維生素C注射劑的制備

1、抗壞血酸注射液的處方設(shè)計(jì)摘要：采用正交試驗(yàn)法，通過對(duì)抗壞血酸注射液制劑工藝的優(yōu)選，科學(xué)地選擇原料藥物（供注射用原料及質(zhì)量要求）、附加劑（品種、用量）及生產(chǎn)條件和生產(chǎn)成本統(tǒng)籌兼顧。從制劑的穩(wěn)定性和內(nèi)毒素檢查兩個(gè)主要方面綜合考慮，確定科學(xué)的處方和制備工藝。關(guān)鍵詞：抗壞血酸注射液；正交試驗(yàn)法；穩(wěn)定性；熱原檢查；處方；質(zhì)量控制 1、 抗壞血酸簡介1.1、理化性質(zhì)圖一、維生素CIUPAC名：2,3,4,5,6-五羥基-2-己烯酸-4-內(nèi)酯。本品為無色晶體，熔點(diǎn)：190 - 192，紫外吸收最大值：245nm，水溶性，比旋度：+20.5°至+21.5°，酸性，具有較強(qiáng)的還原性，加熱或在

2、溶液中易氧化分解，在堿性條件下更易被氧化，為己糖衍生物。1 1.2、藥理毒理作用維生素C參與氨基酸代謝、神經(jīng)遞質(zhì)的合成、膠原蛋白和組織細(xì)胞間質(zhì)的合成，可降低毛細(xì)血管的通透性，加速血液的凝固，刺激凝血功能，促進(jìn)鐵在腸內(nèi)吸收，促使血脂下降，增加對(duì)感染的抵抗力，參與解毒功能，且有抗組胺的作用及阻止致癌物質(zhì)(亞硝胺)生成的作用。每日l-4g，可引起腹瀉、皮疹、胃酸增多、胃液反流，有時(shí)尚可見泌尿系結(jié)石、尿內(nèi)草酸鹽與尿酸鹽排出增多、深靜脈血栓形成、血管內(nèi)溶血或凝血等，有時(shí)可導(dǎo)致白細(xì)胞吞噬能力降低，每日用量超過5g時(shí)，可導(dǎo)致溶血，重者可致命。孕婦應(yīng)用大量時(shí)，可產(chǎn)生嬰兒壞血病。21.3、抗壞血酸注射劑藥效學(xué)研

3、究蛋白結(jié)合率低。少量貯藏于血漿和細(xì)胞，以腺體組織內(nèi)的濃度為最高。肝內(nèi)代謝。極少數(shù)以原形物或代謝物經(jīng)腎排泄，當(dāng)血漿濃度l4g/ml時(shí)，尿內(nèi)排出量增多?？山?jīng)血液透析清除。2 2、 處方篩選實(shí)驗(yàn)證明，抗壞血酸注射液的色澤變化比含量下降敏感得多，注射劑在貯存或加熱過程中，當(dāng)透光率降至80%左右時(shí)，含量一般仍維持在95%左右，因而在篩選處方時(shí)以透光率作為考察指標(biāo)。 本文采用初篩和正交試驗(yàn)法對(duì)穩(wěn)定劑的種類和用量、溶液的PH以及制劑工藝條件作了較大量的篩選工作，經(jīng)過多次重復(fù)和對(duì)比試驗(yàn)，最后擬定以下處方。配制的抗壞血酸注射液經(jīng)過濾后，在CO2氣流下灌封于2ml曲頸安瓿中，流通蒸氣滅菌30分鐘后備用。33、處方

4、設(shè)計(jì)3.1、處方4 維生素C 50.0g 碳酸氫鈉 49.0g 焦亞硫酸鈉 2.0g L-半胱氨酸鹽酸鹽 1.0g EDTA- Na2 0.05g 注射用水 加至1000ml 制成2ml/支，共500支。3.2、處方分析維生素C ：主藥；碳酸氫鈉： pH調(diào)節(jié)劑；焦亞硫酸鈉：抗氧劑；L-半胱氨酸鹽酸鹽：抗氧劑；EDTA- Na：絡(luò)合劑；注射用水： 溶劑。3.2.1、維生素C分子中有烯二醇式結(jié)構(gòu)，顯強(qiáng)酸性，注射時(shí)刺激性大，產(chǎn)生疼痛，故加入碳酸氫鈉調(diào)節(jié)PH，以避免疼痛，并增強(qiáng)本品穩(wěn)定性。3.2.2、本品易氧化水解，原輔料的質(zhì)量，特別是維生素C原料和碳酸氫鈉，是影響維生素C注射液的關(guān)鍵?？諝庵械难鯕狻?/p>

5、溶液PH和金屬離子對(duì)其穩(wěn)定性影響較大。因此處方中加入抗氧劑、金屬離子絡(luò)合劑及pH調(diào)節(jié)劑，工藝中采用充惰性氣體等措施，以提高產(chǎn)品的穩(wěn)定性。但實(shí)驗(yàn)表明，抗氧劑只能改善本品色澤，對(duì)制劑含量變化幾乎無作用，亞硫酸鹽和半胱氨酸對(duì)改善本品色澤作用顯著。4 4、抗壞血酸穩(wěn)定性研究4.1、.不同pH值對(duì)抗壞血酸注射液質(zhì)量的影響： 稱取抗壞血酸 7.5g ，配成5溶液150ml，取樣進(jìn)行含量測定。余液分成4份、分別用化學(xué)純碳酸氫鈉（固體）調(diào)pH值原液4.0、6.0、8.0，然后分別用20ml注射器分裝于2ml安瓿中，熔封，編號(hào)放入沸水中，按表1觀察色澤變化及測定含量。 表1. pH對(duì)抗壞血酸注射液穩(wěn)定性的影響樣

6、品號(hào) PH 煮沸后不同時(shí)間的色澤變化 含 量 含量下降比例 20 40 60 0 60 （） 1 原液 2 4 3 6 4 84.2、抗氧劑的作用 稱取抗壞血酸 5.50g ，加注射用水100ml溶解，用NaHCO3(固體)調(diào)節(jié)pH至5.86.2，測定含量后，分成三份，第一份加入0.1gNaHSO3，第二份加0.5%半胱氨酸，第三份作對(duì)照。將上述溶液分別灌封于2ml安瓿中，標(biāo)記、煮沸、觀察顏色變化及含量測定，按下表記錄結(jié)果： 表2.抗氧劑的作用 樣品號(hào) 抗氧劑 煮沸后不同時(shí)間色澤變化 20 40 60 1 NaHSO3 2 半胱氨酸 3 -4.3、金屬離子的影響及金屬絡(luò)合劑的作用 微量的金屬離

7、子對(duì)維生素c注射液的主成分的分解有顯著的催化作用。其催化作用順序?yàn)椋篊u2+>Go2+>Mn2+>Zn2+>Fe2+，以Cu2+最為顯著5稱取抗壞血酸 8g ，加注射用水62ml，溶解后，用碳酸氫鈉（固體）調(diào)pH5.86.2，分別精密量取10ml，放入25ml容量瓶中，共分六份，分成三組（每組2份）按組號(hào)順序分別加入 0.0001M 硫酸銅溶液1ml、0.04ml、0ml（用刻度吸管精?。?，將其中相同一組各取出一份，再分別加入5EDTA-2Na溶液4ml，最后加注射用水至25ml，搖勻，取其中1份立即測含量，代表原始含量。然后分別灌封于2ml安瓿中，標(biāo)記放入沸水浴中觀察

8、，按表3記錄： 表3金屬離子的影響及金屬絡(luò)合劑的作用樣品號(hào) CuSO4 EDTA-2Na 煮沸后不同時(shí)間的色澤變化 含量 含量下降比例 用量 用量 20 40 60 0 60 （） 1 1ml 0ml 1ml 4ml 2 0.04ml 0ml 0.04ml 4ml 3 0ml 0ml 0ml 4ml4.4、空氣中氧的含量對(duì)抗壞血酸注射液質(zhì)量的影響稱取抗壞血酸 5.0g 用新鮮煮沸放冷的注射用水配成5的溶液100ml，用碳酸氫鈉（固體）調(diào)pH5.86.2。取樣測定含量后，將溶液分成三份，第一份于2ml安瓿中灌裝1ml溶液；封口，標(biāo)記；第二份于2ml安瓿中灌裝2ml溶液，封口標(biāo)記；第三份于2ml安

9、瓿中灌裝2ml溶液通入CO2（約5秒鐘）后立即封口，標(biāo)記，然后放入水浴鍋內(nèi)煮沸，按表4觀察色澤變化并測定含量： 表4. 氧含量對(duì)抗壞血酸穩(wěn)定性的影響樣品號(hào) 條件 煮沸后不同時(shí)間的色澤變化 含 量 含量下降比例 20 40 60 0 60 （） 1 1ml 2 2ml 3 2ml+CO2 5、內(nèi)毒素檢查6 5.1試驗(yàn)前的處理試驗(yàn)中用到的試管、西林瓶、加樣頭等玻璃用具用硫酸洗液浸泡12h后，用清水洗凈，再放入超聲波清洗器用蒸餾水清洗，最后用蒸餾水沖洗三遍并用鋁箔紙包好放入烤箱，在250的溫度下烘烤1h。5.2建立標(biāo)準(zhǔn)曲線5.2.1稀釋內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品取試劑盒內(nèi)效價(jià)為100Eu/ml工作標(biāo)準(zhǔn)品1支，

10、在100級(jí)凈化工作臺(tái)中開啟（先用砂輪畫痕，再用酒精棉球?qū)⑵款i擦凈后開啟，以后這類瓶開啟均按此法）加入1ml細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（超純水）溶解，然后用封口膜封閉瓶口，在混旋器上混合15min，混旋后得到100Eu/ml的內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品溶液。按十倍稀釋法制備內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品濃度梯度，使其最終內(nèi)毒素濃度分別為10Eu/ml、1Eu/ml、0.1Eu/ml、0.01Eu/ml稀釋系列。5.2.2制備鱟試劑溶液取出鱟試劑，分別加入0.1ml細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水，放置3min，待其充分溶解后，將它們混合在一支試管內(nèi)輕輕搖勻，待用。 取出10支定量專用小試管，分別加入0.1ml鱟試劑。5.2.3 加樣 將稀釋

11、好的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品溶液加入鱟試劑中，每試管加0.2ml，每個(gè)濃度加2管，加完后輕輕搖勻并用封口膜將試管口封好。5.2.4 反應(yīng) 將試管按順序插到反應(yīng)器中，進(jìn)行反應(yīng)，在反應(yīng)的同時(shí)可以觀察全部反應(yīng)曲線。5.2.5 數(shù)據(jù)處理 反應(yīng)結(jié)束后，保存數(shù)據(jù)，將反應(yīng)不正常的點(diǎn)剔除，生成標(biāo)準(zhǔn)曲線，相關(guān)系數(shù)r=-0.9932(r<-0.98)。5.2.6 制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的結(jié)果分析6、質(zhì)量控制7【性狀】 本品為無色至微黃色的澄明液體?！捐b別】 （1）取本品適量，加水制成1ml含維生素C 10mg的溶液，取4ml，加0.1mol/L的鹽酸溶液4ml，混勻，加0.05%亞甲藍(lán)乙醇溶液4滴，置40水浴中加熱，3分鐘內(nèi)溶液

12、應(yīng)由深藍(lán)色變?yōu)闇\藍(lán)色或完全褪色。（2） 取本品適量，加水制成1ml含維生素C 1mg的溶液為供試液；另取維生素C對(duì)照品適量，加水溶解制成1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（附錄 B）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2l，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以乙酸乙酯乙醇水（5：4：1）為展開劑，展開后，晾干，立即（1小時(shí)內(nèi)）置紫外光燈（254nm）下檢視，供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的顏色和位置應(yīng)與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)相同。（3）取本品4mL，加二氯靛酚鈉試液12滴，試液顏色即消失。8 【檢查】 pH值 取本品1瓶，按2010年版中國藥典附錄VI H進(jìn)行測定，pH應(yīng)為50 70。顏色 取本品，配

13、制成每1mL含抗壞血酸50mg的溶液，按紫外一可見分光光度法（附錄IV A）進(jìn)行測定。于420nm波長處吸收度(A)不得超過006。草酸 取本品，加水稀釋成每1ml中含維生素C 50mg 的溶液，精密量取5ml，加2mol/L醋酸溶液1ml，加氯化鈣試液0.5ml，搖勻，放置1小時(shí)，作為供試品溶液。精密稱取草酸75mg，置500ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，加2mol/L醋酸溶液1ml，加氯化鈣試液0.5ml，搖勻，放置1小時(shí)，作為對(duì)照溶液。，供試品溶液產(chǎn)生的渾濁不得濃于對(duì)照溶液（0.3%）。細(xì)菌內(nèi)毒素9 取本品，依法檢查（附錄 E），每1ml中含內(nèi)毒素的量應(yīng)小于0.020

14、EU。熱原 取每1mL中含抗壞血酸25mg(以無水物計(jì)算)的本品適量，按熱原檢查法進(jìn)行檢查，劑量按家兔體重每lkg注射2mL。5批樣品均符合規(guī)定。裝最差異、可見異物、不溶性微粒、無菌檢查 均按2005年版中國藥典(二部)相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行檢查。5批樣品均符合規(guī)定?！竞繙y定】 （1）精密量取本品適量（約相當(dāng)于Vc0.2g），加水15ml與丙酮2ml，搖勻，放置5分鐘，加稀醋酸4ml與淀粉指示液1ml，用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液顯藍(lán)色并持續(xù)30秒不褪色。每毫升碘滴定液（0.05mol/L）相當(dāng)于8.806mg的C6H8O6.（2）色譜柱為Phenomenex luna氨基柱(46 m

15、mx250 mm，5 Ixm)；流動(dòng)相為磷酸二氫鉀液和乙腈的混合液(體積比1：1)，濃度為002 molL，pH由磷酸調(diào)至30；柱溫為25 ；系統(tǒng)流速為10 rnYmin；檢測波長為245 nm。進(jìn)樣量：20L。對(duì)照品：精密稱取010 g維生素C對(duì)照品，用流動(dòng)相溶液溶解并定容至100 ml，得1 ragm1的儲(chǔ)備液，避光保存108、參考文獻(xiàn)1鄭虎.藥物化學(xué)第六版M.北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：425.2山西普德藥業(yè)有限公司.注射用維生素C說明書Z.3郭英喜，陳小林，趙榮偉等.抗壞血酸注射液新處方的篩選及穩(wěn)定性研究J.華西醫(yī)大學(xué)報(bào)1996,27（3）.4崔福德.藥劑學(xué)M.北京:人民衛(wèi)生出版,2008:85.5安登魁藥物分析第2版M.北京：人民衛(wèi)生出版社，1989： 175-176.6寧康健，洪占麗，呂錦芳.維生素C注射液細(xì)菌內(nèi)毒素含量的定量檢測J.安徽技術(shù)師范學(xué)院學(xué)報(bào).2003.17(3);209-2127國家