探討楮實(shí)提取物的體外抗氧化活性 醫(yī)學(xué)論文

1、    探討楮實(shí)提取物的體外抗氧化活性 醫(yī)學(xué)論文               摘要：  目的 探討楮實(shí)提取物的體外抗氧化活性。方法 先用80%乙醇，然后用蒸餾水對(duì)楮實(shí)進(jìn)行提取。其中醇提取物依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，水提部分經(jīng)醇沉、干燥后得到楮實(shí)粗多糖。運(yùn)用羥基（·OH）自由基體系、二苯代苦味基肼（DPPH·）自由基體系和對(duì)Fe3+的還原能力實(shí)驗(yàn)，比較楮實(shí)各提取物的抗氧化活性。結(jié)果 楮實(shí)提取物

2、對(duì)·OH自由基和DPPH·自由基均有較好的清除作用，其中總醇提取物對(duì)·OH自由基的清除能力最強(qiáng)，其IC50值為0.28 mg/ml；乙酸乙酯提取物對(duì)DPPH·自由基的清除效果最好，其IC50值達(dá)到0.08 mg/ml；各提取物對(duì)Fe3+均有較強(qiáng)的還原能力，乙酸乙酯提取物還原效果最為明顯。結(jié)論 楮實(shí)提取物具有一定的抗氧化活性，在抗衰老方面有廣泛的應(yīng)用前景。 關(guān)鍵詞： 楮實(shí)；抗氧化活性；清除自由基；還原力楮實(shí)子具有活血理氣、補(bǔ)腎清肝、明目、利尿的功效，多用于腰膝酸軟、虛勞骨蒸、頭暈?zāi)垦?、目生翳膜、水腫脹滿(mǎn)等癥1，2。一些含楮實(shí)子的經(jīng)典方藥經(jīng)多年臨床驗(yàn)證具有確

3、切的抗衰老、促智作用3。機(jī)體內(nèi)氧化自由基增加是導(dǎo)致衰老的主要原因，清除自由基可起到延年益壽的作用4。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)楮實(shí)子油及楮實(shí)子黃酮成分有顯著的抗氧化和清除及抑制氧自由基作用5；楮實(shí)子紅色素能顯著清除超氧陰離子及羥基(·OH)自由基，抑制H2O2誘導(dǎo)小鼠紅細(xì)胞溶血和肝勻漿自氧化，對(duì)肝線粒體也有保護(hù)作用6。但目前還未見(jiàn)到對(duì)楮實(shí)聚花果進(jìn)行抗氧化活性評(píng)價(jià)的報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用水楊酸法、二苯代苦味基肼自由基(DPPH·)法、Fe3+還原能力的方法對(duì)楮實(shí)不同極性溶劑提取物體外抗氧化能力進(jìn)行評(píng)價(jià)，為楮實(shí)更廣泛地應(yīng)用于醫(yī)藥和開(kāi)發(fā)新型保健品提供理論依據(jù)。1  材料與方法1.1

4、60; 材料與試劑藥材于2009年7月采自貴州省貴陽(yáng)市藥用植物園，經(jīng)貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院孫慶文老師鑒定為構(gòu)樹(shù)Broussonetia papyrifera(L.)Vent.的成熟果實(shí)。DPPH·(百靈威公司)；抗壞血酸（Vc）、無(wú)水乙醇、H2O2、水楊酸、硫酸亞鐵、鐵氰化鉀、三氯化鐵、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、三氟乙酸均為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?，乙醇為食用?jí)。1.2  儀器與設(shè)備HP?8453型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(惠普公司)；JA2003精密電子天平(上海恒平科學(xué)儀器有限公司)；DK?98?11電熱恒溫水浴鍋(天津市泰斯特儀器有限公司)。1.3  提取與制備楮實(shí)干燥粉碎，80%乙醇

5、回流提取5次，每次回流2 h，乙醇提取液減壓濃縮至無(wú)醇味，得楮實(shí)總醇提物。取適量醇提物用水混懸后依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取，各萃取液及萃取后的水層部分減壓濃縮至固體，真空干燥后得石油醚提取物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物及水層部分，作為待測(cè)樣品置于干燥器中保存。    將乙醇浸提后的藥材殘?jiān)谑覝叵聯(lián)]去乙醇，加入蒸餾水，沸水浴提取5次，每次2 h。合并水提液減壓濃縮至一定體積，加入乙醇沉淀多糖，乙醇最終濃度80%，沉淀真空干燥后即為楮實(shí)水提粗多糖，作為待測(cè)樣品置干燥器中保存?zhèn)溆谩?.4  抗氧化活性測(cè)定1.4.1  清

6、除·OH自由基7 采用Fenton反應(yīng)，利用H2O2與Fe2+混合產(chǎn)生·OH自由基，在該體系中加入水楊酸捕捉·OH自由基并產(chǎn)生有色物質(zhì)，該物質(zhì)在510 nm處有最大吸收。取各萃取物50 mg，用無(wú)水乙醇溶解并定容至25 ml；取粗多糖50 mg用蒸餾水溶解，定容至25 ml，配制得2 mg/ml的各樣品質(zhì)量濃度，再以該質(zhì)量濃度配制成所需濃度。依次加入樣品4 ml，9 mmol/L FeSO4 0.5 ml，9 mmol/L水楊酸0.5 ml，8.8 mmol/L H2O2 0.5 ml。該體系于37水浴中加熱30 min，于510 nm處測(cè)定樣品吸光度（Ai）。用

7、4 ml蒸餾水代替體系中的樣品，測(cè)定得空白吸光度（A0）。向體系中加入蒸餾水0.5 ml代替8.8 mmol/L H2O2，測(cè)定樣品本底吸光度（Aj）。每個(gè)質(zhì)量濃度樣品做3個(gè)平行，取其平均值，以Vc作陽(yáng)性對(duì)照，按下式計(jì)算清除率：K(%)=A0-(Ai-Aj)/A0×100。1.4.2  清除DPPH·自由基8 DPPH·自由基是一種穩(wěn)定的自由基，在有機(jī)溶劑中呈紫色，在517 nm波長(zhǎng)有較大吸收，當(dāng)加入抗氧化劑一部分自由基被清除，使得在該波長(zhǎng)下吸收減弱，可借此來(lái)評(píng)價(jià)物質(zhì)的抗氧化活性。取各萃取物50 mg，用無(wú)水乙醇溶解并定容至25 ml；取粗多糖50 mg

8、，用蒸餾水溶解并定容至25 ml，配制得2 mg/ml的各樣品質(zhì)量濃度，再以該質(zhì)量濃度配制成所需濃度；以無(wú)水乙醇配制0.16 mmol/L DPPH·溶液，避光保存。取3 ml待測(cè)樣品溶液加入3 ml DPPH·溶液于25水浴中加熱15 min，在517 nm測(cè)得試樣吸光度（Ai）。取3 ml蒸餾水代替樣品測(cè)得空白吸光度（A0）。向3 ml樣品中加入3 ml蒸餾水測(cè)得樣品本底吸光度（Aj），每個(gè)質(zhì)量濃度樣品做3個(gè)平行，取平均值。以Vc作陽(yáng)性對(duì)照，按下式計(jì)算清除率：K(%)=A0-(Ai-Aj)/A0×100。1.4.3  Fe3+還原能力測(cè)定9 取2.5 ml不同質(zhì)量濃度的樣品乙醇溶液，加入0.2 mol/L磷酸緩沖液2.5 ml及1%鐵氰化鉀2.5 ml，50水浴反應(yīng)20 min后急速冷卻，加入10%三氟乙酸溶液2.5 ml混勻，4 000 r/min離心10 min，取上清液5 ml，加入4 ml蒸餾水及0.1% FeCl3 1 ml，10 min后于700 nm處測(cè)