ABI熒光定量PCR中文說明書與培訓(xùn)資料ABIPrism7300安裝培訓(xùn)ppt課件

1、ABI Prism7300/7500實(shí)時(shí)定量PCR儀用戶培訓(xùn)講義美國應(yīng)用生物系統(tǒng)中國公司廣州代表處2019年 用戶培訓(xùn)流程：4、報(bào)修請撥打全國的維護(hù)中心電話：8008100192。1、安裝完畢，工程師按照SOP培訓(xùn)儀器和軟件的操作；2、具備一定經(jīng)驗(yàn)的用戶，建議參加AB公司的培訓(xùn)班，接受應(yīng)用 及故障排除培訓(xùn)；培訓(xùn)班在北京、上海、廣州等地定期舉行，每臺(tái)儀器有兩個(gè)免費(fèi)名 額；培訓(xùn)班日程表每半年更新一次，可以到AB公司的網(wǎng)站上查詢：appliedbiosystems。3、鼓勵(lì)用戶與AB公司的應(yīng)用專家直接聯(lián)系，協(xié)商進(jìn)行現(xiàn)場標(biāo)準(zhǔn) 品和未知樣品的實(shí)驗(yàn)培訓(xùn)；AB產(chǎn)品線的聯(lián)系方法：陳云地/p>

2、6-407，8008203939chenydappliedbiosystems培訓(xùn)內(nèi)容定量定量PCR的化學(xué)原理的化學(xué)原理傳統(tǒng)PCR的過程：三個(gè)步驟一、變性：DNA雙鏈結(jié)構(gòu)被分開；94C-96C二、復(fù)性：引物結(jié)合到DNA鏈上；40C-65C三、延伸：新DNA合成。72C傳統(tǒng)PCR的過程：24816傳統(tǒng)的檢測方法使用的是“終點(diǎn)法”：即在反映完成以后再進(jìn)行檢測，如跑膠。傳統(tǒng)PCR的檢測方法：實(shí)時(shí)熒光定量實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)時(shí)每個(gè)循環(huán)進(jìn)行測量。熒光在反應(yīng)體系中加入某些熒光物質(zhì)，熒光物質(zhì)所發(fā)出的信號的強(qiáng)度與體系中的DNA的多少有一定的對應(yīng)關(guān)系，并且信號強(qiáng)度能隨著體系中的DNA濃度的改變而改變。PCR類似

3、于傳統(tǒng)的PCR。入射光染料分子出射光熒光物質(zhì)在接受了外界光的照射后，能夠向外發(fā)射波長比入射光長的光探針法：探針法：High Energy moleculeLow energy molecule能量不同的兩個(gè)染料分子在空間距離上很接近時(shí)，在受到外界能量不同的兩個(gè)染料分子在空間距離上很接近時(shí)，在受到外界光照射的時(shí)候，能量高的分子就會(huì)將吸收到的能量轉(zhuǎn)移至能量光照射的時(shí)候，能量高的分子就會(huì)將吸收到的能量轉(zhuǎn)移至能量低的分子，使本身能量降低。由于本身能量已經(jīng)降低，高能的低的分子，使本身能量降低。由于本身能量已經(jīng)降低，高能的分子就不會(huì)向外發(fā)光，所以，對于高能分子來說，光就好像是分子就不會(huì)向外發(fā)光，所以，對于

4、高能分子來說，光就好像是被淬滅了一樣。被淬滅了一樣。能量轉(zhuǎn)移：能量轉(zhuǎn)移：探針法：探針法：High Energy moleculeLow energy molecule探針法：探針法：當(dāng)兩個(gè)染料分子在空間位置上距離很遠(yuǎn)時(shí)，能量高的分子所吸當(dāng)兩個(gè)染料分子在空間位置上距離很遠(yuǎn)時(shí)，能量高的分子所吸收的能量就不能轉(zhuǎn)移至能量低的分子上，這樣，兩個(gè)分子就會(huì)收的能量就不能轉(zhuǎn)移至能量低的分子上，這樣，兩個(gè)分子就會(huì)各自向外發(fā)出自己特定波長的光。各自向外發(fā)出自己特定波長的光。探針：一段DNA序列，能完全跟實(shí)驗(yàn)的目標(biāo)DNA中的一段互補(bǔ)，兩端標(biāo)上染料分子。探針法：探針法：每產(chǎn)生一個(gè)新的片段，就產(chǎn)生一個(gè)熒光分子探針法：探

5、針法：1248熒光值的不斷增加，代表著體系里面的DNA量越來越多。染料法：染料法：染料法的優(yōu)缺點(diǎn)：實(shí)時(shí)定量實(shí)時(shí)定量PCR的結(jié)果計(jì)算的結(jié)果計(jì)算所有的樣品里的DNA的量都是在按每個(gè)循環(huán)兩倍的速度增加；當(dāng)所有的樣品的報(bào)告熒光的強(qiáng)度都達(dá)到某一個(gè)數(shù)值時(shí)，各個(gè)樣品所經(jīng)歷過的循環(huán)數(shù)與樣品的起始濃度有關(guān)，起始濃度越高，所經(jīng)歷的循環(huán)次數(shù)越少。未知樣品1：未知樣品2：已知濃度的樣品1：已知濃度的樣品2：已知濃度的樣品3：已知濃度的樣品4：已知濃度的樣品5：1250250050001000020000？各個(gè)樣品的熒光值都達(dá)到“200000時(shí)所經(jīng)過的循環(huán)數(shù)：14151617181517濃度例子：例子：循環(huán)數(shù)濃度lg1

6、250lg2500lg5000lg10000lg20000141516171815lg1000017lg2500例子：例子：通過標(biāo)準(zhǔn)曲線，我們可以算出未知樣品的起始濃度是：未知樣品1：未知樣品2：2500100001517例子：例子：ABI Prism 73007300的功能一覽：的功能一覽：光源入射光濾光片半透鏡樣品架四色濾光片組檢測器7300光路圖光源入射光濾光片半透鏡樣品架五色濾光片組檢測器7500光路圖7300選用的熒光組合選用的熒光組合每個(gè)循環(huán)，儀器都會(huì)對透過四個(gè)濾光片的能量進(jìn)行讀數(shù)，得到原始數(shù)據(jù)：電腦對原始數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，得到各種顏色的光的信號強(qiáng)度數(shù)據(jù)：Ct定義好了基線的start和end cycle，threshold后，軟件對每個(gè)樣品進(jìn)行分析，