平陽(yáng)霉素局部注射對(duì)鼻息肉病息肉組織病理學(xué)的影響

1、平陽(yáng)霉素局部注射對(duì)鼻息肉病息肉組織病理學(xué)的影響                     作者：楊妙麗張向紅鄒紀(jì)東李寶樹(shù)任曉勇石季 【摘要】  目的 通過(guò)觀察平陽(yáng)霉素治療前后鼻息肉病息肉組織的病理變化情況，探討平陽(yáng)霉素治療鼻息肉病的機(jī)制。方法 應(yīng)用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的脫氧三磷酸尿苷缺口末端標(biāo)記法(TUNEL法)檢測(cè)凋亡細(xì)胞，與相鄰連續(xù)的HE染色片對(duì)位對(duì)照觀察嗜酸性粒細(xì)胞的凋亡情況。結(jié)

2、果 平陽(yáng)霉素治療前鼻息肉組織嗜酸性粒細(xì)胞表達(dá)顯著高于正常下鼻甲(P<0.01)；治療后鼻息肉組織中的嗜酸性粒細(xì)胞表達(dá)明顯低于治療前(P<0.01)；治療后鼻息肉組織中嗜酸性粒細(xì)胞的凋亡指數(shù)高于治療前(P<0.01)。結(jié)論 嗜酸性粒細(xì)胞是鼻息肉病息肉組織中主要的浸潤(rùn)炎細(xì)胞；平陽(yáng)霉素可通過(guò)促進(jìn)嗜酸性粒細(xì)胞凋亡達(dá)到治療鼻息肉病的目的。 【關(guān)鍵詞】  平陽(yáng)霉素； 鼻息肉??； 病理學(xué)影響Pathological effects on nasal polyposis tissueafter bleomycin A5 local injectionABSTRACT: Object

3、ive  To study the pathological effects on nasal polyposis tissue after bleomycin A5 local injection. Methods  Totally 119 cases of nasal polyposis specimen obtained before and after treatment with bleomycin A5 were studied with terminal deoxynucleotidyl transferasemediated dUTP nick endlab

4、eling(TUNEL). Results  The number of eosinophils in nasal polyposis specimen before treatment was significantly higher than that after treatment (P<0.01) and normal inferior turbinate concha mucosa (P<0.01). The apoptosis index(AI) of eosinophil after treatment was significantly higher th

5、an that before treatment (P<0.01). Conclusion  Eosinophil is the main infiltration cell in nasal polyposis tissue. Bleomycin A5 could cure nasal polyposis by promoting eosinophil apoptosis.KEY WORDS: bleomycin A5; nasal polyposis; pathological effect鼻息肉病為鼻部常見(jiàn)病，其治療有一定難度，息肉復(fù)發(fā)是臨床難題之一。目前認(rèn)為，嗜酸性粒細(xì)

6、胞是鼻息肉組織中主要浸潤(rùn)炎細(xì)胞，嗜酸性粒細(xì)胞及其分泌的多種細(xì)胞因子在鼻息肉的生長(zhǎng)過(guò)程中扮演著重要角色。本研究旨在通過(guò)觀察平陽(yáng)霉素局部注射治療前后的鼻息肉病患者息肉組織標(biāo)本中炎細(xì)胞數(shù)量變化特別是嗜酸性粒細(xì)胞凋亡情況，探討平陽(yáng)霉素治療鼻息肉病的機(jī)制1。1  材料與方法1.1  研究對(duì)象  選取本院2001年9月至2006年9月門(mén)診鼻息肉病患者119例，男62名，女57名，年齡最小25歲，最大82歲，平均年齡56歲。根據(jù)1997年?？跇?biāo)準(zhǔn)分型2：2型64例(其中1期19例，2期21例，3期24例)，3型55例。于治療開(kāi)始前1個(gè)月完全停用抗生素和激素類藥物。常規(guī)胸部影像學(xué)

7、檢查，排除有肺部疾患患者。1.2  治療方法  術(shù)前胸部X線檢查及血尿常規(guī)化驗(yàn)均正常者，可接受治療。取平陽(yáng)霉素(天津太河制藥有限公司生產(chǎn))1支(8mg)用20mL/L利多卡因4mL和生理鹽水4mL溶解，行息肉內(nèi)注射。首次每側(cè)注射2mg，觀察24h，如無(wú)不良反應(yīng)，從第2次起每側(cè)注射4mg，每周1次。用細(xì)長(zhǎng)針頭自息肉前端進(jìn)針，邊推藥邊緩緩向后推進(jìn)，以注藥后息肉變蒼白、腫脹為佳。每5-7d重復(fù)注射1次，5次為一療程。根據(jù)1997年?？诏熜гu(píng)定標(biāo)準(zhǔn)2，治愈57例，好轉(zhuǎn)62例，無(wú)效0例。治愈率36.8%，好轉(zhuǎn)率63.2%。對(duì)于好轉(zhuǎn)的62例，繼續(xù)行息肉摘除術(shù)治療，術(shù)中出血(術(shù)前及術(shù)中均

8、未用止血?jiǎng)?<30mL。治療后隨訪6-18個(gè)月，未見(jiàn)復(fù)發(fā)。1.3  標(biāo)本處理  分別于平陽(yáng)霉素局部注射治療前及一個(gè)療程結(jié)束后1周取鼻息肉病患者鼻息肉組織。另取108例中隔矯正術(shù)者下鼻甲黏膜組織作正常對(duì)照。取材后，標(biāo)本迅速用10%(體積分?jǐn)?shù))甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，備用。每例標(biāo)本均連續(xù)切片2片，1片進(jìn)行原位細(xì)胞凋亡檢測(cè)，另1片作HE染色，以計(jì)數(shù)嗜酸性粒細(xì)胞并與原位細(xì)胞凋亡檢測(cè)片對(duì)照。1.4  TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡  細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒1(POD)購(gòu)自武漢博士德生物技術(shù)有限公司。操作按說(shuō)明：石蠟切片常規(guī)脫蠟入水；新鮮配制3%(體積分?jǐn)?shù))乙酸室溫10

9、min，蒸餾水洗2min×3；1200稀釋Proteinase K消化8min；每張切片取TdT、DIGdUTP各1L加入18L標(biāo)記緩沖液中，37標(biāo)記2h；封閉液50L室溫30min，不洗；用封閉液1100稀釋生物素化地高辛抗體50L/片，37 30min；1100稀釋辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鏈霉卵白素液50L/片，37 30min；DABH2O2液室溫、顯微鏡下控制顯色15min左右；蘇木素復(fù)染細(xì)胞核，常規(guī)脫水、透明、中性樹(shù)膠封片。    (注：-每步完后均用0.1mol/L TBS液充分洗3min×2次)。1.5  嗜酸性粒細(xì)胞凋亡的判

10、定標(biāo)準(zhǔn)  凋亡陽(yáng)性細(xì)胞核呈棕褐色染色。與相鄰的HE染色片作對(duì)位對(duì)照觀察，辨別凋亡陽(yáng)性嗜酸性粒細(xì)胞。采用雙盲法高倍鏡(×400)下隨機(jī)計(jì)數(shù)10個(gè)視野，分別計(jì)數(shù)凋亡陽(yáng)性和陰性的嗜酸性粒細(xì)胞，并計(jì)算嗜酸性粒細(xì)胞凋亡指數(shù)(apoptosis index, AI)。AI凋亡陽(yáng)性嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)/嗜酸性粒細(xì)胞總數(shù)×100%。1.6  統(tǒng)計(jì)學(xué)分析  應(yīng)用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，治療前后炎細(xì)胞數(shù)量的變化采用配對(duì)t檢驗(yàn)，治療組與對(duì)照組間的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。2  結(jié)果2.1  治療前后鼻息肉病息肉組織中炎細(xì)胞的表達(dá)&#

11、160; 治療前、后鼻息肉組織及對(duì)照組下鼻甲黏膜中均有數(shù)量不等的嗜酸性粒細(xì)胞、漿細(xì)胞、淋巴細(xì)胞存在。治療前鼻息肉組織與對(duì)照組間嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞的數(shù)量均存在明顯差異(P<0.05)，漿細(xì)胞在兩組間無(wú)差異(P>0.05)。治療后鼻息肉組織中嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞的數(shù)量比治療前明顯減少，具有顯著性差異(P<0.01)，漿細(xì)胞數(shù)量也有減少，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，表1)。表1  鼻息肉病治療前后和正常對(duì)照組炎細(xì)胞數(shù)量的比較（略）Table 1  Effect of bleomycin treatment on inflammatory cells

12、 in nasal polyp*P<0.05 vs. control; P<0.01 vs. before treatment2.2  治療前后鼻息肉病息肉組織中嗜酸性粒細(xì)胞凋亡的改變  用TUNEL法檢測(cè)，陽(yáng)性細(xì)胞(凋亡細(xì)胞)的細(xì)胞核呈棕褐色染色。    嗜酸性粒細(xì)胞凋亡指數(shù)治療前為(20.53±7.66)%，治療后為(44.47±8.97)%。由配對(duì)t檢驗(yàn)得t=3.602，P<0.01，顯示平陽(yáng)霉素治療前后嗜酸性粒細(xì)胞凋亡指數(shù)有極顯著性差異(圖1、2)。圖1  鼻息肉病治療前嗜酸性粒細(xì)胞凋亡情況（略）Fig.1 Inflammatory cells in nasal polyp before treatmentthere were more eosinophile granulocytes and fewer apoptotic cells than the controls (TUNEL ×400)圖2  鼻息肉病治療后嗜酸性粒細(xì)胞凋亡情況（略）Fig.2 Inflammatory cells in na