破壁松花粉的毒理試驗(yàn)

1、破壁松花粉的毒理試驗(yàn)破壁松花粉的毒理試驗(yàn) 【摘要】背景與目的:檢測(cè)破壁松花粉作為保健食品的安全性。材料與方法:按照常規(guī)方法進(jìn)行小鼠經(jīng)口急性毒性、小鼠骨髓微核試驗(yàn)、小鼠精子畸形試驗(yàn)以及大鼠 30 d 喂養(yǎng)試驗(yàn)。結(jié)果:破壁松花粉對(duì) 2 種性別的 SPF 級(jí)昆明種小鼠在灌胃量達(dá) 15 g/kg 下,2 周內(nèi)動(dòng)物未見(jiàn)明顯中毒癥狀。微核試驗(yàn)和精子畸形試驗(yàn)結(jié)果均為陰性。30 d 喂養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果表明:該受試物對(duì) Wistar 大鼠的臨床檢查、血液學(xué)、生化學(xué)、臟器重量和系數(shù)以及病理組織學(xué)等指標(biāo)無(wú)明顯的毒性作用。結(jié)論:破壁松花粉可以通過(guò)急性毒性、微核試驗(yàn)、精子畸形試驗(yàn)和 30 d 喂養(yǎng)試驗(yàn)的毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)。 【

2、關(guān)鍵詞】松花粉;急性毒性;微核;精子畸形; 30 d 喂養(yǎng)試驗(yàn) 破壁松花粉的毒理試驗(yàn)樊柏林/田輝/王護(hù)民/宋毅/付少華(湖北省疾病預(yù)防控制中心,湖北武漢 430079)花粉作為健康食療食品已有上千年的食用歷史,但目前已被人類開(kāi)發(fā)的花粉中,有 90%屬于蟲媒花粉和被子植物花粉,在裸子植物花粉中只有松花粉一種得到利用,同時(shí)在全球上百種松樹花粉中只有中國(guó)的馬尾松花粉被食用1。對(duì)花粉采用破壁工藝,有可能提高其生物學(xué)功效,由于工藝改變,需要對(duì)其安全性做進(jìn)一步的研究。為研究破壁松花粉作為保健食品的安全性,對(duì)其進(jìn)行了以下的毒理學(xué)試驗(yàn)。 1 材料與方法2 1.1 受試物破壁馬尾松花粉(松花粉),來(lái)源于某生物公

3、司,花粉為純度 99%的細(xì)粉末,用蒸餾水配制成混懸液,供急性毒性、微核和精子畸形試驗(yàn)用,同時(shí)將樣品按一定比例拌料制成塊狀供 30 d 喂養(yǎng)試驗(yàn)用。 1.2 動(dòng)物品種及來(lái)源 SPF 級(jí)昆明種小鼠和 Wistar 種大鼠,湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供,生產(chǎn)許可證號(hào)為 SCXK(鄂) 20030005,使用許可證號(hào)為SYXK(鄂)2003-0014,溫度 2224,濕度 60%70%。 1.3 小鼠急性毒性試驗(yàn)體重 1822 g 小鼠,雌雄各 10 只,受試物配制成 37.5%濃度,按 0.02 ml/g 灌胃給予 2 次/d,中間間隔 4 h,給予受試物前停食 16 h,給予受試物后連續(xù)觀察 2 周

4、,記錄動(dòng)物中毒癥狀及死亡數(shù)。 1.4 小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)體重 2426 g 小鼠 50 只,雌雄各半,隨機(jī)分 5 組, BD 組受試物組 3 組,破壁松花粉劑量分別為 2.5、5.0、10.0 g/kg,按0.02ml/g 灌胃給予。A 組為陰性對(duì)照組給予蒸餾水,E 組為陽(yáng)性對(duì)照給予 40 mg/kg 環(huán)磷酰胺。30 h 內(nèi)給予 2 次,第二次給予 6 h 后處死動(dòng)物,取胸骨骨髓涂片, Giemsa 染色。每只動(dòng)物油鏡下觀察 1 000 個(gè)嗜多染紅細(xì)胞,記錄出現(xiàn)微核的嗜多染紅細(xì)胞數(shù)。 1.5 小鼠精子畸形試驗(yàn)體重 2426 g 雄性小鼠 30 只,隨機(jī)分為 5 組, A 組(陰性對(duì)照組)給予

5、蒸餾水; E 組(陽(yáng)性對(duì)照組)給予 40 mg/kg 環(huán)磷酰胺, BD 組為受試物組,破壁松花粉劑量分別為 2.5、5.0、10.0g/kg,按 0.02 ml/g 連續(xù)灌胃給予受試物 5 d,再繼續(xù)喂養(yǎng) 30 d,處死動(dòng)物,取雙側(cè)附睪尾涂片,伊紅染色。每只動(dòng)物高倍鏡下觀察 1 000 個(gè)精子,記錄畸形精子數(shù)。 1.6 30 d 喂養(yǎng)試驗(yàn) Wistar 大鼠體重 7590 g ,共 80 只,雌雄各半,隨機(jī)分成 4組,單籠喂養(yǎng),自由攝食和飲水。受試物加入到飼料中給予,低、中、高劑量組中受試物的加入比例分別為 2.5%、5.0%和 10.0%;另設(shè)對(duì)照組。受試物各組和對(duì)照組喂養(yǎng) 30 d。記錄每

6、周攝食量。 觀察指標(biāo)包括:一般臨床癥狀;體重和食物利用率;血液學(xué)檢查(試驗(yàn)結(jié)束時(shí)測(cè)定,儀器為日本光電 MEK_6318K 全自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀);血液生化檢查(試驗(yàn)結(jié)束時(shí)測(cè)定,儀器為意大利產(chǎn) SABA18 型全自動(dòng)生化分析儀和上海長(zhǎng)征生化試劑公司生產(chǎn)的試劑盒);臟器重量和臟器系數(shù);病理組織學(xué)檢查(根據(jù)病理改變程度分“-”、“+”、“+”、“+”四級(jí)量化評(píng)價(jià))。 1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法用 SPSS 8.0 for windows 統(tǒng)計(jì)軟件包,計(jì)量資料用 one way ANVOA,計(jì)數(shù)資料采用 2 檢驗(yàn)和非參數(shù)統(tǒng)計(jì)方法(Nonparametric statistic)。 2 結(jié)果 2.1 急性毒性實(shí)驗(yàn)

7、2 次灌胃量達(dá) 15 g/kg。2 周內(nèi)動(dòng)物未見(jiàn)明顯中毒癥狀及死亡發(fā)生。 2.2 骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)受試物各組雌雄性別微核率與陰性對(duì)照組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,表明該受試物骨髓微核試驗(yàn)結(jié)果為陰性。見(jiàn)表 1。 2.3 精子畸形試驗(yàn)受試物各組與陰性對(duì)照組結(jié)果比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,均在本室測(cè)定正常值范圍內(nèi),表明該受試物精子畸形試驗(yàn)結(jié)果為陰性,見(jiàn)表 2。 2.4 30 d 喂養(yǎng)試驗(yàn)根據(jù)每周的實(shí)際攝食量和動(dòng)物體重變化計(jì)算出動(dòng)物攝入受試物的劑量(g/kg),計(jì)算公式為: 每周攝入劑量=每周進(jìn)食量/ 7摻入飼料中受試物比例1 000/該周動(dòng)物平均體重 4 周平均值劑量= (第 1 周攝入劑量+第 2 周攝入

8、劑量+第 3 周攝入劑量+第4 周攝入劑量)/4。 受試物低、中、高劑量組劑量分別為 2.96、6.09、11.86 g/kg(雌性)和 2.93、5.98、12.09 g/kg(雄性)。 對(duì)照組與受試物各組血常規(guī)及白細(xì)胞分類值均在正常值范圍內(nèi),見(jiàn)表 3。試驗(yàn)過(guò)程中動(dòng)物無(wú)死亡,被毛正常,無(wú)異常行為表現(xiàn)。受試物各組體重及食物利用率與對(duì)照組結(jié)果比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, 室正常值范圍內(nèi),見(jiàn)表 5。受試物各組臟器重量及系數(shù)與對(duì)照組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 病理組織檢查大體解剖肉眼所見(jiàn):受試物各組雌雄性大鼠的心、肝、脾、腎、胃腸與正常對(duì)照組比較其外觀顏色和臟器大小正常,均未見(jiàn)明顯滲出、增生、水腫、萎縮等

9、病變。鏡下所見(jiàn):高劑量組與對(duì)照組比較,結(jié)果均在正常形態(tài)學(xué)范圍內(nèi),未見(jiàn)明顯中毒性病理改變。 3 討論 破壁松花粉在灌胃量達(dá) 15 g/kg 時(shí),對(duì) SPF 級(jí)昆明種小鼠未見(jiàn)明顯中毒癥狀,按急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定,該受試物屬無(wú)毒級(jí)。小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)和小鼠精子畸形試驗(yàn)結(jié)果均為陰性。30 d 喂養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果表明在相當(dāng)于人群推薦量的 100 倍以上對(duì) Wistar 大鼠的臨床表現(xiàn)、血液學(xué)、生化學(xué)、臟器重量和系數(shù)以及病理組織學(xué)等指標(biāo)無(wú)明顯影響,未發(fā)現(xiàn)該受試物有明顯的毒性作用,因此在本試驗(yàn)條件下,認(rèn)為破壁松花粉可以通過(guò)急性毒性、微核試驗(yàn)、精子畸形試驗(yàn)和 30 d 喂養(yǎng)試驗(yàn)的毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià),此外 Ames

10、試驗(yàn)結(jié)果也為陰性,初步認(rèn)為該保健食品是基本安全的。我國(guó)的花粉資源蘊(yùn)藏總量居世界前列,年花粉總量可達(dá) 1 千多噸。中國(guó)的馬尾松花粉大多生長(zhǎng)在浙江、江蘇、湖北、江西等地海拔高度 1 0001 500 米的無(wú)毒無(wú)污染的高原地區(qū)1。松花粉中含油脂及色素等3,同時(shí)富含氨基酸、微量元素,及還原糖等成分4。松花粉臨床上可應(yīng)用于外傷止血,濕疹、嬰兒濕疹、尿布皮炎等皮膚病,胃及十二指腸潰瘍、慢性便秘,及咳嗽、久痢不止等癥3。有研究表明松花粉對(duì)高血脂有一定的預(yù)防作用,可增加家豬糞便量,并且使糞便中各種脂肪酸含量和脂肪排泄量增加,由此可見(jiàn),松花粉具有非常廣泛的生物學(xué)效應(yīng)。劉聰莉等5曾對(duì)赤松花粉的毒性進(jìn)行了測(cè)試,結(jié)果 LD50 大于30 g/kg 時(shí)無(wú)明顯的致畸變效應(yīng),通過(guò)此次對(duì)馬尾松花粉系統(tǒng)的毒性研究,結(jié)果也表明了松花粉作為保健食品是安全的,這將為松花粉資源的開(kāi)發(fā)利用提供有利的支持。 參考文獻(xiàn): 1關(guān)鍵.我國(guó)的特產(chǎn)食品-松花粉J .華夏長(zhǎng)壽, 1997,1(1):18. 2中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部衛(wèi)生法制與監(jiān)督司.保健食