檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)SOP文件6--PCR室作業(yè)指導(dǎo)書

1、 ABCD人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 程序文件文件編號： 版本/修訂號：A/0主題內(nèi)容關(guān)于發(fā)布程序文件的聲明生效日期：20060808 第 4 頁 共58 頁P(yáng)CR室作業(yè)指導(dǎo)書 文件編號：ABCD-3-PR-0131第A版編制： 審核： 批準(zhǔn)： 生效日期：2015年4月8日ABCD人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 ABCD人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 PCR室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號： 版本/修訂號：A/0主題內(nèi)容 編 制 說 明生效日期：20150408第 2 頁 共91 頁編 制 說 明本分冊文件可以作為單獨(dú)申請衛(wèi)生部PCR實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的全套作業(yè)文件，因此作為ISO15189質(zhì)量管理體系的PCR室作業(yè)文件，要對其重復(fù)部分進(jìn)行刪減，各檢驗(yàn)科根

2、據(jù)各自用途要求與特點(diǎn)進(jìn)行選用，特此說明。 2006年8月8日 ABCD人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 PCR室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號： 版本/修訂號：A/0主題內(nèi)容 目 錄生效日期：20060808 第 5 頁 共91 頁目 錄序號主 題 內(nèi) 容 代 號頁 號1PCR實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置及管理ABCD-3-PR-0172PCR實(shí)驗(yàn)室工作制度ABCD-3-PR-0283PCR實(shí)驗(yàn)室內(nèi)務(wù)管理制度ABCD-3-PR-0394PCR實(shí)驗(yàn)室人員的配置及管理ABCD-3-PR-04105PCR實(shí)驗(yàn)室清潔程序ABCD-3-PR-05126PCR標(biāo)本唯一標(biāo)識編號規(guī)則ABCD-3-PR-06137PCR基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的要求ABCD-3-P

3、R-07148PCR廢棄物的處理程序ABCD-3-PR-08179基因擴(kuò)增檢測及結(jié)果分析ABCD-3-PR-091810臨床標(biāo)本的保存操作程序ABCD-3-PR-102111標(biāo)本的采集運(yùn)送接收程序ABCD-3-PR-112212PCR生物防護(hù)措施ABCD-3-PR-122413PCR實(shí)驗(yàn)室化學(xué)試劑配ABCD-3-PR-132514PCR實(shí)驗(yàn)室記錄管理制度ABCD-3-PR-142615PCR應(yīng)急處理程序ABCD-3-PR-152816PCR試劑的質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)操作程序ABCD-3-PR-163017PCR消耗品進(jìn)購質(zhì)檢貯存程序ABCD-3-PR-173118PCR室內(nèi)質(zhì)量控制操作程序ABCD-3-P

4、R-183319PCR室間質(zhì)量控制操作程序ABCD-3-PR-193520PCR溫度校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序ABCD-3-PR-203621核酸擴(kuò)增熒光儀操作維護(hù)規(guī)程ABCD-3-PR-213722干式恒溫器操作維護(hù)規(guī)程ABCD-3-PR-224323離心機(jī)操作維護(hù)規(guī)程ABCD-3-PR-234524冰箱操作維護(hù)規(guī)程ABCD-3-PR-244725生物安全柜操作維護(hù)規(guī)程ABCD-3-PR-254926移液器操作維護(hù)規(guī)程ABCD-3-PR-265127沙眼衣原體核酸擴(kuò)增熒光檢測ABCD-3-PR-275428乙肝病毒核酸擴(kuò)增熒光檢測ABCD-3-PR-285629丙肝病毒核酸擴(kuò)增熒光檢測ABCD-3-P

5、R-295830結(jié)核桿菌核酸擴(kuò)增熒光檢測ABCD-3-PR-306031高速冷凍離心機(jī)操作維護(hù)規(guī)程ABCD-3-PR-3162附錄表格檢驗(yàn)科基因檢測實(shí)驗(yàn)室平面圖ABCD/001實(shí)驗(yàn)室主要負(fù)責(zé)人簡歷表ABCD/002PCR實(shí)驗(yàn)室工作人員一覽表ABCD/003PCR擴(kuò)增接收標(biāo)本記錄表ABCD/004拒收標(biāo)本記錄本ABCD/005標(biāo)本超低溫保存記錄表ABCD/006PCR試劑購買記錄表ABCD/007試劑驗(yàn)收記錄表ABCD/008PCR室特殊耗材驗(yàn)收記錄表ABCD/009普通耗材驗(yàn)收記錄表ABCD/010室間質(zhì)評記錄表ABCD/011PCR室內(nèi)質(zhì)控記錄表ABCD/012室內(nèi)質(zhì)控圖ABCD/013PC

6、R實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫濕度記錄表ABCD/014冰箱溫度質(zhì)控圖ABCD/015儀器使用記錄表ABCD/016儀器設(shè)備維護(hù)和校準(zhǔn)記錄表ABCD/017紫外消毒車消毒記錄表ABCD/018應(yīng)急處理登記表ABCD/019PCR廢血標(biāo)本處理交接表ABCD/020垃圾處理記錄表ABCD/021實(shí)驗(yàn)室清潔消毒記錄表ABCD/022PCR檢驗(yàn)報(bào)告單ABCD/023耗材進(jìn)購記錄表ABCD/024試劑耗材供應(yīng)商一覽表ABCD/025 ABCD人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 PCR室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號： 版本/修訂號：A/0主題內(nèi)容 修 訂 頁生效日期：20060808 第 6 頁 共91 頁 修 訂 頁序號文件編號頁碼需更改的內(nèi)容更改

7、內(nèi)容批準(zhǔn)人批準(zhǔn)日期1234567891011121314151617181920 ABCD人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 PCR室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號：ABCD-3-PR-01版本/修訂號：A/0主題內(nèi)容PCR實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置及管理生效日期：20060808 第 7 頁 共91 頁P(yáng)CR實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置及管理1目的：建立實(shí)驗(yàn)室的合理設(shè)置和科學(xué)管理，防止實(shí)驗(yàn)污染，保證檢測結(jié)果的可靠性。2適用范圍：本程序適用于分子診斷室的設(shè)置、工作流程和日常管理等。3負(fù)責(zé)人： 4細(xì)則：41 分子診斷室為檢驗(yàn)科下設(shè)的專業(yè)實(shí)驗(yàn)室，從事臨床標(biāo)本的基因擴(kuò)增檢測及相關(guān)科研工作。42 本實(shí)驗(yàn)室采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)作為臨床基因診斷的主要手段，實(shí)驗(yàn)

8、室分為三個(gè)區(qū)：試劑準(zhǔn)備區(qū)（第一區(qū)）、標(biāo)本處理區(qū)（第二區(qū)）、擴(kuò)增分析區(qū)（第三區(qū)）。每一工作區(qū)配備專用的設(shè)備、儀器、輔助設(shè)施、耗材、清潔用品、辦公用品、專用工作服，并有明顯的區(qū)分標(biāo)識。各區(qū)標(biāo)簽顏色：紅色（第一區(qū)）、白色或綠色（第二區(qū)）、藍(lán)色（第三區(qū)）；專用工作服：粉紅色（第一區(qū)）、白色（第二區(qū)）、藍(lán)色（第三區(qū)）。標(biāo)本的接收則在檢驗(yàn)科標(biāo)本接收處進(jìn)行。43 各工作區(qū)專用的儀器設(shè)備、辦公用品、工作服、實(shí)驗(yàn)耗材和清潔用具等，不可混用。44 各工作區(qū)配置、功能和內(nèi)務(wù)管理見各相關(guān)SOP文件。45 嚴(yán)格遵守從“試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本處理區(qū)擴(kuò)增分析區(qū)”的單一流向制度，不得逆向進(jìn)入前一工作區(qū)。46 非本實(shí)驗(yàn)室工作人員，未經(jīng)

9、許可不得入內(nèi)；進(jìn)修、實(shí)習(xí)或其他科室人員因科研活動需要，進(jìn)入實(shí)驗(yàn)區(qū)域（試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、擴(kuò)增分析區(qū)） 需首先熟悉本程序的各項(xiàng)規(guī)定并嚴(yán)格遵守執(zhí)行，在本實(shí)驗(yàn)室人員監(jiān)督指導(dǎo)下進(jìn)行。47 實(shí)驗(yàn)完畢后做好清潔消毒工作。5. 本文涉及以下圖表：1.實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)平面圖 ABCD人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 PCR室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號：ABCD-3-PR-02版本/修訂號：A/0主題內(nèi)容PCR實(shí)驗(yàn)室工作制度生效日期：20060808 第 8 頁 共91 頁P(yáng)CR實(shí)驗(yàn)室工作制度1目的 ：保持良好的工作環(huán)境，以確保檢測結(jié)果的可靠性，防止交叉污染，防止差錯、事故及糾紛的發(fā)生。2適用范圍：所有本實(shí)驗(yàn)室人員。3負(fù)責(zé)人： 4細(xì)則：4

10、1 本實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行臨床基因擴(kuò)增檢測及相關(guān)實(shí)驗(yàn)工作，不得進(jìn)行其它實(shí)驗(yàn)操作。42各區(qū)的用品不得混用。43在各區(qū)的實(shí)驗(yàn)操作過程中，操作者必須戴手套和帽子，嚴(yán)格按照操作規(guī)程。44試劑準(zhǔn)備區(qū)只能進(jìn)行試劑的貯存及配制等相關(guān)操作（見相關(guān)SOP文件）。45標(biāo)本處理區(qū)只能進(jìn)行臨床標(biāo)本的保存，核酸提取、保存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測定RNA時(shí)cDNA的合成（見相關(guān)SOP文件）。46擴(kuò)增分析區(qū)只能進(jìn)行DNA或cDNA的擴(kuò)增、實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的分析（見相關(guān)SOP文件）。47進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)嚴(yán)格執(zhí)行本實(shí)驗(yàn)室的各項(xiàng)操作規(guī)程，及時(shí)做好各種操作記錄，力求準(zhǔn)確、可靠。實(shí)驗(yàn)完畢，做好清潔、整理及分析統(tǒng)計(jì)等工作。48室內(nèi)儀器由專人負(fù)責(zé)

11、，未經(jīng)許可，不得隨意使用或挪用；愛護(hù)使用儀器，定期進(jìn)行保養(yǎng)與維修。49 愛護(hù)醫(yī)院財(cái)產(chǎn)，注意安全；離開實(shí)驗(yàn)室前應(yīng)關(guān)好門窗，檢查水、電等。 ABCD人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 PCR室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號：ABCD-3-PR-03版本/修訂號：A/0主題內(nèi)容PCR實(shí)驗(yàn)室內(nèi)務(wù)管理制度生效日期：20060808 第 9 頁 共91 頁P(yáng)CR實(shí)驗(yàn)室內(nèi)務(wù)管理制度1目的：保證實(shí)驗(yàn)室日常內(nèi)務(wù)管理及清潔工作順利進(jìn)行。2適用范圍：實(shí)驗(yàn)室相關(guān)人員及醫(yī)院相關(guān)清潔工人。3負(fù)責(zé)人： 4細(xì)則：41非本室工作人員未經(jīng)允許不得進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。42各區(qū)的用品不得混用。43實(shí)驗(yàn)人員要有強(qiáng)烈的時(shí)間觀念，按時(shí)上下班，不遲到、早退。44進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的工作人

12、員必須遵守實(shí)驗(yàn)室的單一流向的規(guī)定，禁止逆向走動。45所有儀器（如PCR擴(kuò)增儀）須有專人負(fù)責(zé)，并有使用維護(hù)記錄；實(shí)驗(yàn)人員必須熟悉儀器性能后方允許操作，并嚴(yán)格遵守操作規(guī)程。46所有試劑進(jìn)購、配制、質(zhì)檢、使用均要有記錄，未經(jīng)允許不得隨意帶出本實(shí)驗(yàn)室。47每天了解儀器運(yùn)轉(zhuǎn)情況及試劑使用情況，確保儀器整潔安全，試劑合格使用。48各區(qū)的各種清潔消毒均應(yīng)有記錄，工作衣消毒時(shí)注意各區(qū)應(yīng)分開進(jìn)行處理。49注意保持實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生整潔，嚴(yán)禁在室內(nèi)抽煙、吃零食，非實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)盡量少入。4. 10下班前檢查門、窗、水、電，節(jié)假日應(yīng)指定人員負(fù)責(zé)檢查實(shí)驗(yàn)室的儀器、設(shè)備。 ABCD人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 PCR室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號：A

13、BCD-3-PR-04版本/修訂號：A/0主題內(nèi)容PCR實(shí)驗(yàn)室人員的配置及管理生效日期：20060808 第 11 頁 共91 頁P(yáng)CR實(shí)驗(yàn)室人員的配置及管理1目的：保證實(shí)驗(yàn)室有足夠數(shù)量的合格的具備開展該類實(shí)驗(yàn)?zāi)芰Φ膶?shí)驗(yàn)人員。2適用范圍：適用于實(shí)驗(yàn)室人員配置、管理、培訓(xùn)及考核。3負(fù)責(zé)人： 4細(xì)則：41 人員要求411 本實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)為醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)或相關(guān)專業(yè)畢業(yè)，具有中級以上技術(shù)職稱或?qū)？埔陨蠈W(xué)歷。412 實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)參加衛(wèi)生部或省臨檢中心舉辦的PCR技術(shù)培訓(xùn)，并取得合格證。413 對于新進(jìn)入本室的人員，如尚未取得PCR技術(shù)培訓(xùn)合格證，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)室有培訓(xùn)合格證的上級技術(shù)人員的指導(dǎo)下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)

14、工作，實(shí)驗(yàn)報(bào)告由有資格人員出具，并應(yīng)在最短的時(shí)間內(nèi)取得上崗培訓(xùn)合格證。42 人員配置421 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)工作需要配備足夠的工作人員，目前實(shí)驗(yàn)室有主管技師2人、技師1人，3人都已獲得培訓(xùn)合格證，視工作量的增加和業(yè)務(wù)發(fā)展需要，會適當(dāng)增加工作人員。422 各級技術(shù)人員履行相應(yīng)的工作職責(zé)。43 人員培訓(xùn)及考核431 實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人或負(fù)責(zé)人指定人員參加每年衛(wèi)生部PCR室間質(zhì)評總結(jié)會。432 實(shí)驗(yàn)室工作人員每12年至少參加1次PCR技術(shù)的省級或國家級繼續(xù)教育項(xiàng)目，參加相關(guān)學(xué)術(shù)交流會議。433 安排未取得上崗培訓(xùn)合格證的工作人員在合適的時(shí)間內(nèi)參加技術(shù)培訓(xùn)。434 科室不定期組織實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部實(shí)驗(yàn)人員學(xué)習(xí)、更新核酸

15、擴(kuò)增方面的相關(guān)知識，提升自身的理論學(xué)習(xí)水平。特別是在標(biāo)本接收區(qū)采血、接收標(biāo)本的人員，需定期對其進(jìn)行有關(guān)核酸擴(kuò)增技術(shù)，標(biāo)本采集、保存、運(yùn)輸?shù)戎R的培訓(xùn)。一些科室的送檢標(biāo)本由該科室的人員送到標(biāo)本接收區(qū)，對這些臨床醫(yī)護(hù)人員也要定期進(jìn)行有關(guān)核酸擴(kuò)增技術(shù)，標(biāo)本采集、保存、運(yùn)輸?shù)戎R的培訓(xùn)。435 本實(shí)驗(yàn)室工作人員每年進(jìn)行考核一次,考核內(nèi)容:a)日常工作質(zhì)量b)室內(nèi)質(zhì)控測評c)室間質(zhì)控測評d)在抱怨處理中的表現(xiàn) 436 本實(shí)驗(yàn)室工作人員實(shí)行嚴(yán)格獎懲制度,有下列表現(xiàn)者可受獎:a)工作質(zhì)量高, 質(zhì)控測評成績優(yōu)秀者b)有科研能力,并有一定數(shù)量和質(zhì)量的論文發(fā)表c)有獨(dú)創(chuàng)性工作成果,經(jīng)鑒定認(rèn)可者d)受到有關(guān)部門或群

16、眾嘉獎?wù)哂邢铝星闆r者將受到懲處:a)工作質(zhì)量問題較多，質(zhì)控測評成績不合格；b)不遵守規(guī)章制度并造成一定影響；c)不求上進(jìn)。437 本實(shí)驗(yàn)室工作人員獎懲方法分精神及物質(zhì)兩類,經(jīng)實(shí)驗(yàn)室上報(bào)醫(yī)院及有關(guān)部門批準(zhǔn)后執(zhí)行。438 本實(shí)驗(yàn)室工作人員均建立業(yè)績檔案,實(shí)行能進(jìn)能出制度,不斷吸收高質(zhì)量人員,加強(qiáng)培訓(xùn)和提高,對于不適合本室工作的人員要及時(shí)調(diào)離。44 人員管理441 實(shí)驗(yàn)室建立所有工作人員的技術(shù)檔案，包括：學(xué)歷、任職資格、發(fā)表論文、研究成果、培訓(xùn)等相關(guān)材料復(fù)印件。442 技術(shù)檔案分文本檔案和電子檔案，文本檔案每年更新1次，電子檔案隨時(shí)更新。5. 本文涉及以下表格實(shí)驗(yàn)室主要負(fù)責(zé)人簡歷表 PCR實(shí)驗(yàn)室工作

17、人員一覽表 培訓(xùn)申請表 年度培訓(xùn)計(jì)劃表 培訓(xùn)記錄表 員工培訓(xùn)履歷表 人員檔案卡 ABCD人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 PCR室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號：ABCD-3-PR-05版本/修訂號：A/0主題內(nèi)容PCR實(shí)驗(yàn)室清潔程序生效日期：20060808 第 12 頁 共91 頁P(yáng)CR實(shí)驗(yàn)室清潔程序1目的：保證實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的整潔，防止污染。2適用范圍：適于實(shí)驗(yàn)室工作環(huán)境、實(shí)驗(yàn)臺面、工作服、移液器等的清潔消毒工作。3負(fù)責(zé)人： 操作人： 4細(xì)則：41 實(shí)驗(yàn)室地面必須平整、干凈，通道要利于通行，沒有無用的物品阻礙。42 合理規(guī)劃實(shí)驗(yàn)室內(nèi)物品，做到擺放整齊、有序，無用的或使用效率低的物品放置到儲存處，常用的物品要容易尋找到。4

18、3抽屜、柜子、文件類物品要作好標(biāo)記，以方便識別。44 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后用2%戊二醛對臺面進(jìn)行清潔，并用移動紫外燈進(jìn)行消毒。45每天對使用過的移液器用75%酒精進(jìn)行擦拭。每周1次對移液器咀進(jìn)行75%酒精浸泡15分鐘左右，若使用過程中發(fā)生污染應(yīng)隨時(shí)浸泡處理。46實(shí)驗(yàn)過程中如發(fā)生標(biāo)本或試劑外濺，應(yīng)立即用2%戊二醛滴上，濾紙蓋上半小時(shí)，然后用酒精擦洗，并用移動紫外燈消毒。47 每天實(shí)驗(yàn)前開啟各區(qū)的通風(fēng)系統(tǒng)，各區(qū)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，分別打開傳遞窗紫外燈、移動紫外燈（對實(shí)驗(yàn)臺面消毒）、天花板紫外燈消毒實(shí)驗(yàn)室，每次開啟 3060分鐘。48 待紫外燈消毒時(shí)間足夠后，依次關(guān)閉各區(qū)紫外燈并記錄。49 依次清潔三個(gè)區(qū)的實(shí)驗(yàn)臺面和

19、地面，各區(qū)清潔消毒工具均專用，不可混用，注意按照單一方向流程的原則來進(jìn)行清潔。410 處理好各區(qū)廢棄物，交醫(yī)院集中處理。411 每周將工作服交院洗衣房洗滌消毒，不同實(shí)驗(yàn)區(qū)的工作服隔開洗滌。5. 本文涉及以下表格實(shí)驗(yàn)室清潔消毒記錄表 垃 圾 處 理 記 錄 表 ABCD人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 PCR室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號：ABCD-3-PR-06版本/修訂號：A/0主題內(nèi)容PCR標(biāo)本唯一標(biāo)識編號規(guī)則生效日期：20060808 第 14 頁 共91 頁P(yáng)CR標(biāo)本唯一標(biāo)識編號規(guī)則1目的：保證標(biāo)本編號的唯一性，也是準(zhǔn)確發(fā)放報(bào)告的基礎(chǔ)。2適用范圍：使用核酸擴(kuò)增熒光檢測實(shí)驗(yàn)室所開展的四種檢測項(xiàng)目：乙型肝炎病毒、丙型

20、肝炎病毒、結(jié)核桿菌、沙眼衣原體。3負(fù)責(zé)人： 操作人： 4程序：41 按檢測日期分類標(biāo)記根據(jù)標(biāo)本送檢的日期，每天的標(biāo)本對應(yīng)標(biāo)記一種唯一的代號。如當(dāng)天為2005年3月1日，則編為050301。42 按檢測類型分類標(biāo)記根據(jù)檢測項(xiàng)目的不同，每種檢測項(xiàng)目對應(yīng)標(biāo)記一種唯一的代號。如乙型肝炎病毒標(biāo)記為B，丙型肝炎病毒標(biāo)記為HC，結(jié)核桿菌標(biāo)記為T，沙眼衣原體為C。43 按驗(yàn)單接收順序編號在同種檢測類型的驗(yàn)單中，按驗(yàn)單順序編號。如第一個(gè)檢測乙型肝炎病毒的驗(yàn)單編為B01，第二個(gè)檢測乙型肝炎病毒的驗(yàn)單編為B02，第三個(gè)檢測結(jié)核的驗(yàn)單編為B03等。44 特殊標(biāo)本的編號如有特殊情況，應(yīng)在標(biāo)記前面增加特異字母區(qū)別開，如住

21、院的單和門診的單、其它醫(yī)院送來的單和本醫(yī)院的單要區(qū)分開等。45 編號步驟a）對當(dāng)天送來的標(biāo)本，根據(jù)編號的基本原則編號，每個(gè)樣本的每個(gè)檢測項(xiàng)目對應(yīng)一個(gè)唯一的編號（如050301T04）。b） 用筆在每張檢驗(yàn)申請單和對應(yīng)的樣品管上作好相同的標(biāo)記。c） 做好標(biāo)本的接收記錄，每個(gè)樣本的記錄都應(yīng)包括以下信息：接收時(shí)間、醫(yī)院、科室、送檢醫(yī)生、患者姓名、性別、年齡、標(biāo)本類別、標(biāo)本狀態(tài)、送標(biāo)本者、接收人、檢驗(yàn)單號、標(biāo)本唯一統(tǒng)編號等。d）處理好樣品、點(diǎn)樣后，將反應(yīng)管放入擴(kuò)增儀上開始擴(kuò)增。f）擴(kuò)增得到結(jié)果后，先在統(tǒng)計(jì)簿上填入結(jié)果，作好記錄，再一一把實(shí)驗(yàn)結(jié)果填入相應(yīng)申請單。g）發(fā)放檢驗(yàn)報(bào)告單。5. 本文涉及以下圖表

22、：PCR擴(kuò)增接收標(biāo)本記錄表 ABCD人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 PCR室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號：ABCD-3-PR-07版本/修訂號：A/0主題內(nèi)容PCR基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的要求生效日期：20060808 第 17 頁 共91 頁P(yáng)CR基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的要求1目的：規(guī)定在各區(qū)內(nèi)所進(jìn)行的工作及其操作。2適用范圍：所有在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行的工作。3負(fù)責(zé)人： 操作人： 4程序：實(shí)驗(yàn)室分四區(qū):標(biāo)本接收區(qū)；試劑貯存、準(zhǔn)備區(qū)；標(biāo)本制備區(qū)；擴(kuò)增區(qū)。進(jìn)入各區(qū)嚴(yán)格按照單一方向進(jìn)行，即試劑貯存、準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本接收區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增區(qū)。各區(qū)及其設(shè)備、物品必須有明確的標(biāo)記，嚴(yán)禁混用。進(jìn)入PCR實(shí)驗(yàn)室的工作人員（含衛(wèi)生員），都必須遵守實(shí)驗(yàn)室的規(guī)則，尤其嚴(yán)

23、格遵守進(jìn)入PCR實(shí)驗(yàn)室的唯一流向。不可進(jìn)入PCR擴(kuò)增后區(qū)打掃衛(wèi)生，再返回?cái)U(kuò)增前區(qū)工作。防止非本室工作人員串崗，進(jìn)入本室。尤其不得為找人，而逆向誤入PCR實(shí)驗(yàn)室。總則（1） PCR實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)具備醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、微生物檢驗(yàn)基本知識，大專以上學(xué)歷，并受過PCR實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)知識和技能培訓(xùn)。（2） PCR實(shí)驗(yàn)室分試劑準(zhǔn)備，樣本準(zhǔn)備，PCR擴(kuò)增和產(chǎn)物檢測四個(gè)室，各室的實(shí)驗(yàn)物品（含加樣器，試管架，吸頭，記錄紙，筆等），不得混用，須貼上標(biāo)簽予以區(qū)別。（3） 實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員必須嚴(yán)格按照PCR實(shí)驗(yàn)室操作程序進(jìn)行，包括實(shí)驗(yàn)室擦洗。臺面消毒，離心管，吸頭的無菌滅活準(zhǔn)備，儀器使用和廢棄物處理等。（4） 進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的工作人

24、員必須更換各室不同的工作服（含帽和鞋），勤換洗工作服，以及遵守實(shí)驗(yàn)室的唯一流向的規(guī)定，嚴(yán)禁反向流動。（5） 進(jìn)入PCR實(shí)驗(yàn)室后區(qū)的物品不許帶進(jìn)PCR實(shí)驗(yàn)室前區(qū)。每天實(shí)驗(yàn)開始前，必須清潔地面和消毒實(shí)驗(yàn)室前區(qū)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束應(yīng)紫外線消毒實(shí)驗(yàn)臺面，產(chǎn)物分析室紫外燈最好徹夜開啟，排風(fēng)扇應(yīng)晝夜工作。每天下班前處理好廢物，應(yīng)關(guān)好水、電、煤氣和門窗。（6） 定期校準(zhǔn)和維修PCR儀、酶標(biāo)儀及離心機(jī)、水浴箱等儀器設(shè)備。（7） 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不得飲食、吸煙。4.1標(biāo)本接收區(qū)4.1.1實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入該區(qū)須穿本區(qū)白色工作服，接收標(biāo)本須戴一次性手套。4.1.2記錄實(shí)驗(yàn)室干、濕度，繪制冰箱溫度圖。使用帶有本區(qū)標(biāo)識的記錄本、紙和筆，每項(xiàng)

25、記錄，書寫工整詳細(xì)。4.1.3對送檢的標(biāo)本實(shí)行雙簽制度，并仔細(xì)檢查是否符合檢測要求，對有不符合要求的標(biāo)本及時(shí)通知相關(guān)科室重新采樣，并作記錄，每份標(biāo)本需給出唯一性編號。4.1.4本區(qū)所有廢棄物分類裝入垃圾袋，封好，在垃圾筐上套好新的垃圾袋，將垃圾帶出實(shí)驗(yàn)室。4.1.5每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，清潔實(shí)驗(yàn)臺及地面打開紫外燈消毒30分鐘。記錄紫外燈使用情況。4.2試劑貯存、準(zhǔn)備區(qū)4.2.5使用帶有本區(qū)標(biāo)識的記錄本、紙和筆，每項(xiàng)記錄，書寫工整詳細(xì)。4.2.6準(zhǔn)備好的試劑送入下一區(qū) ，還原實(shí)驗(yàn)臺面，將本區(qū)所有廢棄物分類裝入垃圾袋，封口，在垃圾筐上套好新的垃圾袋，將本區(qū)垃圾帶出實(shí)驗(yàn)室。4.2.7白色工作服留在本區(qū)。4

26、.2.8本區(qū)維持相對正壓狀態(tài)（開啟緩沖區(qū)的排氣扇）。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，清潔實(shí)驗(yàn)臺及地面打開紫外燈消毒30分鐘。4.3標(biāo)本制備區(qū)4.3.1實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入該區(qū)須在緩沖區(qū)更換專用藍(lán)色工作服及拖鞋。實(shí)驗(yàn)中須使用一次性帽子，戴手套，手套在實(shí)驗(yàn)過程中疑有污染應(yīng)立即更換。4.3.2將傳入本區(qū)的試劑放入冰箱冷凍室試劑存放專區(qū)暫存。記錄實(shí)驗(yàn)室干、濕度，繪制冰箱溫度圖。4.3.3將冰箱內(nèi)二周前的標(biāo)本密封丟入垃圾筐，然后記錄標(biāo)本的保存情況。4.3.4使用帶有本區(qū)標(biāo)識的記錄本、紙和筆，每項(xiàng)記錄，書寫工整詳細(xì)。4.3.5按試劑盒說明書對標(biāo)本進(jìn)行處理，將處理好的標(biāo)本在超凈工作臺內(nèi)加樣，記錄標(biāo)本的處理過程。4.3.6將加樣后的試劑

27、傳送下一區(qū)，還原實(shí)驗(yàn)臺面，關(guān)閉所有儀器，記錄儀器使用時(shí)間和運(yùn)行狀態(tài)。4.3.7使用過的離心管、吸頭須置于盛有1084液的廢液缸中，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后方丟入垃圾袋，患者樣品應(yīng)按有生物傳染性危險(xiǎn)品對待。4.3.8將本區(qū)所有廢棄物分類裝入垃圾袋，封口，在垃圾筐上套好新的垃圾袋，將垃圾帶出本區(qū)。4.3.9將藍(lán)色工作服留在本區(qū)。4.3.10本區(qū)應(yīng)避免不必要的走動，同時(shí)維持相對正壓狀態(tài)，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，清潔實(shí)驗(yàn)臺及地面打開紫外燈消毒30分鐘。4.4擴(kuò)增產(chǎn)物檢測區(qū)4.4.1實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入該區(qū)須在緩沖區(qū)更換專用粉色工作服及拖鞋。4.4.2記錄實(shí)驗(yàn)室干、濕度，繪制冰箱溫度圖。4.4.3使用帶有本區(qū)標(biāo)識的記錄本、紙和筆，每項(xiàng)記

28、錄，書寫工整詳細(xì)。4.4.4將傳入本區(qū)加樣后的試劑上機(jī)擴(kuò)增。4.4.5擴(kuò)增完成后，記錄檢測結(jié)果，及時(shí)發(fā)放報(bào)告單，記錄儀器使用時(shí)間和運(yùn)行狀態(tài)。4.4.6將本區(qū)所有廢棄物分類裝入垃圾袋，封口，在垃圾筐上套好新的垃圾袋，然后將垃圾帶出實(shí)驗(yàn)室。4.4.7將粉色工作服留在本室再離開實(shí)驗(yàn)室4.4.8嚴(yán)禁本區(qū)物品帶至其他區(qū)，該區(qū)需維持負(fù)壓狀態(tài)，排氣扇24小時(shí)排氣，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后清潔該區(qū)打開紫外燈照射，最好整夜消毒，記錄紫外燈使用情況。5. 本文涉及以下表格PCR實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫濕度記錄表 冰箱溫度質(zhì)控圖 實(shí)驗(yàn)室清潔消毒記錄表 垃 圾 處 理 記 錄 表 紫外消毒車消毒記錄表 ABCD人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 PCR室作業(yè)指導(dǎo)

29、書文件編號：ABCD-3-PR-08版本/修訂號：A/0主題內(nèi)容PCR廢棄物的處理程序生效日期：20060808 第 18 頁 共91 頁P(yáng)CR廢棄物的處理程序1目的：保證實(shí)驗(yàn)室、實(shí)驗(yàn)人員和外部環(huán)境的安全。2適用范圍：核酸擴(kuò)增熒光檢測實(shí)驗(yàn)室常用化學(xué)試劑（NaOH、EDTA、乙醇、生理鹽水等）、實(shí)驗(yàn)室廢棄物的處理；3負(fù)責(zé)人： 操作人： 4細(xì)則：4.1科室職責(zé)應(yīng)對本室工作人員講明本程序在預(yù)防交叉、實(shí)驗(yàn)室污染及切斷傳播途徑中的重要性，并要求嚴(yán)格執(zhí)行。4.2實(shí)驗(yàn)室所有垃圾，裝入專用污物袋內(nèi)，各區(qū)備有：生活垃圾袋（黑色）及生物污染垃圾袋（黃色）。使用過的一次性消耗品(如試管、吸頭、離心管、等)，先放入1

30、0%次氯酸鈉溶液中浸泡24小時(shí)后，再放入黃色垃圾袋內(nèi)，使用過的手套、鞋套等直接放入黃色垃圾袋內(nèi)交醫(yī)院集中處理。4.3 夾取標(biāo)本的工具，如鉗、鑷、接種環(huán)、吸管等，用后均應(yīng)消毒清潔，進(jìn)行微生物檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)重新滅菌，金屬工具可燒灼滅菌或消毒液浸泡；玻璃制品干熱或壓力蒸汽滅菌。4.4 一次性塑料痰盂，用2%戊二醛液浸泡24小時(shí)后，放入黃色垃圾袋內(nèi)交醫(yī)院集中處理。4.5 廢棄標(biāo)本如血、尿、胸水、腹水、腦脊液、唾液、胃液、腸液、關(guān)節(jié)腔液等用10%的84液浸泡24小時(shí)后，交醫(yī)院集中處理。4.6 盛標(biāo)本的容器，若為一次性使用的紙質(zhì)容器及其外面包被的廢紙，放入污物袋里交醫(yī)院處理；對可再次使用的玻璃、塑料或搪瓷容器

31、，煮沸15分鐘或加入10%次氯酸鈉溶液浸泡24小時(shí)，消毒液每日更換，消毒后用洗滌劑及流水刷洗，瀝干，用于微生物培養(yǎng)采樣者，用壓力蒸汽滅菌后備用。4.7 廢棄標(biāo)本及其容器裝入黃色垃圾袋內(nèi)、封閉，交醫(yī)院污物處理中心處理。4.8日常生活垃圾如紙屑等按一般垃圾交醫(yī)院處理。5. 本文涉及以下表格PCR廢血標(biāo)本處理交接表 ABCD人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 PCR室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號：ABCD-3-PR-09版本/修訂號：A/0主題內(nèi)容基因擴(kuò)增檢測及結(jié)果分析生效日期：20060808 第 21 頁 共91 頁基因擴(kuò)增檢測實(shí)驗(yàn)及結(jié)果分析1、目的：保證擴(kuò)增及結(jié)果分析的標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化。2適用范圍：適用于本室使用的普通離心機(jī)

32、。3負(fù)責(zé)人：肖靜 操作人：胡可存 蔣藝勤4、標(biāo)準(zhǔn)程序：4.1 基因擴(kuò)增檢測標(biāo)準(zhǔn)程序：擴(kuò)增反應(yīng)前須先在樣本輸入模板上按照事先排好的標(biāo)本位置進(jìn)行設(shè)置。每次實(shí)驗(yàn)除待檢標(biāo)本，還需包括：陰性對照、陽性對照、室內(nèi)質(zhì)控品各一份，一組陽性標(biāo)準(zhǔn)品（4個(gè)梯度108、106、105、104）。4.1.1打開電腦電源開關(guān)，進(jìn)入Windows NT界面。4.1.2 接著打開PCR儀電源開關(guān)，預(yù)熱5分鐘。 4.1.3雙擊電腦桌面的ABI Prism 5700 SDS Software圖標(biāo)進(jìn)入程序設(shè)置界面。4.1.4單擊 “文件”菜單中的 “新建”命令，（或單擊工具欄中的“新建”按扭）。在測定、容器和模板中做相應(yīng)的選擇，點(diǎn)

33、擊OK。 4.1.5應(yīng)用檢測管理程序，并將其添加到樣品板文檔中。 4.1.6檢測反應(yīng)管，4.1.7 根據(jù)當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需條件編輯時(shí)間和溫度。運(yùn)行樣品板文檔。4.2 結(jié)果分析標(biāo)準(zhǔn)程序 ：應(yīng)按以下步驟進(jìn)行：全部曲線陰性對照陽性對照陽性室內(nèi)質(zhì)控品陽性標(biāo)準(zhǔn)品逐個(gè)分析（標(biāo)出陽性標(biāo)本和可疑標(biāo)本）調(diào)整參數(shù)，獲得較好的標(biāo)準(zhǔn)曲線，顯示定量結(jié)果登記，發(fā)報(bào)告。4.2.1 整體曲線的觀察：將所有曲線選中進(jìn)行整體觀察1）觀察是否存在污染情況（包括標(biāo)本污染和試劑污染），特別應(yīng)注意大量曲線在同一Ct值出現(xiàn)上漲的情況。2）觀察是否有光路傳導(dǎo)阻滯或電壓波動等機(jī)器原因形成的異常曲線。4.2.2 陰性對照的分析陰性對照：試劑中加入與待

34、檢標(biāo)本進(jìn)行同樣處理的已知陰性標(biāo)本。作用：用以監(jiān)測實(shí)驗(yàn)室和前處理過程中是否存在污染。4.2.3 陽性對照的分析陽性對照：試劑中加入與待檢標(biāo)本進(jìn)行同樣處理的已知陽性標(biāo)本。作用：用以監(jiān)測實(shí)驗(yàn)?zāi)芊裾z出陽性標(biāo)本，避免假陰性的出現(xiàn)。4.2.4 室內(nèi)質(zhì)控品的分析室內(nèi)質(zhì)控品：試劑中加入與待檢標(biāo)本進(jìn)行同樣處理的已知濃度室內(nèi)質(zhì)控品。作用：用以監(jiān)控日常實(shí)驗(yàn)的精密度。4.2.5 陽性標(biāo)準(zhǔn)品的分析1）各梯度曲線的分布是否均勻，若各梯度曲線均未分開，則表明陽模稀釋可能存在問題，提示實(shí)驗(yàn)中存在較大人為誤差。2）觀察各曲線的Ct值是否在平日的正常位置。情況1：若出現(xiàn)低拷貝標(biāo)準(zhǔn)品做不出，而各曲線Ct 值均后移，則判斷是否為

35、試劑擴(kuò)增效率下降（如試劑過期或保存條件不合格）。情況2：出現(xiàn)低拷貝標(biāo)準(zhǔn)品做不出，而高拷貝曲線Ct值均正常，則提示可能存在低拷貝陽性標(biāo)準(zhǔn)品的降解情況。3）每日必做104標(biāo)準(zhǔn)品，用作以下三方面監(jiān)控：一是否存在操作誤差，如加樣量過少等原因?qū)е?04標(biāo)準(zhǔn)品未能檢出；二是否存在稀釋后的梯度放置過久，低拷貝標(biāo)準(zhǔn)品降解的情況；三是若高拷貝標(biāo)準(zhǔn)品出現(xiàn)Ct值后移，且能排除情況1、2，則判斷是否為試劑靈敏度下降。4.2.6 單個(gè)曲線的判斷：逐個(gè)分析每條曲線，判斷曲線的陰陽性或?qū)倏梢汕€。（可疑標(biāo)本是指曲線在25個(gè)Ct值后出現(xiàn)上漲且平臺趨勢不明顯或上漲幅度比較低的標(biāo)本?？梢蓸?biāo)本要第二天重做，兩次結(jié)果一致則報(bào)陽性，否

36、則結(jié)果報(bào)陰性。）曲線觀察內(nèi)容：在基線選擇28時(shí)觀察熒光強(qiáng)度（是否有三期特征）。并分別在Delta Rn vs.Cycle 、Ct vs.Well Number和 Rn vs.Cycle這三種擴(kuò)增圖形式下分析數(shù)據(jù)。4.2.7 得出定量結(jié)果：調(diào)節(jié)基線和閾值以得到一較好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。電腦據(jù)此曲線給出陽性結(jié)果值。此時(shí)應(yīng)排除某些陰性標(biāo)本因熒光曲線假性上揚(yáng)而得出的假陽性結(jié)果和某些弱陽性標(biāo)本因終末熒光值過低而顯示的假陰性。4.2.8 發(fā)放報(bào)告：及時(shí)登記檢測結(jié)果記錄，發(fā)放臨床報(bào)告。4.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果無效的判斷標(biāo)準(zhǔn)：出現(xiàn)下述四種情況中的任何一種或多種，當(dāng)次實(shí)驗(yàn)結(jié)果不可發(fā)，查找原因，重做實(shí)驗(yàn)。4.3.1 陰性對照出現(xiàn)擴(kuò)

37、增。4.3.2 陽性對照無擴(kuò)增。 4.3.3大批甚至所有的標(biāo)本都擴(kuò)增了。4.3.4 室內(nèi)質(zhì)控血清檢測結(jié)果出現(xiàn)失控情況，實(shí)驗(yàn)失控的具體標(biāo)準(zhǔn)詳見室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程序。4.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效的判斷標(biāo)準(zhǔn)：達(dá)到下列要求后，當(dāng)次實(shí)驗(yàn)有效，可以發(fā)放結(jié)果。4.4.1陰性對照沒有擴(kuò)增，陽性對照擴(kuò)增。4.4.2陽性標(biāo)準(zhǔn)品梯度曲線平滑均勻，斜率、截距和相關(guān)系數(shù)三個(gè)參數(shù)的數(shù)值均在范圍內(nèi)。4.4.3室內(nèi)質(zhì)控血清檢測結(jié)果處于在控狀態(tài)，具體標(biāo)準(zhǔn)詳見5. 本文涉及以下表格室間質(zhì)評記錄表 PCR室內(nèi)質(zhì)控記錄表 室內(nèi)質(zhì)控圖 ABCD人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 PCR室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號：ABCD-3-PR-10版本/修訂號：A/0主題內(nèi)容臨床標(biāo)

38、本的保存操作程序生效日期：20060808 第 22 頁 共91 頁臨床標(biāo)本的保存操作程序1目的：臨床標(biāo)本正確保存，以便必要時(shí)復(fù)查。2適用范圍：分子診斷室的所有臨床檢測標(biāo)本。3負(fù)責(zé)人： 操作人： 4程序：41 處理前的標(biāo)本保存a）HBV：全血標(biāo)本可4下短期（24h內(nèi)）保存，長期保存則需分離出血清（血漿），保存于-20下。d）HCV：在1小時(shí)內(nèi)分離血清，吸取200µl，加入20u Rnasin，保存于-20。盡可能快的提取RNA。c）TB：痰或胸腹水、腦脊液、膿液標(biāo)本用于TB檢測的短期保存可置于4下，長期保存則于-20下。d）CT：標(biāo)本短期（24h內(nèi)）保存置于4下，長期保存則需在-20

39、下。42 報(bào)告發(fā)出后的標(biāo)本保存：a） 提取的核酸標(biāo)本當(dāng)天檢測可置4保存，如當(dāng)天不檢測應(yīng)置-20保存。報(bào)告發(fā)出后第二天丟棄。b） 原始血清/血漿樣本在報(bào)告發(fā)出后放入低溫冰箱-20保存1個(gè)星期，以備復(fù)查。超過1個(gè)星期保存期的標(biāo)本由室負(fù)責(zé)人酌情處理，一般按生物傳染性物品交醫(yī)院統(tǒng)一處理。c）血清/血漿標(biāo)本放置低溫冰箱保存時(shí)須有記錄，按編號順序存放，并由專人負(fù)責(zé)管理。43 特殊標(biāo)本的處理：對暫不檢測的項(xiàng)目和規(guī)定時(shí)間外收到的零散樣本，要隨時(shí)登記和交班，以免漏檢，遺失和延誤檢驗(yàn)。對特殊樣本或特殊病人的樣本，實(shí)行“首接”負(fù)責(zé)制，所謂特殊樣本是指難于采集的樣本，以及特殊病人的樣本一律實(shí)行“首接”負(fù)責(zé)制，無論那位

40、工作人員，一旦收到樣本后，均須負(fù)其責(zé)任，不得以任何借口推托，及時(shí)和正確保管和轉(zhuǎn)送樣本到有關(guān)實(shí)驗(yàn)室或有關(guān)人員，同時(shí)作交班記錄和雙簽名。對于做長期病情動態(tài)考察的病人標(biāo)本一律置于-20下長期保存，使用時(shí)再按需取出檢測。5. 本文涉及以下圖表：PCR擴(kuò)增接收標(biāo)本記錄表 拒收標(biāo)本記錄本 標(biāo)本超低溫保存記錄表 ABCD人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 PCR室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號：ABCD-3-PR-11版本/修訂號：A/0主題內(nèi)容臨床標(biāo)本采集運(yùn)送接收程序生效日期：20060808 第 24 頁 共91 頁臨床標(biāo)本的采集、運(yùn)送、接收程序1目的：規(guī)范臨床待檢標(biāo)本的正確采集、送檢和處理。2適用范圍：分子診斷室的所有臨床檢測標(biāo)本。

41、3負(fù)責(zé)人： 操作人： 4程序：41 標(biāo)本的采集411 標(biāo)本由臨床各科室接受過臨床基因擴(kuò)增檢測有關(guān)標(biāo)本采集、保存、運(yùn)輸知識培訓(xùn)的醫(yī)護(hù)人員采集并送至實(shí)驗(yàn)室。412標(biāo)本采集要求a）血液標(biāo)本：用2ml真空采集管或1.5ml高壓滅菌離心管采集血液標(biāo)本，血標(biāo)本采集后在2小時(shí)內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室（HCV采用EDTA抗凝的血漿）。離心（檢驗(yàn)單與標(biāo)本一道）后用一次性吸管吸取血清或血漿加入經(jīng)消毒的1.5ml的離心管中，編號。b）痰標(biāo)本：用帶蓋的無菌一次性塑料瓶收集清晨第一口痰標(biāo)本送檢。（對于無痰或少痰的患者，可用45加溫的100g/L NaCl水溶液霧化吸入或改變體位以使痰液易于咳出；對于小兒可以輕壓胸骨柄上方以誘導(dǎo)咳痰

42、，用消毒棉拭子刺激喉部引起咳嗽反射，用棉拭子采集標(biāo)本。）標(biāo)本在室溫下保存不能超過24小時(shí)。c）生殖道拭子：尿道或陰道分泌物由醫(yī)生用專用取樣拭子（滅菌，一次性）采集樣本，及時(shí)送檢。采集生殖道拭子標(biāo)本，要求男性病人在采樣前2小時(shí)內(nèi)不能排尿，采樣時(shí)，將棉拭子伸入男性尿道及女性宮頸口23cm，轉(zhuǎn)動一周以獲得上皮細(xì)胞。d）尿液：由病人自留尿液于無菌封閉的杯中送檢。e）腦脊液和胸腹水：由臨床醫(yī)生采集后放入消毒的試管中及時(shí)送檢。注意：所有上述用于臨床標(biāo)本采集的容器如試管或離心管，均應(yīng)使用前高壓滅菌和密封。42 標(biāo)本的運(yùn)送標(biāo)本采集后，密閉、標(biāo)（貼）姓名，應(yīng)盡可能快的送至檢測實(shí)驗(yàn)室，如運(yùn)送時(shí)間需2小時(shí)以上，必須

43、用冰盒送至實(shí)驗(yàn)室。標(biāo)本中如加入了適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑，如用于RNA測定加入4mol/L異硫氰酸胍鹽（GITC）的血清（漿）標(biāo)本和用于DNA測定的EDTA抗凝血等，則可在室溫下運(yùn)送或郵寄。45 接收451嚴(yán)格對各類樣本的查對和雙簽制度，對病房各樣本及時(shí)進(jìn)行驗(yàn)收，查對，不符合要求的樣本一律退回，并有書面記錄。452 分類驗(yàn)證4521 一般內(nèi)容進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的樣本在進(jìn)行編號、離心前，工作人員應(yīng)再次認(rèn)真查對姓名，聯(lián)號，住院號，病區(qū)床號，項(xiàng)目等。對不符合要求者應(yīng)作記錄，并及時(shí)通知采樣科室，正確及時(shí)地補(bǔ)采樣，以免延誤病人的檢測結(jié)果報(bào)告。對書寫不清楚的申請單，當(dāng)事者要及時(shí)與病房聯(lián)系(可電話)，明確受檢者姓名，住院號，性

44、別，年齡，病區(qū)，床號和檢驗(yàn)項(xiàng)目等；并作相應(yīng)記錄。4522 按檢測項(xiàng)目驗(yàn)證標(biāo)本a）HBV：所需標(biāo)本類型為未溶血的血清或血漿，注意血漿標(biāo)本所用的抗凝劑，用EDTA-K2，不可使用肝素。標(biāo)本為全血時(shí)應(yīng)及時(shí)分離出血漿保存。b）HCV：同上，但標(biāo)本為血清時(shí)，要在1小時(shí)內(nèi)分離出血清用于檢測。c）TB：晨起第一口深部痰(不能為唾液)、胸腹水、腦脊液、膿液或穿刺液。d）CT：尿道或陰道分泌物。4523 實(shí)驗(yàn)室人員對標(biāo)本進(jìn)行查驗(yàn)，出現(xiàn)下表中不合要求的情況時(shí)，應(yīng)拒收標(biāo)本，登記并告知相關(guān)科室。類別拒收原因1未正確使用抗凝劑的標(biāo)本造成凝血的標(biāo)本2嚴(yán)重溶血3嚴(yán)重脂血4采血量不足（血清200uL、全血1mL） 5檢測項(xiàng)目

45、TB的標(biāo)本是唾液而不是晨痰6標(biāo)本容器破裂，標(biāo)本被污染7標(biāo)本的病人姓名、年齡、性別等與檢驗(yàn)單不相符8RNA檢測，采樣時(shí)間超過 2小時(shí)9其他可能嚴(yán)重影響檢驗(yàn)結(jié)果的原因4524 拒收程序a）對拒收的不合格標(biāo)本應(yīng)在拒收標(biāo)本記錄本上登記。b）填寫不合格標(biāo)本處置單，并隨同申請單送返送檢科室。c）必要時(shí)電話告之相關(guān)科室醫(yī)生或護(hù)士。5. 本文涉及以下圖表：PCR擴(kuò)增接收標(biāo)本記錄表 PCR擴(kuò)增拒收標(biāo)本記錄表 ABCD人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 PCR室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號：ABCD-3-PR-12版本/修訂號：A/0主題內(nèi)容PCR生物安全防護(hù)措施生效日期：20060808 第 25 頁 共91 頁P(yáng)CR生物安全防護(hù)措施1目的

46、：預(yù)防工作人員在實(shí)驗(yàn)過程中被感染或污染。2適用范圍：適用于本室所有工作人員。3負(fù)責(zé)人： 操作人： 4細(xì)則：41 實(shí)驗(yàn)人員在實(shí)施生物防護(hù)措施時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格遵守各項(xiàng)相應(yīng)的規(guī)章制度，建立起強(qiáng)烈的生物防護(hù)意識。42 每天更換廢液缸的2%戊二醛溶液，并保證2%戊二醛溶液用量為廢液缸內(nèi)總液量的五分之一左右。配置消毒液時(shí)，正確量取足量的消毒劑（用量杯，保證濃度），水的用量也要正確，缸體密封性良好。43 實(shí)驗(yàn)臺面日常清潔時(shí)使用75%的酒精擦拭。44 每區(qū)每次實(shí)驗(yàn)后紫外燈照射3060分鐘，如有需要可延長照射時(shí)間。45 所有來自病人的血液或體液標(biāo)本均應(yīng)視作傳染源，因此在標(biāo)本的采集、運(yùn)輸過程中，標(biāo)本容器應(yīng)完好無泄漏。4

47、6 處理標(biāo)本時(shí)應(yīng)穿工作服、戴手套，以免沾上皮膚。如手或其它部位的皮膚沾上血液或體液標(biāo)本以及試劑，應(yīng)立即沖洗干凈。有下列情況之一者，需另外消毒：手接觸有傳染性的微生物，水龍頭、水池肥皂可能被污染，工作服可能被大量細(xì)菌污染。消毒劑可用“84”消毒液。47 在實(shí)驗(yàn)過程中，病人標(biāo)本（血液、體液）或試劑不慎濺入眼內(nèi)應(yīng)立即用清水洗。48 實(shí)驗(yàn)過程中在使用針具等銳器時(shí)，盡量小心防止受傷。若被銳器刺破時(shí)，應(yīng)立即脫下手套，盡量擠壓傷處，使血流出，然后用碘酒、酒精消毒，必要時(shí)進(jìn)行預(yù)防補(bǔ)救措施。49 在實(shí)驗(yàn)過程中病人標(biāo)本（血液、體液）外漏時(shí)，應(yīng)立即用2%戊二醛滴上，濾紙或紗布蓋上半小時(shí)，然后用酒精擦洗，并用紫外燈消

48、毒。410 實(shí)驗(yàn)完畢離開時(shí)，應(yīng)脫下所有該實(shí)驗(yàn)區(qū)個(gè)人防護(hù)裝備。411 實(shí)驗(yàn)完畢后應(yīng)對實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行紫外消毒。412 遇有意外事故應(yīng)立即報(bào)告科室負(fù)責(zé)人，當(dāng)事人應(yīng)立即注射相關(guān)疫苗或進(jìn)行預(yù)防性治療，并進(jìn)行醫(yī)學(xué)觀察，嚴(yán)重者應(yīng)報(bào)告院技術(shù)負(fù)責(zé)人。5. 本文涉及以下表格紫外消毒車消毒記錄表 實(shí)驗(yàn)室清潔消毒記錄表 ABCD人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 PCR室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號：ABCD-3-PR-13版本/修訂號：A/0主題內(nèi)容PCR實(shí)驗(yàn)室化學(xué)試劑配制程序生效日期：20060808 第 26 頁 共91 頁P(yáng)CR實(shí)驗(yàn)室化學(xué)試劑配制程序1目的：保證實(shí)驗(yàn)中用到的各種溶液符合實(shí)驗(yàn)要求。2適用范圍：核酸擴(kuò)增熒光檢測實(shí)驗(yàn)室常用溶液：4%NaOH溶液、75%酒精、消毒劑（三氯異氰尿酸或 二氯異氰尿酸鈉）、2%戊二醛溶液等。3負(fù)責(zé)人： 操作人： 4程序：44 化學(xué)試劑的配制：441 用具：干燥潔凈的250ml量桶一只，1000ml量桶一只，1000ml燒杯一只，三角燒瓶兩只，天平一架，100ml塑料試劑瓶、2000ml廣口瓶各一只。442 配制步驟：4421 配制4%NaOH溶液:a）用天平稱取4克分析純的NaOH固體，置于一只三角燒瓶中。b）用250ml量桶準(zhǔn)確取100ml水，緩緩注入盛放NaOH固體的三角燒瓶中。c）搖蕩三角燒