計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 SOP-QC-1022文件名稱：計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編碼：SOP-QC-1022版本號(hào)：00起草人:日 期:審核人:日 期:批準(zhǔn)人:日 期:生效日期年 月 日頁(yè)碼第1頁(yè)，共5頁(yè)頒發(fā)部門:質(zhì)量部分發(fā)范圍: 質(zhì)量部、質(zhì)控部、檔案室目的：規(guī)范計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查的標(biāo)準(zhǔn)操作程序。范圍：本標(biāo)準(zhǔn)適用于計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查的操作程序。責(zé)任：質(zhì)控部微生物檢驗(yàn)人員負(fù)責(zé)執(zhí)行，質(zhì)控部負(fù)責(zé)人監(jiān)督實(shí)施。正文：1 概述：培養(yǎng)基質(zhì)量是影響微生物檢驗(yàn)結(jié)果的重要環(huán)節(jié)，計(jì)數(shù)培養(yǎng)基的促生長(zhǎng)能力是微生物限度檢查結(jié)果判斷的重要影響因素。2 培養(yǎng)基適用性檢查的范圍：2010年版中國(guó)藥典規(guī)

2、定微生物檢查中成品培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按處方配制的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基適用性檢查。3 試驗(yàn)用菌株 大腸埃希菌CMCC(B)44102 金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003 枯草芽孢桿菌CMCC(B)63501 白色念珠菌CMCC(F)98001黑曲霉CMCC(F)980034 試驗(yàn)用培養(yǎng)基4.1 菌液制備用培養(yǎng)基 營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基 改良馬丁培養(yǎng)基改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基4.2 適用性檢查培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基4.3 4.2中培養(yǎng)基的對(duì)照培養(yǎng)基5 試驗(yàn)用稀釋劑 0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液含0.05%（ml/ml)聚山梨酯80的0.9%氯化鈉溶液6 試驗(yàn)用儀器設(shè)

3、備6.1 恒溫培養(yǎng)箱（3035）、霉菌培養(yǎng)箱（2328）、蒸汽壓力滅菌器、凈化工作臺(tái)、電熱干燥箱、恒溫水浴鍋、振蕩器、電冰箱、天平6.2 錐形瓶、培養(yǎng)皿（9cm）、量筒、試管及塞、吸管（1ml分度0.01，10ml分度0.1）6.3 接種環(huán)、乙醇燈、乙醇棉球或碘伏棉球、火柴、記號(hào)筆、滅菌鑷子、不銹鋼藥匙、白瓷盤。7 操作步驟：7.1 菌液的制備7.1.1 接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，于3035培養(yǎng)1824h，取3035培養(yǎng)1824h的大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌營(yíng)養(yǎng)肉湯新鮮培養(yǎng)物1ml，用 0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液10倍遞增稀釋制成每1

4、ml含菌數(shù)50100cfu的菌懸液，備用。7.1.2 接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基上，于2328培養(yǎng)2448h，取于2328培養(yǎng)2448h的白色念珠菌新鮮培養(yǎng)物1ml，用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液10倍遞增稀釋每1ml含菌數(shù)50100cfu的菌懸液備用。7.1.3 接種黑曲霉菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基上，于2328培養(yǎng)57天，加入35ml0.05%（ml/ml)聚山梨酸酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫，然后，用適宜的方法吸出孢子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，用含0.05%（ml/ml)聚山梨酸酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液10倍遞增稀釋制成每1ml含孢子數(shù)50100cfu的

5、孢子懸液備用。7.2 菌液的計(jì)數(shù)（每種菌液制備2個(gè)平皿）大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的菌液1ml接種至營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，3035培養(yǎng)48h，白色念珠菌和黑曲霉菌1ml接種至改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基上，2328培養(yǎng)72h，計(jì)數(shù)。7.3 適用性檢查7.3.1 培養(yǎng)基的配制：按規(guī)定程序新鮮配制營(yíng)養(yǎng)瓊脂（被檢培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基）、玫瑰紅鈉瓊脂（被檢培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基）以及酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂（被檢培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基），滅菌后備用。7.3.2 營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的適用性檢查取7個(gè)無(wú)菌平皿，分別接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌各2皿，每皿接種1ml菌液（含菌50100cfu），另一平皿不接

6、種菌做空白對(duì)照，傾注對(duì)照營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固后于3035倒置培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)；被檢培養(yǎng)基同法操作。7.3.3 玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基的適用性檢查 取5個(gè)無(wú)菌平皿，分別接種白色念珠菌、黑曲霉菌各2皿，每皿接種1ml菌液（含菌50100cfu），另一平皿不接種菌做空白對(duì)照，傾注對(duì)照玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固后于2328倒置培養(yǎng)72h，計(jì)數(shù)；被檢培養(yǎng)基同法操作。7.3.4 酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的適用性檢查 取3個(gè)無(wú)菌平皿，分別接種白色念珠菌2皿，每皿接種1ml菌液（含菌50100cfu），另一平皿不接種菌做空白對(duì)照，傾注對(duì)照酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固后于2328倒置培養(yǎng)7

7、2h，計(jì)數(shù)；被檢培養(yǎng)基同法操作。7.4 結(jié)果判斷若被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)不小于對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的70%，且菌落形態(tài)、大小應(yīng)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落一致，則判斷該培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。8 附件：計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查記錄/報(bào)告書(shū)（SOP-QC-1022-R-01）9 變更歷史版本號(hào)變更控制號(hào)更改內(nèi)容生效日期 附件：計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查記錄/報(bào)告書(shū) SOP-QC-1022-R-01檢驗(yàn)編號(hào)： 培養(yǎng)基名稱規(guī)格批號(hào)生產(chǎn)單位配制批號(hào) 瓊脂培養(yǎng)基被檢品g/瓶對(duì)照品g/袋檢驗(yàn)日期 年 月 日 檢驗(yàn)人報(bào)告日期 年 月 日復(fù)核人檢驗(yàn)依據(jù)中國(guó)藥典2010年版微生物限度檢查法一、主要儀器設(shè)備恒溫培養(yǎng)箱 D

8、HP120 上海試驗(yàn)儀器廠霉菌培養(yǎng)箱 MJ-160BSH-II 上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司2、 菌液的制備取備用菌種的新鮮培養(yǎng)物接種至相應(yīng)的培養(yǎng)基中依法培養(yǎng)，將培養(yǎng)物用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液黑曲霉菌的培養(yǎng)物用含0.05%（ml/ml)聚山梨酸酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液，按10倍遞增稀釋制成含菌數(shù)50100cfu/ml的菌懸液。試驗(yàn)用菌種菌種傳代至菌種接種至稀釋用溶液稀釋級(jí)計(jì)數(shù)cfu/ml大腸埃希菌CMCC(B)44102第 代營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003第 代營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液枯草芽孢桿菌CMCC(B)63501第 代營(yíng)養(yǎng)肉

9、湯培養(yǎng)基0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液白色念珠菌CMCC(F)98001第 代改良馬丁培養(yǎng)基0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液黑曲霉CMCC(F)98003第 代改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基含0.05%（ml/ml)聚山梨酸酯80的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液三、適用性檢查：1、 操作： 取上述菌液（50100cfu/ml）各1ml立即注入無(wú)菌平皿中，立即傾注45 營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基 酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基15ml，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，混勻，凝固，置3035培養(yǎng)48h / 2328倒置培養(yǎng)72h，計(jì)數(shù)。另取一平皿不接種菌液作為空白對(duì)照。 同時(shí)，用相應(yīng)的對(duì)照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進(jìn)行上述試驗(yàn)。2、 記錄：培養(yǎng)溫度： ，培養(yǎng)時(shí)間： 日 時(shí) 分 日 時(shí) 分試驗(yàn)菌生長(zhǎng)情況記錄表試驗(yàn)菌株平皿號(hào)被檢培養(yǎng)基對(duì)照培養(yǎng)基回收率%被檢培養(yǎng)基與對(duì)照培養(yǎng)基菌落形態(tài)大小比較大腸埃希菌1一致不一致2平均值金黃色葡萄球菌1一致不一致2平均值枯草芽孢桿菌1一致不一致2平均值白色念珠菌1一致不一致2平均值黑曲霉菌1一致不