貼板壁，胞間緊密接觸，胞質(zhì)透亮，可見分裂相，連續(xù)觀察，細胞繼續(xù)生長，集落不斷擴大，屬0級；K562胞體發(fā)亮，大小均勻，日益密集。觀察組：加藥后810 h，HepG2，BGC823和Hela部分胞體回縮，胞質(zhì)內(nèi)有顆粒物積累，屬1級；K562多數(shù)胞體變暗，大小不均。加藥后24 h，BGC823和Hela部分皺縮、變圓、脫壁，仍屬1級，HepG2（圖1）板底已可見碎渣樣物質(zhì)，屬2級；K562（圖2

9、）大部分形態(tài)異常，或皺縮或內(nèi)容物釋放形成“鬼影”，板底可見碎渣樣物質(zhì)。加藥后48 h，BGC823和Hela更多的脫壁并出現(xiàn)碎渣，屬2級，HepG2大量浮起，碎渣量大，屬3級；K562多數(shù)崩解。3.2 地榆水提液對4種癌細胞生長的平均抑制率見表1。由表1可見，地榆水提液對4種癌細胞的生長都有明顯抑制作用，但它們的抑癌效果是不同的，如高濃度組中，K562的抑制率最高，可達83.72%，Hela的抑制率最低，也在54.11%，四者間相互比較，K562HepG2BGC823Hela。表1  地榆水提液對4種癌細胞生長的平均抑制率（略）3.3  地榆水提液對4種癌細胞生長的最高抑制

10、率見表2。由表2可見，地榆水提液對4種癌細胞的生長都有明顯抑制作用，但它們出現(xiàn)的最高抑癌時間不盡相同，以高濃度組為例，K562在72 h而Hela在96 h；它們的抑癌效果也不同，如高濃度組中，K562最高，為85.20%，Hela最低，為58.10%，4種細胞間相互比較，K562HepG2BGC823Hela。表2 地榆水提液對4種癌細胞生長的最高抑制率（略）4 討論    已有研究表明：地榆可抑制人宮頸癌細胞JTC-26的生長3，本實驗表明其水提液對來源于血液、消化、生殖3個系統(tǒng)的4種癌細胞均有明顯抑制作用，且對白血病細胞、肝癌細胞和胃癌細胞的作用強于宮頸癌細

11、胞，提示值得進一步深入研究為其臨床抗癌應(yīng)用提供參考。    從形態(tài)觀察到抑制率的比較均顯示地榆對4種癌細胞的抑制效果為：K562HepG2BGC823Hela。中醫(yī)認為：地榆“歸肝、胃、大腸經(jīng)，入血斂降”3，入血分，善治血病，故對白血病細胞抑制效果最好；首歸肝經(jīng)，對肝癌細胞效果也很好；次入胃經(jīng)，對胃癌細胞效果弱于肝癌；與子宮頸關(guān)系不很密切，故對子宮頸癌細胞抑制效果最差。本實驗這一結(jié)果與中醫(yī)的氣血理論和藥物歸經(jīng)理論相一致，再次說明了中醫(yī)基本理論的博大精深，即便在體外細胞水平上也有良好體現(xiàn)，對實驗室手段研究中醫(yī)藥同樣有著重要指導(dǎo)意義?！緟⒖嘉墨I】  1張卓然.細胞