卡介苗接種后結(jié)核菌素純蛋白衍生物試驗與T淋巴細(xì)胞亞群的關(guān)系

1、    卡介苗接種后結(jié)核菌素純蛋白衍生物試驗與 T淋巴細(xì)胞亞群的關(guān)系        近年來，某些地區(qū)的結(jié)核病有上升趨勢，這對小兒的健康成長造成極大的威脅。因此卡介苗(bacille calmette-guerin, BCG)的預(yù)防接種工作顯得非常重要。通過多年來臨床觀察發(fā)現(xiàn)，部分嬰兒接種BCG后結(jié)核菌素純蛋白衍生物（purified protein derivative, PPD）仍為陰性，為了解BCG接種后PPD試驗未陽轉(zhuǎn)與細(xì)胞免疫的關(guān)系，我們對179例嬰兒做了T

2、淋巴細(xì)胞(簡稱T細(xì)胞)亞群測定，并進行了對照觀察。 對象和方法對象:1997年8月1999年5月，對出生后1周以內(nèi)的新生兒接種BCG，于3個月后在兒保門診行PPD試驗，共檢測3 113例，PPD陽性2 438例。隨機選擇179例，其中PPD陰性者114例作為觀察組，PPD陽性65例為對照組。兩組間年齡、體重、喂養(yǎng)方式及性別差異均無顯著性。均為健康兒，男100例，女79例，足月兒148例，早產(chǎn)兒31例。方法：(1)接種方法：BCG接種兩組采用同一批制劑，劑量為0.05 ml（0.05 mg），于左肩皮內(nèi)注射。PPD由蘭州生物制品研究所提供，PPD試驗在小兒左前臂內(nèi)側(cè)中下三分之一處皮內(nèi)注射，每人用

3、量0.1 ml（5 IU），72 h觀察局部硬結(jié)，并記錄硬結(jié)平均直徑。判斷標(biāo)準(zhǔn)：PPD試驗陽性：局部紅腫，硬結(jié)平均直徑5 mm。PPD試驗陰性：局部無紅腫或紅腫硬結(jié)平均直徑5 mm1。(2)T細(xì)胞亞群測定：T細(xì)胞亞群試劑盒由北京邦定生物醫(yī)學(xué)公司提供，采用單克隆抗體(簡稱單抗)，堿性磷酸酶抗堿性磷酸酶（APAAP）法檢測，CD3、CD4、CD8分別是總T、T輔助誘導(dǎo)細(xì)胞、T抑制細(xì)胞細(xì)胞毒細(xì)胞作用指標(biāo)。取靜脈血1.5 ml加入肝素處理的試管中搖勻，取分離好的單個核細(xì)胞沉淀少許制成涂片，然后滴加固定液，12 min后PBS淋洗，依次加入T亞群單抗、羊抗鼠二抗、APAAP復(fù)合物，置室溫30 min反應(yīng)

4、，然后加堿性磷酸酶底物顯色，蘇木素復(fù)染。測定工作由我院血液實驗室專人操作。(3)統(tǒng)計學(xué)處理：T細(xì)胞亞群CD3、CD4、CD8及CD4CD8數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間的比較采用t檢驗。結(jié)果PPD試驗陽轉(zhuǎn)和未陽轉(zhuǎn)嬰兒T細(xì)胞亞群改變及對照觀察結(jié)果見表1。結(jié)果顯示，觀察組CD3、CD4均值均低于對照組，CD8均值高于對照組，因標(biāo)準(zhǔn)差數(shù)值較大，故兩組間比較差異無顯著性，但CD4CD8比值明顯低于對照組，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，兩組間差異有顯著性（P0.05）。表1179例嬰兒T細(xì)胞亞群的改變（±s）組別例數(shù)CD3（）CD4（）CD8（）CD4CD8觀察組11460

5、7;1135±927±71.4±0.4對照組6562±1137±925±61.5±0.5t值1.288 81.317 11.598 92.333 9P值>0.05>0.05>0.05<0.05討論 世界各地廣泛應(yīng)用BCG預(yù)防結(jié)核病已有半個多世紀(jì)的歷史，它的主要作用是通過對T細(xì)胞的致敏，產(chǎn)生細(xì)胞介導(dǎo)的傳染免疫。致敏T細(xì)胞在抗原的特異刺激下，分化、增殖并合成，釋放出一系列淋巴因子，由于淋巴因子的綜合協(xié)調(diào)作用，從而發(fā)揮細(xì)胞免疫作用。通過近兩年兒保門診對嬰兒PPD檢測，發(fā)現(xiàn)PPD陽轉(zhuǎn)率仍較低，僅78.31%（

6、2 4383 113）。我們曾對BCG接種后結(jié)核菌素試驗未陽轉(zhuǎn)的嬰兒測查了E-玫瑰花結(jié)試驗，結(jié)果E-玫瑰花環(huán)形成率有不同程度的降低2。為進一步探討PPD反應(yīng)與細(xì)胞免疫的關(guān)系，我們采用單抗APAAP法測定T細(xì)胞亞群，以了解人體細(xì)胞免疫功能，此法比傳統(tǒng)的T細(xì)胞脂酶、E-玫瑰花結(jié)更具有高度特異性、靈敏性、陽性結(jié)果可靠等優(yōu)點。T細(xì)胞是機體免疫系統(tǒng)內(nèi)功能最重要的一大細(xì)胞群，在正常體內(nèi)T細(xì)胞亞群相互作用，維持著機體正常的免疫功能。CD4CD8比值已成為監(jiān)測人體細(xì)胞免疫功能、反應(yīng)機體免疫狀態(tài)的重要指標(biāo)。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PPD未陽轉(zhuǎn)者CD4CD8比值明顯低于對照組（PPD陽性組）(P0.05)。考慮BCG接種

7、后PPD試驗未陽轉(zhuǎn)與嬰兒細(xì)胞免疫功能低下有一定的關(guān)系，為此我們對68例PPD試驗未陽轉(zhuǎn)并伴細(xì)胞免疫功能低下者，用卡介苗提取液（唯爾本）行免疫刺激治療，結(jié)果PPD陽轉(zhuǎn)率提高到84。但仍有部分嬰兒PPD未陽轉(zhuǎn)，且細(xì)胞免疫功能正常，故PPD試驗也不能完全反映免疫功能。本研究還發(fā)現(xiàn)，早產(chǎn)兒T細(xì)胞亞群各項指標(biāo)均低于足月兒，且PPD陰性率高（77），這與早產(chǎn)兒發(fā)育不成熟、特異性和非特異免疫功能均低下有關(guān)。關(guān)于結(jié)核菌素試驗陰性率高的問題，國外學(xué)者認(rèn)為是由于非典型或環(huán)境中的分枝桿菌的存在引起交叉反應(yīng)而致3。國內(nèi)報道BCG初種時間與PPD反應(yīng)有關(guān)4，故PPD試驗未陽轉(zhuǎn)與許多因素有關(guān)，還有待進一步探討。為提高PP

8、D陽轉(zhuǎn)率，對細(xì)胞免疫功能低下的嬰兒有必要進行免疫刺激療法，并建議推薦BCG接種時間，初次接種最好在出生后3個月左右，此時小兒免疫功能已逐漸發(fā)育成熟。 作者單位：林麗星（730000蘭州醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院兒科）金玉（730000蘭州醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院兒科）尤苓（730000蘭州醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院兒科）參考文獻1，左啟華，主編.兒科學(xué).北京：人民衛(wèi)生出版社，1993.427-430.2，尤苓，林麗星.卡介苗接種與細(xì)胞免疫的關(guān)系.實用兒科臨床雜志，1995，10:97-98.3，Vijayalakshmi V,Debi PS, Murthy KJR, et al.Cell mediated immune respons