正交設計法優(yōu)選_牛兒苗總黃酮的提取工藝

1、 Journal of Chinese MedicinalM aterials 第32卷第7期2009年7月1 139表2方差來源A B C方差分析結果方差平方和自由度1581497303219247195613108222233參F 值考文獻均方7912515161463198顯著性1211182311893016081Zhang M , Cui S W , Cheung PCK, et al 1Antitu mor poly 233saccharides fr om mushr oom s:a revie w on their is olati on p r ocess, structur

2、al characteristics and antitu mor activity J 1Food Science&Technology,2007, 18(1 :421912L i SP, Zhang GH, Zeng Q, et al 1Hypolyce m ic activity ofpolysaccharide, with anti oxidati on, is olated fr om cultured Cordyceps m ycelia J 1Phyto m edicine, 2006, 13(6 :誤差注:F 0105(2, 2 =19100, F 0101(2, 2 =991

3、00,P AC, B 因素(提取溫度 對多糖提取率的影響具有極顯著意義, 在考察范圍內蠶蛹多糖提取工藝的最優(yōu)組合為A 3B 3C 1, 即浸提時間10h, 溫度100, 料液比110, 提取率為93178%。3小結428243313陳衛(wèi)東, 肖更生, 廖森泰1發(fā)進展J 中藥材, 1999, 22(:14, A, of insectfr om silk wor m (B o m 2J 1International Journal of B iolog 2acro m olecules, 2000, 27(1 :9921051為:提取時間10100, 料液比110, 蠶蛹多糖提取率為93178%。

4、該法雖然能將蠶蛹原料中的蠶蛹多糖基本提盡, 但需要在較高溫度下長時間提取, 因此以后的工作可考慮開發(fā)一些新型的提取技術, 使提取蠶蛹多糖的時間縮短并降低能耗。5王國基, 殷偉芬, 王俊, 等1蠶蛹多糖對小鼠免疫功能的影響J 1江蘇大學學報(醫(yī)學版 , 2007, 17(5 :373237516張惟杰1糖復合生化研究技術M1杭州:浙江大學出版社, 1999:122131正交設計法優(yōu)選牻牛兒苗總黃酮的提取工藝尹海波, 韓榮春, 姜力嘉, 王冰(遼寧中醫(yī)藥大學藥學院, 遼寧大連116600摘要目的:對老鸛草總黃酮的提取工藝進行優(yōu)化。方法:采用正交設計, 以老鸛草藥材總黃酮的提取率為考察指標, 考察乙

5、醇濃度、提取時間、乙醇用量、提取次數(shù)4個因素對提取率的影響。結果:優(yōu)化提取工藝條件為4倍量90%乙醇、提取3次、每次1h, 驗證性實驗符合標準。結論:該工藝方法經(jīng)實驗驗證穩(wěn)定、可靠、操作可控, 重現(xiàn)性好, 對進一步的工藝開發(fā)有較好的參考價值。關鍵詞牻牛兒苗; 總黃酮; 正交設計; 提取工藝中圖分類號:R28412文獻標識碼:A 文章編號:100124454(2009 0721139203牻牛兒苗為牻牛兒苗科牻牛兒苗屬的一或二年生草本植物, 為藥材老鸛草的主流商品, 占市場流通量的90%以上; 因其果實宿存花柱似鸛鳥之長喙而1得名, 商品習稱“長嘴老鸛草”。老鸛草始載于明代的滇南本草, 其富含鞣

6、質、黃酮、有機酸、揮發(fā)2油等多種化學成分, 具祛風濕、通經(jīng)絡、止瀉痢的功效。近年研究表明從該藥材中提取的黃酮類成分具有抗菌、抗病毒等功效, 臨床上用于風濕痹痛、麻木拘攣、筋骨酸痛、泄瀉痢疾等證; 此外對多種病毒的活性也具有一定的抑制性和選擇性, 并呈量效關系。為了進一步開發(fā)利用該藥材資源, 最大限度地326利用其活性物質, 本實驗在前期工作的基礎上, 對其總黃酮的回流提取工藝進行優(yōu)化選擇, 以期為老鸛草有效成分提取工藝的確定提供可靠的依據(jù), 以充分利用我國豐富的老鸛草資源。1材料與儀器收稿日期:2008208213作者簡介:尹海波(19732 , 男, 副教授, 博士, 主要研究方向為藥用植物

7、資源開發(fā)、生藥鑒定及中藥的品質評價; Tel 0411287586004, E 2mail:yhb0528sina 1com 。 1 140Journal of Chinese MedicinalM aterials 第32卷第7期2009年7月紫外可見分光光度計(UV 24802型 ; 槲皮素對照品(中國藥品生物制品檢定所提供, 批號:1107532200601 ; 緩沖液:醋酸2醋酸鈉(pH 值415 ; 顯色劑:011mol/L三氯化鋁醇溶液; 其他試劑均為分析純。藥材老鸛草研成粉末, 過40目篩, 即得。2方法與結果211提取方法的選擇21111超聲提取法:精

8、密稱取樣品2g, 置圓底燒醋酸鈉緩沖液1mL 及3%的三氯化鋁醇溶液1mL, 搖勻, 用甲醇稀釋至刻度, 放置40m in, 用第1管作空白, 在波長437nm 處測定吸收度; 以吸光度為縱坐標, 槲皮素含量為橫坐標, 得回歸方程式為y =619495x -010125, r =019996。對照品槲皮素在00112mg 范圍內線性關系良好。21212精密度考察:精密量取槲皮素對照品溶液,按“21211”項下方法處理, 重復測定6次, 吸光度平均值為014797, RS D 為0106%, 表明精密度良好。21213穩(wěn)定性考察:精密稱取老鸛草樣品, 按“21211”, 在010h 時進行測定0

9、0181%(n =。114:取老鸛草樣品, 分別按瓶中, 加入4倍量的石油醚回流提取015h, 過濾, 棄去濾液并揮干殘渣, 加入甲醇超聲提取至黃酮反應(三氯化鋁反應 陰性為止, 過濾, 濾液濃縮至小體積, 用水分散后上聚酰胺柱凈化, 先用蒸餾水洗至無色, 再用甲醇洗出總黃酮, 洗脫液濃縮至小體積, 定量轉移至50mL 容量瓶中, , 供試品溶液, 備用。21112213”項下方法制備5份樣品液, 按“21211”項下方法處理, 分別測定吸光度, RS D 為0197%(n =5 , 表明重現(xiàn)性良好。21215加樣回收率測定:取本品已知準確含量的瓶中, 加入4015h, 過濾, 棄去濾液并揮干

10、殘渣, 加入乙醇浸泡24h, 浸泡液過濾, 濃縮至小體積, 用水分散后上聚酰胺柱凈化, 先用蒸餾水洗至無色, 再用甲醇洗出總黃酮, 洗脫液濃縮至小體積, 定量轉移至50mL 容量瓶中, 用甲醇稀釋至刻度, 作為供試品溶液, 備用。21113乙醇回流法:精密稱取2g 樣品, 置圓底燒瓶中, 加入4倍量的石油醚回流提取015h, 過濾, 棄去濾液并揮干殘渣, 加入乙醇回流提取至黃酮反應(三氯化鋁反應 陰性為止, 合并濾液, 濃縮至小體積, 用水分散后上聚酰胺柱凈化, 先用蒸餾水洗至無色, 再用甲醇洗出總黃酮, 洗脫液濃縮至小體積, 定量轉移至50mL 容量瓶中, 用甲醇稀釋至刻度, 作為供試品溶液

11、, 備用。21114樣品液總黃酮的含量測定:精密量取樣品樣品2g, 精密稱定, 精密加入槲皮素對照品0102mg, 按“21113”項下方法操作, 分別測定吸光度, 平均回收率為9915%, RS D 為114%(n =3 。213正交試驗選擇提取工藝中對提取率有影響的4個因素, 即乙醇濃度(A 、乙醇倍數(shù)(B 、提取表1水平123A 乙醇濃度/%306090因素水平表B 乙醇倍數(shù)/倍468C 提取時間/h123D 提取次數(shù)/次123表2試驗號123456789k 1k 2k 3RA 11122233301204017080179201588正交試驗結果B 123123123015320154

12、90162301091C 12323131201656015990144901207D 12331223101496015630164401148液2mL, 置10mL 容量瓶中, 按“21211”項下方法進行操作, 顯色, 測定吸光度, 由回歸方程計算樣品中總黃酮含量, 結果超聲提取法、乙醇冷浸法與乙醇回流法所得樣品中總黃酮的平均含量依次為010964%、010906%、014687%, RS D 依次為114%、212%、112%(n =3 , 因為乙醇回流法提取率較高,總黃酮含量/%01183401211901215401779601498501846401631901937901806

13、3故選用該方法作為正交試驗的提取方法。212含量測定21211標準曲線的制備:精密稱取槲皮素對照品110mg, 置25mL 容量瓶中, 加甲醇適量在水浴(60 上溶解, 放冷后用甲醇稀釋至刻度, 搖勻, 制成每1mL 含0104mg 的對照品溶液, 備用。精密量取對照品0、015、110、115、210、215、310mL 置10mL 容量瓶中, 用少量甲醇稀釋, 加入pH415的醋酸2 Journal of Chinese MedicinalM aterials 第32卷第7期2009年7月1141時間(C 、提取次數(shù)(D , 每個因素選擇3個水平,4采用L 9(3 正交表進行試驗。因素與水

14、平見表1。以總黃酮的提取率為考察指標優(yōu)化提取工藝, 試驗結果見表2, 方差分析結果見表3?？梢钥闯? 各因素對提取效果的影響程度依次為A C D B , 且只有A 因素有統(tǒng)計學意義。結合生產(chǎn)中的實際情況, 得優(yōu)化提取條件為A 3B 1C 1D 3, 即用4倍量90%的乙醇提取3次, 每次1h 。表3方差來源A B 誤差C D通過正交試驗, 確定了老鸛草總黃酮的最佳提取條件為:乙醇濃度90%, 溶劑倍量4倍, 回流時間1h, 提取次數(shù)3次。工藝驗證試驗表明, 最佳工藝的提取得率高, 穩(wěn)定性好, 且工藝操作控制容易。參考文獻1國家藥典委員會1中華人民共和國藥典S1一部1北京:化學工業(yè)出版社, 20

15、05:26312周海燕1老鸛草的研究概況J 1國外醫(yī)藥植物藥分方差分析結果離差平方和01608010140106901033冊, 1996, 11(4 :16421661自由度2222均方0130400100700103450F P3尹海波, 張玲玲, 徐保利, 等14314291100041010J 1, (8 , , J 200629(6 :541254215, 等1老鸛草屬兩種老鸛草沒食子酸的含量比較研究J 1中華現(xiàn)代中醫(yī)學雜志, 2006, 2(3 :19621971注:F 0105( =00, 0(=991214A 31C 1D 3的條件進行提取,6尹海波

16、, 何靜, 王冰, 等1東北八種老鸛草沒食子酸含量019343%, 方案可行。3小結比較J 1中藥材, 2007, 30(6 :63726381穿心蓮中有效成分不同提取方法的比較研究唐睿, 李添朋, 古學軾, 李永健, 董宇靜, 溫金蓮(廣東藥學院藥科學院, 廣東廣州510006摘要目的:考察不同方法和溶劑組成對提取穿心蓮中主要有效成分的影響。方法:藥材分別采用不同的溶劑以冷浸、溫浸、熱回流、超聲輔助、微波輔助等方法提取, 高效液相色譜法測定穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯, 紫外2可見分光光度法測定總黃酮。結果:以內酯總量為指標, 提取率以85%乙醇冷浸最高, 酸水冷浸最低?？傸S酮的提取率以85%乙醇冷浸和微波輔助提取較高, 堿水提取最低。有效成分提取率隨溶劑中乙醇含量上升而增加。結論:85%乙醇冷浸提取穿心蓮中穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯和總黃酮效果最好, 微波輔助提取則充分表現(xiàn)出時間短、效率高、能耗少的特點。關鍵詞穿心蓮; 穿心蓮內酯; 脫水穿心蓮內酯; 總黃酮中圖分類號:R28412文獻標識碼:A 文章編號:100124454(2009 0721141203穿心蓮為爵床科植物穿心蓮A ndrograph is pan 2iculata (Bur m 1f 1 Nees 的干燥地上部分, 常用于感冒發(fā)熱、咽喉腫痛、泄瀉痢疾、癰腫瘡瘍、毒蛇咬傷的治療用1 。近